JJF 1836-2020 微量分光光度计校准规范-（高清版）.pdf

中华人民共和国国家计量技术规范J J F1 8 3 62 0 2 0微量分光光度计校准规范C a l i b r a t i o nS p e c i f i c a t i o nf o rM i c r o-s p e c t r o p h o t o m e t e r s 2 0 2 0-0 7-0 2发布2 0 2 1-0 1-0 2实施国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 发 布微量分光光度计校准规范C a l i b r a t i o nS p e c i f i c a t i o nf o rM i c r o-s p e c t r o p h o t o m e t e r sJ J F1 8 3 62 0 2 0 归 口 单 位:全国生物计量技术委员会 主要起草单位:中国计量科学研究院上海市计量测试技术研究院博奥生物集团有限公司 本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释J J F1 8 3 62 0 2 0本规范主要起草人:高运华(中国计量科学研究院)许 丽(上海市计量测试技术研究院)武利庆(中国计量科学研究院)王 东(博奥生物集团有限公司)梁 文(上海市计量测试技术研究院)李宝连(博奥生物集团有限公司)J J F1 8 3 62 0 2 0目 录引言()1 范围(1)2 引用文件(1)3 概述(1)4 计量特性(1)5 校准条件(2)5.1 环境条件(2)5.2 校准用标准物质及试剂(2)6 校准项目和校准方法(2)6.1 示值误差(2)6.2 重复性(2)6.3 线性和线性范围(3)7 校准结果表达(3)8 复校时间间隔(3)附录A 示值误差的不确定度评定示例(4)附录B 校准原始记录参考格式(6)附录C 校准证书(内页)参考格式(7)J J F1 8 3 62 0 2 0引 言本规范依据J J F1 0 7 12 0 1 0 国家计量校准规范编写规则的要求编制,起草中参考了J J G1 7 82 0 0 7 紫外、可见、近红外分光光度计检定规程、G B/T2 6 8 1 02 0 1 1 可见分光光度计。本规范为首次发布。J J F1 8 3 62 0 2 0微量分光光度计校准规范1 范围本规范适用于微量分光光度计的校准,对于其他类型的分光光度计仪,可参照本规范执行。2 引用文件本规范引用了下列文件:J J G1 7 82 0 0 7 紫外、可见、近红外分光光度计检定规程G B/T2 6 8 1 02 0 1 1 可见分光光度计凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本规范。3 概述微量分光光度计体积小,样品用量少(12)L,由光源、单色器、吸收池、检测器以及信号指示系统五个部分组成。原理是基于物质对不同波长光的选择性吸收和朗伯-比尔(L a m b e r t-B e e r)定律对物质进行定量分析和定性鉴别,常用于核酸与蛋白质的定性、定量分析以及菌液浓度的定量。朗伯-比尔定律的数学表达式为:A=-l g(I/I0)=-l gT=k l c 式中:A 物质的吸光度;I0 入射的单色光强度;I 透射的单色光强度;T 物质的透射比;k 物质的吸光系数;l 被分析物质的光程;c 物质的浓度。检测时,用移液器将(12)L样品滴加到检测平台上,仪器自动完成测试,显示吸光度值,给出样品(核酸、蛋白质和荧光染料)定性和定量结果。4 计量特性4.1 示值误差4.2 重复性4.3 线性和线性范围1J J F1 8 3 62 0 2 05 校准条件5.1 环境条件仪器使用允许的环境条件,温度:(1 53 5)、相对湿度:(1 08 0)%,校准过程中测量并记录环境的温度、相对湿度。5.2 校准用标准物质及试剂5.2.1 校准用标准物质校准时应采用有证标准物质,包括:D N A标准物质,其特性量值(1 0 20 0 0)n g/L,相对扩展不确定度 1 0%(k=2);R N A标准物质(1 0 20 0 0)n g/L,相对扩展不确定度1 0%(k=2)或 蛋 白 质 标 准 物 质(5 02 0 0 0)n g/L,相 对 扩 展 不 确 定度1 0%(k=2)。5.2.2 试剂电阻率达到1 8 Mc m(2 5)的蒸馏水或三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸(T E)缓冲溶液等,用于仪器空白校准用。5.2.3 移液器规格:最大量程2L、2.5L、1 0L,需检定合格。6 校准项目和校准方法6.1 示值误差选择D NA,R NA或蛋白质含量标准物质,用仪器自动设定的光程在仪器上分别测定2 6 0n m、2 8 0n m处吸光度值及对应的含量值,记录2 6 0n m(D NA或R NA)处或2 8 0n m(蛋白质)处3次含量值的算术平均数与标准值之差,按式(1)计算其示值误差。X=ni=1Xin-X0(1)式中:X 示值误差,n g/L;X0 标准值,n g/L;Xi 测定值,n g/L;n 测定次数。6.2 重复性选择D NA,R NA或蛋白质含量标准物质,用仪器自动设定的光程在仪器上分别测定2 6 0n m、2 8 0n m处吸光度值及对应的含量值,记录2 6 0n m(D NA或R NA)处或2 8 0n m(蛋白质)处重复测定6次含量值,按式(2)计算含量值标准偏差。s=ni=1Xi-X()2n-1(2)2J J F1 8 3 62 0 2 0 式中:s 标准偏差;X 6次含量测定值的算术平均值;Xi 单次测定值;n 测定的次数;i 测定的序号,i=16。6.3 线性和线性范围选择不同含量的D NA标准物质,浓度范围在(1 020 0 0)n g/L及合适浓度的R NA或蛋白质标准物质,至少5个浓度梯度,用仪器自动设定的光程在仪器上测定(2 6 0n m处和2 8 0n m处)空白和各标准物质的吸光度对应的含量值,每个浓度水平重复测定3次,计算其平均值。以系列标准物质的标称值和对应的吸光度值做标准曲线,按式(3)计算其相关系数r,根据测量结果与标准物质标准值的一致程度,给出其线性范围。r=ni=1XiYi-niXiniYiNni=1X2-ni-1X2Nni=1Y2-ni-1Y2N(3)式中:r 相关系数;X 标准物质的标称值;Y 对应的吸光度值;N 测量次数。7 校准结果表达校准记录应尽可能详尽地记载测量数据和计算结果,推荐的校准记录格式见附录B。微量分光光度计测量结果的测量不确定度应按J J F1 0 5 9.1的要求评定,不确定度评定示例见附录A。经校准的微量分光光度计应出具校准证书,校准证书应符合J J F1 0 7 12 0 1 0中5.1 2的要求。8 复校时间间隔根据实际使用情况,用户可自行确定仪器复校时间间隔,建议不超过1年。3J J F1 8 3 62 0 2 0附录A示值误差的不确定度评定示例A.1 测量模型 X=ni=1Xin-X0(A.1)式中:X 示值误差,n g/L;X0 标准值,n g/L;Xi 单次测定值,n g/L;n 测定次数。A.2 不确定度来源不确定度主要来源于以下两方面:a)重复性引入的不确定度;b)标准物质引入的不确定度。A.3 不确定度分量的评定A.3.1 重复性引入的标准不确定度u(Xi)用重复性实验数据计算标准偏差S D,测量数据及计算结果见表A.1。表A.1 重复性引入的不确定度n g/L标称值标准值X0测量值Xi1234567平均值标准偏差S D1 01 0.71 0.79.81 0.51 0.11 0.31 0.81 0.41 0.40.41 0 01 0 3.99 8.29 9.79 9.31 0 3.11 0 2.91 0 4.61 0 3.11 0 1.32.65 0 05 0 8.15 1 5.35 1 2.45 1 9.75 1 05 0 9.35 1 2.85 1 05 1 3.23.810 0 010 4 8 10 7 3.2 10 6 9 10 7 0.8 10 9 1 10 8 3.8 1 08 2.7 10 9 110 7 88.720 0 021 6 3 20 3 6.3 20 4 2.3 20 4 4.2 20 4 2.3 20 4 6.6 20 5 3.4 20 4 2.3 20 4 45.7 重复性引入的标准不确定度u(Xi)为u(Xi)=ni=1Xi-X()n-1A.3.2 标准物质引入的标准不确定度u(Xs)标准物质引入的标准不确定度由标准物质证书得到,u(Xs)=uc/k(k=2),见表A.2。4J J F1 8 3 62 0 2 0表A.2 标准物质引入的标准不确定度n g/L标称值特性量值扩展不确定度Xi标准不确定度u(Xs)1 01 0.70.40.81 0 01 0 3.94.89.65 0 05 0 8.12 54 910 0 010 4 85 41 0 820 0 021 6 39 51 9 0A.4 标准不确定度一览表标准不确定度一览表见表A.3。表A.3 标准不确定度一览表n g/L标称值测量重复性引入的不确定度u(Xi)标准物质引入的不确定度u(Xs)1 00.40.41 0 02.64.85 0 03.82 510 0 08.75 420 0 05.79 5A.5 合成标准不确定度合成标准不确定度用公式u(X)=u2(Xi)+u2(Xs)计算得到,结果见表A.4。A.6 扩展标准不确定度扩展不确定度用公式U=2u(X)计算得到,结果见表A.4。表A.4 合成标准不确定度和扩展不确定度标称浓度合成标准不确定度u(X)(n g/L)扩展不确定度U(n g/L)包含因子k1 00.61.21 0021 0 05.51.11 0125 0 02 4.75.01 01210 0 05 4.71.11 02220 0 09 5.21.91 0225J J F1 8 3 62 0 2 0附录B校准原始记录参考格式送检单位:校准日期:年 月 日仪器名称:制 造 厂:型 号:出厂编号:证书编号:环境温度:相对湿度:%1.仪器外观2.示值误差、重复性和线性测试数据标准物质标准值123备注测量值O D值测量值O D值测量值O D值线性范围在0n g/L 1 0 0n g/L的仪器,采用此组数据计算示值误差和重复性线性范围在0n g/L20 0 0n g/L的仪器,采用此组数据计算示值误差和重复性校 准 员:核 验 员:6J J F1 8 3 62 0 2 0附录C校准证书(内页)参考格式 1.示值误差标准值/(n g/L)测量值/(n g/L)示值误差/(n g/L)不确定度/(n g/L)(k=2)2.重复性 3.线性范围:以下空白。校 准 员:核 验 员:7J J F1 8 3 62 0 2 0