微生物培养和应用.pptx

微生物的类群微生物的类群原生生物：原生生物：原核生物原核生物:真菌真菌:病毒病毒:如酵母菌、霉菌如酵母菌、霉菌单细胞的动植物单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等如草履虫、单细胞藻类等微生物微生物一般个体微小，包含了除植物界和动物界一般个体微小，包含了除植物界和动物界以外的所有生物以外的所有生物无细胞结构无细胞结构真核细胞真核细胞细菌、蓝藻等细菌、蓝藻等原核细胞原核细胞一、微生物的培养基一、微生物的培养基 1 1、培养基定义：、培养基定义：培养基（培养液）是为培养基（培养液）是为人工培养微生物而制人工培养微生物而制备备的，提供适合微生物生长、繁殖或积累代谢产的，提供适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。物的营养基质。思考：微生物细胞的元素组成是什么？思考：微生物细胞的元素组成是什么？2 2、培养基的类型、培养基的类型（1 1）按物理状态分：）按物理状态分：固体培养基固体培养基 液体培养基、液体培养基、半固体培养基半固体培养基。区别区别：加入琼脂的量决定培养基的物理状态。：加入琼脂的量决定培养基的物理状态。琼脂的性质琼脂的性质：熔点：熔点：9696度度凝固点：凝固点：4040度度注意：一般细菌不能利用琼脂。注意：一般细菌不能利用琼脂。单个或者少数微生物在固体培养基表面生长繁单个或者少数微生物在固体培养基表面生长繁殖殖,可以形成肉眼可见子细胞的群体可以形成肉眼可见子细胞的群体菌落菌落固体培养基用途固体培养基用途：用于微生物：用于微生物纯化、计数、鉴定纯化、计数、鉴定菌落菌落细菌的菌落特征细菌的菌落特征因种而异。因种而异。菌落特征菌落特征是微生是微生物鉴定的重要依物鉴定的重要依据据菌苔：菌落连成菌苔：菌落连成片片 液体培养基：工业生产液体培养基：工业生产表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长半固体培养基：观察运动半固体培养基：观察运动无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)（2 2）按成分分：）按成分分：天然培养基、天然培养基、合成培养基合成培养基 半半合成培养基合成培养基。（3 3）按功能分：）按功能分：基础培养基、基础培养基、选择培养基选择培养基 鉴别培养基。鉴别培养基。基础培养基基础培养基：含有微生物生长所需的基本物质。：含有微生物生长所需的基本物质。选择培养基选择培养基：培养基：培养基加入加入某种物质或某种物质或缺少缺少某种营养物某种营养物质而质而抑制不需要的微生物生长抑制不需要的微生物生长促进需要的微生物生长。促进需要的微生物生长。举例说明：加链霉素培养基或者加青霉素培养基抑制举例说明：加链霉素培养基或者加青霉素培养基抑制细菌和放线菌的生长，筛选真菌。细菌和放线菌的生长，筛选真菌。无氮培养基抑制非固氮菌生长，筛选固氮菌无氮培养基抑制非固氮菌生长，筛选固氮菌鉴别培养基鉴别培养基：区别微生物：区别微生物 伊红伊红美蓝培养基美蓝培养基 产气杆菌菌落大、灰棕色产气杆菌菌落大、灰棕色 大肠杆菌菌落小、绿色金属光泽大肠杆菌菌落小、绿色金属光泽选择培养基和鉴别培养基的比较选择培养基和鉴别培养基的比较种类种类用途用途例例选择培选择培养基养基鉴别培鉴别培养基养基从众多微生物从众多微生物中分离中分离所需所需的的微生物微生物鉴别不同种鉴别不同种类的微生物类的微生物加入青霉素分离得加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌到酵母菌和霉菌伊红伊红美篮培养基美篮培养基使大肠杆菌的菌落使大肠杆菌的菌落呈深紫色，可以鉴呈深紫色，可以鉴别大肠杆菌别大肠杆菌几种选择培养基：加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物二、微生物生长需要条件二、微生物生长需要条件 1 1、夏天为什么食物容易腐败？、夏天为什么食物容易腐败？如何处理可以防止腐败？如何处理可以防止腐败？2 2、为什么真空包装的食品不容易腐败？、为什么真空包装的食品不容易腐败？3 3、醋酸是否具有杀菌作用？、醋酸是否具有杀菌作用？以上反应了微生物生长受到哪些条件影响？以上反应了微生物生长受到哪些条件影响？细菌细菌303037 37 霉菌霉菌252528 28 放线菌放线菌25252828 1 12d 34d 57d2d 34d 57d大肠杆菌大肠杆菌 乳酸菌乳酸菌 破伤风杆菌破伤风杆菌 大多数细菌为好氧型大多数细菌为好氧型霉菌霉菌 5.05.06.0 6.0 细菌细菌6.56.57.5 7.5 放线菌放线菌 7.57.58.58.5三、三、培养基的营养物质培养基的营养物质1 1、水水2 2、碳源碳源（提供碳元素的物质）（提供碳元素的物质）3 3、氮源氮源（提供氮元素的物质）（提供氮元素的物质）4 4、无机物无机物（无机盐）（无机盐）5 5、生长因子生长因子（微生物生长不可缺少的微量（微生物生长不可缺少的微量有机物。如维生素、含氮碱基）有机物。如维生素、含氮碱基）碳源碳源可作为碳源的物质有可作为碳源的物质有:a.a.含碳无机物含碳无机物:b.b.含碳有机物：含碳有机物：蛋白质蛋白质脂肪酸脂肪酸不同微生物所利用的碳源不同不同微生物所利用的碳源不同a.异养型微生物异养型微生物的碳源为的碳源为b.自养型微生物自养型微生物的碳源为的碳源为碳酸盐碳酸盐 碳酸氢盐碳酸氢盐二氧化碳二氧化碳糖类（主要）糖类（主要）含碳有机物（有机碳）含碳有机物（有机碳）含碳无机物（无机碳）含碳无机物（无机碳）氮源氮源可作为氮源的物质有可作为氮源的物质有:a.a.含氮无机物：含氮无机物：b.b.含氮有机物：含氮有机物：蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏尿素尿素氮气氮气氨气氨气硝酸盐硝酸盐铵盐铵盐注意：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、麦芽汁等天然营养物质中既含有碳源又同时含有氮源、生长因子等营养要素1 1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是 A A 光合细菌光合细菌 B B 根瘤菌根瘤菌 C C 硝化细菌硝化细菌 D D 乳酸菌乳酸菌2 2、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源是、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源是 A A 糖、有机酸等糖、有机酸等 B B 二氧化碳、碳酸盐二氧化碳、碳酸盐 C C 蛋白质蛋白质 D D 无机氮化物无机氮化物A.CA.C 下表关于四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢的类型，描述正确的是硝化细菌硝化细菌乳酸细菌乳酸细菌根瘤菌根瘤菌衣藻衣藻能源NH3乳糖固定N2光能碳源CO2糖类糖类CO2氮源NH3N2N2NO2-新陈代谢类型自养需氧型 异养厌氧性 异养厌氧性 自养需氧型1000mL1000mL牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方培养基组分培养基组分提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏牛肉膏牛肉膏 5.0g5.0g碳源、氮源、磷酸盐和维生碳源、氮源、磷酸盐和维生素素蛋白胨蛋白胨蛋白胨蛋白胨 10.0g10.0g 氮源和维生素氮源和维生素NaCl 5.0gNaCl 5.0g 无机盐无机盐HH2 2O O 定容至定容至定容至定容至1000ml1000ml 氢元素、氧元素氢元素、氧元素（2 2）特殊营养：）特殊营养：生长因子生长因子 细菌生长必需，而往往自身不能合成的细菌生长必需，而往往自身不能合成的化合物，如化合物，如维生素、某些氨基酸、碱基维生素、某些氨基酸、碱基等等（3 3）pHpH、氧气等要求、氧气等要求四：营养基配制的原则1：目的要明确目的要明确 配制培养基要根据配制培养基要根据 培养的微生物、培养培养的微生物、培养的目的、培养基的用途来确定培养基的化的目的、培养基的用途来确定培养基的化学成分、物理状态。学成分、物理状态。2：营养要协调营养要协调3：PH要适宜要适宜 五、五、培养基的配制过程培养基的配制过程（一）、细菌培养基的配制（一）、细菌培养基的配制1.1.计算计算:100ml:100ml蒸馏水中各物质的量。蒸馏水中各物质的量。2.2.称量称量：注意牛肉膏的粘稠度大。：注意牛肉膏的粘稠度大。3.3.溶化溶化：牛肉膏连同称量纸一同放入牛肉膏连同称量纸一同放入 不断搅拌不断搅拌4.4.调节调节PH:PH:7.07.27.07.2思考：判断该培养基的作用是什么？思考：判断该培养基的作用是什么？加热、溶化 5.5.分装：分装：培养基高培养基高度度1/51/5 不要污染不要污染试管口试管口 棉塞塞紧棉塞塞紧6 6、包扎包扎 3-5 3-5支支试管扎成试管扎成一捆，外一捆，外包一层牛包一层牛皮纸，用皮纸，用线扎好。线扎好。思考：灭菌的温度、压力、时间分别是多少？思考：灭菌的温度、压力、时间分别是多少？8.8.搁置斜面搁置斜面/倒平板倒平板（斜面的长度不超过试管的（斜面的长度不超过试管的1/2)1/2)图中哪些措施是防止杂菌污染的？图中哪些措施是防止杂菌污染的？培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到5050度左右时，才能用来度左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？刚刚不烫手。刚刚不烫手。为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？防止瓶口附近的微生物污染培养基防止瓶口附近的微生物污染培养基平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？使培养基表面的水更好的挥发，防止皿盖上水使培养基表面的水更好的挥发，防止皿盖上水珠落入培养基珠落入培养基在倒平板的过程中，不小心将培养基溅在皿盖与在倒平板的过程中，不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？空气中的微生物会在皿盖与皿底之间的培养基空气中的微生物会在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，最好不要用该培养基培养微生物。上滋生，最好不要用该培养基培养微生物。六、无菌操作六、无菌操作1 1、获得纯净培养物的关键：、获得纯净培养物的关键：2 2、无菌操作、无菌操作 避免杂菌感染操作对象的操作过程避免杂菌感染操作对象的操作过程3 3、哪些地方有菌可能导致菌体感染？、哪些地方有菌可能导致菌体感染？操作者操作者 培养基、接种工具、器皿培养基、接种工具、器皿 空间空间 防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵4 4、灭菌和消毒、灭菌和消毒 消毒：消毒：温和的因素杀死一部分对人体有害的微温和的因素杀死一部分对人体有害的微生物。生物。举例：煮沸，举例：煮沸，70%70%酒精溶液酒精溶液 问题：一段时间后为什么会腐败？问题：一段时间后为什么会腐败？不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子 灭菌灭菌：强烈的因素杀死所有微生物，强烈的因素杀死所有微生物，包括芽包括芽孢和孢子。孢和孢子。思考：哪些因素可以灭菌、消毒？思考：哪些因素可以灭菌、消毒？物理物理高温、紫外线高温、紫外线 化学化学酒精、氯气、石碳酸酒精、氯气、石碳酸 常用的灭菌方法 种类种类 主要方法主要方法 应用范围应用范围 灼烧灭菌酒精灯火焰灼烧接种针、接种环或其他金属用具，接种过程中的试管口、三角瓶口 干热灭菌法电热鼓风干燥箱160170加热12h培养皿、试管、移液管等玻璃制品和金属制品不适宜用其他方法灭菌而又耐高温的物品 高压蒸汽灭菌压力100Kp、121维持15 30分钟培养基及多种器材、物品常用的消毒方法种类种类主要方法主要方法应用范围应用范围 巴氏消毒法6085下处理3035分钟、牛奶、啤酒、果汁等不宜高温灭菌的液体 煮沸消毒法100沸水浴日常食品、灌装食品 紫外线消毒法30W紫外线灯照射30分钟接种室空气 化学药物消毒法体积分数70%75%的酒精、碘酒、来苏水等皮肤、伤口、动植物组织表面的消毒思考：以下应当用何种方法灭菌、消毒？思考：以下应当用何种方法灭菌、消毒？操作者操作者 培养基培养基 接种工具接种工具 器皿器皿 空间空间 牛奶牛奶手用酒精消毒手用酒精消毒高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌灼烧灼烧干热灭菌干热灭菌紫外线紫外线巴氏消毒巴氏消毒70707575度度30min 8030min 80度度15min15mina.a.灼烧灭菌灼烧灭菌 微生物的接种工具微生物的接种工具 (接种接种环、接种针、试管口环、接种针、试管口)或或其他金属用具直接在火焰其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧的充分燃烧层灼烧b.b.干热灭菌干热灭菌 160160170 170；1 12h2h能耐高温的需要保持干能耐高温的需要保持干燥的物品燥的物品(玻璃器皿玻璃器皿)c.c.高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 100kPa 121 100kPa 121 15-30min15-30min通常用于培养基的灭菌通常用于培养基的灭菌总结：无菌技术总结：无菌技术 1 1、实验操作空间、操作者、衣着和手要、实验操作空间、操作者、衣着和手要 和和 。2 2、将用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基、将用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基等进行等进行 。3 3、为了避免周围环境中微生物污染，实验操作应、为了避免周围环境中微生物污染，实验操作应在在 附近进行。附近进行。4 4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。周围物品相接触。清洁清洁灭菌灭菌酒精灯酒精灯消毒消毒七、七、接种技术接种技术 无菌无菌条件下将微生物条件下将微生物接入培养基接入培养基的操作过程称的操作过程称为接种。为接种。1 1、接种工具、接种工具2、常用的接种方法、常用的接种方法斜面划线法斜面划线法做什么准备？做什么准备？点燃酒精灯点燃酒精灯斜面向上斜面向上斜面划线接种的操作过程斜面用什么接种？斜面用什么接种？接种环如何灭菌？接种环如何灭菌？取棉塞（不放到桌面？）取棉塞（不放到桌面？）试管口灭菌试管口灭菌挑取少量菌体挑取少量菌体从里到外轻轻划从里到外轻轻划“S S”型曲线型曲线，不，不要划破培养基要划破培养基试管口通过火焰，塞紧试管口试管口通过火焰，塞紧试管口放在放在3737度恒温箱中培养度恒温箱中培养24h24h稀释稀释涂布涂布平板法平板法包括涂抹平板法和混合平板法包括涂抹平板法和混合平板法涂抹平板法涂抹平板法混合平板法混合平板法 从哪里可以获得微生物呢？从哪里可以获得微生物呢？微生物的大本营：土壤微生物的大本营：土壤 从众多微生物中分离某种微生物有什么方法从众多微生物中分离某种微生物有什么方法？原理：原理：根据微生物所需营养物质、氧气、根据微生物所需营养物质、氧气、pHpH不同利用选择性培养基选择。不同利用选择性培养基选择。对微生物进行分离的培养基是？（对微生物进行分离的培养基是？（固体培养基）固体培养基）固体培养基上不同菌的区别是什么？（菌落）固体培养基上不同菌的区别是什么？（菌落）菌落作用：菌落作用：微生物分类、鉴定的依据微生物分类、鉴定的依据分离微生物的方法分离微生物的方法：平板划线法平板划线法和和稀释涂抹平稀释涂抹平板法板法八、微生物的分离、数量测定八、微生物的分离、数量测定平板划线分离微生物的原理平板划线分离微生物的原理：连续划线。由于划：连续划线。由于划线后，线条末端的细菌的数目比线条起始处要少，线后，线条末端的细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能随着划线次数的增加而逐步减少，最终能 得到由得到由单个细菌繁殖而来的菌落。单个细菌繁殖而来的菌落。注意事项：注意事项：第一步以及每一次划线之前和划线结第一步以及每一次划线之前和划线结束后都要灼烧接种环。灼烧接种环要冷却后再划束后都要灼烧接种环。灼烧接种环要冷却后再划线。每次划线之间灼烧接种环的目的是杀死上一线。每次划线之间灼烧接种环的目的是杀死上一次划线残留的菌种，使下一次划线的菌种直接来次划线残留的菌种，使下一次划线的菌种直接来至于上一次划线的末端，使每一次划线的菌种数至于上一次划线的末端，使每一次划线的菌种数目减少。目减少。平板划线的几种方法平板划线的具体操作：平板划线的具体操作：A.A.从试管中取菌从试管中取菌问题：每次划线后要灼烧接种问题：每次划线后要灼烧接种环，目的是什么？环，目的是什么？灭菌灭菌问题：每次划线的起点有什么问题：每次划线的起点有什么特点？特点？问题：上述结果反应了什么情况？问题：上述结果反应了什么情况？问题：可对菌液如何处理？问题：可对菌液如何处理？稀释涂布平板法分离微生物的原理：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂平板表面，经过培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，在培养皿表面形成单个菌落。2.2.涂布平板法涂布平板法操作过程操作过程 取少量菌液（0.5ml）在酒精灯火焰附近滴加到平板表面从酒精溶液中取出涂布器，把涂布器上面粘附的酒精在酒精火焰上引燃灭菌把用涂布接种的培养皿在37度恒温条件下培养12天取出在酒精灯火焰附近，用冷却的涂布器把菌液涂布均匀 主题：主题：分离土壤中分解尿素的微生物分离土壤中分解尿素的微生物1 1、原理：、原理：分离：以分离：以尿素为唯一氮源尿素为唯一氮源的选择性培养的选择性培养基进行选择。基进行选择。计数方法：计数方法：稀释涂抹平板法稀释涂抹平板法2 2、实验步骤：、实验步骤：思考：如何将菌液由思考：如何将菌液由1 1倍稀释成倍稀释成1010-6-6？注意事项：使用的水有何要求？注意事项：使用的水有何要求？用移取菌液的移液管是否要灭菌？用移取菌液的移液管是否要灭菌？本课题知识小结本课题知识小结: