微生物发酵机理.pptx

13.如同时存在两种以上基质，微生物首先合成这样的酶，即用来异化可维持更快的生长的化合物；只有这样的化合物被利用完后才开始合成异化第二种化合物的酶。4.如生长在含有单一有机化合物作为能源的合成培养基中，微生物合成所有大分子前体的速率同大分子利用的速率配合很好。21.微生物代谢调节的部位（1）通道；受ATP、透酶活性的调节。（2）通量；原核生物中有两种方式：调节现有酶量；改变已存酶分子的活性。（3）限制其基质有形的接近。1）真核微生物定位在相应细胞器上；细胞器各行使某种特异的功能；）真核微生物定位在相应细胞器上；细胞器各行使某种特异的功能；2）原核微生物在细胞内划分区域集中某类酶行使功能：）原核微生物在细胞内划分区域集中某类酶行使功能：与呼吸产能代谢有关的酶位于膜上；与呼吸产能代谢有关的酶位于膜上；蛋白质合成酶和移位酶位于核糖体上；蛋白质合成酶和移位酶位于核糖体上；同核苷酸吸收有关的酶在同核苷酸吸收有关的酶在G-菌的周质区。菌的周质区。第一节调节的生化基础3酶的调节机制酶的活性调节酶的合成调节效应物外界中间代谢变构蛋白活性改变调节蛋白（结构基因附近）41.通过控制基因的酶生物合成调控（1）酶的诱导合成（2）酶的阻遏合成：终产物反馈阻遏；分解代谢产物阻遏；代谢互锁。2.酶活性的控制（1）终产物的抑制或激活；（2）酶原的活化；（3）通过辅酶水平活性调节53.通过细胞膜透性的调节6第二节酶生物合成调控一、酶的诱导酶合成与环境诱导酶：淀粉酶；蔗糖酶组成酶：例如把葡萄糖转化为丙酮酸的酶。诱导酶：eg时间酶的比活力乳糖大肠杆菌的半乳糖苷酶和半乳糖苷透过酶合成71.诱导酶合成的特性和意义诱导酶分解代谢酶类：糖、蛋白、芳香族化合物的降解。合成代谢酶类：细胞色素、细菌叶绿素例如：Karstron的研究：肠膜状明串珠菌预培养基糖种类能发酵葡萄糖乳糖阿拉伯糖葡萄糖+-乳糖+-阿拉伯糖+-+不含糖+-8合成诱导例子：酵母菌在有氧的环境中会生成细胞色素，但在无氧时细胞色素消失，再回到有氧条件下，有会合成细胞色素。紫色细菌的叶绿素再黑暗中消失，见光后又会恢复合成能力。组成酶和诱导酶对不同菌株是不同的：例如：半乳糖苷酶在大肠杆菌K12菌株中为诱导酶，而在其一个突变菌株中为组成酶9酶的诱导对微生物的意义：n.利于分解底物，吸收营养物质；.加强了微生物对环境的适应能力；避免了生物合成的原料和能量的浪费。102.酶诱导的机制Monod 和Cohn（1952）在研究大肠杆菌半乳糖苷酶适应性时发现：酶的底物（乳糖）结构类似物甲基 D硫代半乳糖苷可以诱导半乳糖苷酶的生成；苯基 D半乳糖苷，不能诱导，但能作为底物。11Monod和Jacob（1961）提出操纵子学说操纵子(Operan)启动基因操纵基因结构基因12乳糖操纵子模型乳糖操纵子模型13诱导酶如何变成组成酶？改变调节基因改变操纵基因？酶诱导的两种情况同时诱导；主要存在于较短的代谢途径中，合成这些酶的基因由同一个操纵基因控制。例如乳糖加到E.coli培养基中中，可同时诱导：半乳糖苷酶、半乳糖苷透过酶、半乳糖苷转乙酰酶。14顺序诱导酶第一个酶的底物诱导第一酶的产生，第一个酶的产物诱导第二个酶的产生二、酶合成的阻遏（Enzyme repression)阻遏：在某代谢途径中，当末端产物过量时，微生物的调节体系就会阻止代谢途径中包括关键酶在内的一系列酶的合成，从而彻底控制代谢，减少末端产物的生成。15阻遏酶（Reressible enzyme):合成可被阻遏的酶.(一)、末端代谢产物阻遏（End-product repression)常见于：氨基酸、核苷酸、维生素的合成途径。途径：同时阻遏合成途径中所有酶的合成。16例如：在大肠杆菌的培养基中加入精氨酸，细胞数量、总蛋白含量以及合成精氨酸酶系含量的变化。细胞数量总蛋白含量精氨酸酶系含量精氨酸相对量时间直线反应：天冬氨酸高丝氨酸胱硫醚高半胱氨酸甲硫氨酸17末端产物对各个酶的抑制合成程度是否相同？这种问法正确吗？对于分支代谢途径，末端产物的阻遏又会怎样呢？在分支代谢途径中，反馈调节的情在分支代谢途径中，反馈调节的情况较为复杂，为了避免在一个分支上的况较为复杂，为了避免在一个分支上的产物过多时不致同时影响另一分支上产产物过多时不致同时影响另一分支上产物的供应，微生物发展出多种调节方式。物的供应，微生物发展出多种调节方式。主要有：主要有：同功酶的调节，同功酶的调节，顺序反馈，顺序反馈，协同反馈，积累反馈调节等。协同反馈，积累反馈调节等。18阻遏机制：（色氨酸操纵子）调节基因远离操纵子，所表达的调节蛋白不能直接与操纵基因结合，结构基因的表达能顺利进行。调节蛋白称为原阻遏物（prerepressor)。当代谢产生末端代谢产物色氨酸后，色氨酸作为效应物与原阻遏物结合，使后者发生变构效应，并能与操纵基因结合，从而阻止了结构基因的表达。19分支酸分支酸邻氨基苯甲酸邻氨基苯甲酸磷酸核糖邻氨基磷酸核糖邻氨基苯甲酸苯甲酸羧苯氨基脱氧核糖磷酸羧苯氨基脱氧核糖磷酸吲哚甘吲哚甘油磷酸油磷酸色氨酸色氨酸 （二）分解代谢产物阻遏1.二次生长现象和葡萄糖效应时间生长速度大肠杆菌在葡萄糖和乳糖混合碳源上生长。20第一阶段：半乳糖苷酶活性很低。第二阶段：半乳糖苷酶活性提高。葡萄糖干扰其他碳源利用的现象称为“葡萄糖效应”。葡萄糖效应并非由葡萄糖直接引起，而是由葡萄糖分解代谢过程中某种代谢产物引起阻遏了能够产生该物质酶的合成。例如：组氨酸酮戊二酸+氨气组氨酸裂解酶葡萄糖酮戊二酸产气杆菌211961年生物学会议第一次正式命名“分解代谢阻遏物”这个术语代替“葡萄糖效应”分解代谢阻遏物不仅在葡萄糖上，其他碳源和氮源也可以发生相同作用。例如固氮，当NH4+存在时，固氮酶合成受到阻遏。2.分解代谢产物的阻遏机制22乳糖操纵子模型解释分解代谢物的阻遏机制乳糖操纵子模型解释分解代谢物的阻遏机制 乳糖操纵子的启动基因内，除乳糖操纵子的启动基因内，除RNARNA聚合酶结合位点外，还聚合酶结合位点外，还有一个称为有一个称为CAP-cAMPCAP-cAMP复合物的结合位点复合物的结合位点 腺苷酸环化酶腺苷酸环化酶cAMP透过酶体外23 cAMP cAMP 是环腺苷酸，是环腺苷酸，CAPCAP是降解物基因活化蛋白（又称为是降解物基因活化蛋白（又称为cAMPcAMP受体蛋白，受体蛋白，CRPCRP），当），当CAPCAP与与cAMPcAMP结合后，就会被活化。结合后，就会被活化。CAP-cAMP CAP-cAMP复合物又会激活启动基因，并使复合物又会激活启动基因，并使RNA RNA 聚合酶与启聚合酶与启动基因结合。动基因结合。乳糖与葡萄糖同时存在时，因为分解葡萄糖的酶类属于乳糖与葡萄糖同时存在时，因为分解葡萄糖的酶类属于组成酶，能迅速地将葡萄糖降解成某种中间产物（组成酶，能迅速地将葡萄糖降解成某种中间产物（X X），），X X既会阻止既会阻止ATPATP环化形成环化形成cAMPcAMP，同时又会促进，同时又会促进cAMPcAMP分解成分解成AMPAMP，从而降低了，从而降低了cAMPcAMP的浓度，继而阻遏了与乳糖降解有关的的浓度，继而阻遏了与乳糖降解有关的诱导酶合成。诱导酶合成。只有当葡萄糖耗尽后，只有当葡萄糖耗尽后，cAMPcAMP才能回升到正常浓度，操纵子才能回升到正常浓度，操纵子重新开启，并开始利用乳糖作为碳源，形成菌体的二次生重新开启，并开始利用乳糖作为碳源，形成菌体的二次生长。长。24生成的实践意义：例如在青霉素发酵生产中用乳糖代替葡萄糖提高青霉素产量；如果培养基中必须添加引起分解阻遏的物质时，可采用分批添加或连续流加方式。第二节酶活性的调节25通通过过改改变变现现成成的的酶酶分分子子活活性性来来调调节节新新陈陈代代谢谢的的速速率率的的方式。是酶分子水平上的调节，属于精细的调节。方式。是酶分子水平上的调节，属于精细的调节。一调节方式：包括两个方面：一调节方式：包括两个方面：1、酶酶活活性性的的激激活活：在在代代谢谢途途径径中中后后面面的的反反应应可可被被较较前面的反应产物所促进的现象；常见于分解代谢途径。前面的反应产物所促进的现象；常见于分解代谢途径。如如：粗粗糙糙脉脉孢孢霉霉的的异异柠柠檬檬酸酸脱脱氢氢酶酶的的活活性性受受柠柠檬檬酸促进。酸促进。粪粪链链球球菌菌的的乳乳酸酸脱脱氢氢酶酶活活性性可可被被1，6二二磷磷酸酸果糖激活。果糖激活。底物对酶的影响称为前馈；产物对酶的影响称为反馈262酶活性的抑制：包括：竞争性抑制和反馈酶活性的抑制：包括：竞争性抑制和反馈抑制。抑制。概念：反馈：指反应链中某些中间代谢产物概念：反馈：指反应链中某些中间代谢产物或终产物对该途径关键酶活性的影响。或终产物对该途径关键酶活性的影响。凡使反应速度加快的称正反馈；凡使反应速度加快的称正反馈；凡使反应速度减慢的称负反馈（反馈凡使反应速度减慢的称负反馈（反馈抑制）；抑制）；反馈抑制反馈抑制主要表现在某代谢途径的末端主要表现在某代谢途径的末端产物过量时可反过来直接抑制该途径中第一产物过量时可反过来直接抑制该途径中第一个酶的活性。主要表现在氨基酸、核苷酸合个酶的活性。主要表现在氨基酸、核苷酸合成途径中。成途径中。特点：作用直接发生在蛋白质水平上、效果特点：作用直接发生在蛋白质水平上、效果快速、末端产物浓度降低时又可解除。快速、末端产物浓度降低时又可解除。27抑制作用机制变构酶(allostric enzymes)学说：受反馈抑制的酶一般是变构酶，酶活力的调节实质就是变构酶的变构调节（活性或催化中心）（变构部位）28变构酶的作用程序：专一性的代谢物（变构效应物）与酶蛋白表面的特定部位（变构部位）结合酶分子的构象发生变化活性中心的修饰抑制或促进酶的活性293.能荷调节能荷不仅能调节分解代谢形成能荷不仅能调节分解代谢形成ATPATP的酶活性，也能的酶活性，也能调节合成代谢利用调节合成代谢利用ATPATP的酶活性。的酶活性。(EC)高能荷的抑制异柠檬酸脱氢酶和磷酸果糖激酶等柠檬酸和ATP都是磷酸果糖激酶活性的抑制剂，从而限制了葡萄糖的利用速度。有氧条件下，大量合成ATP，细胞能荷增加异柠檬酸脱氢酶受到ATP抑制，导致柠檬酸的积累30三磷酸腺苷三磷酸腺苷(ATP)(ATP)是为许多反应提供能量的高能磷酸化物是为许多反应提供能量的高能磷酸化物 ,细细胞中的胞中的ATPATP、ADPADP和和AMPAMP含量处于相对平衡的状态含量处于相对平衡的状态细胞中的细胞中的能量状态能量状态能荷（能荷（Energy chargeEnergy charge）能荷（能荷（Energy chargeEnergy charge）来表示细胞中的能量状态。能荷）来表示细胞中的能量状态。能荷（ECEC）可用下式来表示：）可用下式来表示：系统中只有系统中只有ATPATP时，时，ECEC值为值为1 1；只有；只有AMPAMP时，时，ECEC值等于值等于0 0。31概念：有氧条件下，发酵作用受抑制的现象（或概念：有氧条件下，发酵作用受抑制的现象（或氧对发酵的抑制现象）氧对发酵的抑制现象）。意义：合理利用能源意义：合理利用能源通风对酵母代谢的影响通风对酵母代谢的影响通风（有氧呼吸）通风（有氧呼吸）缺氧（发酵）缺氧（发酵）酒精生成量酒精生成量耗糖量耗糖量/单位时间单位时间细胞的繁殖细胞的繁殖低（接近零）低（接近零）少少旺盛旺盛高高多多很弱至消失很弱至消失巴斯德效应巴斯德效应(The Pasteur effect)现象：现象：32巴斯德效应（巴斯德效应（Pasteur effectPasteur effect）机理）机理 巴斯德在研究酵母的酒精发酵时发现：厌氧条件下酵巴斯德在研究酵母的酒精发酵时发现：厌氧条件下酵母菌进行酒精发酵，葡萄糖的消耗速度很快；而在有母菌进行酒精发酵，葡萄糖的消耗速度很快；而在有氧条件下，酵母菌进行呼吸作用，糖的消耗速度较低，氧条件下，酵母菌进行呼吸作用，糖的消耗速度较低，酒精产量也降低。酒精产量也降低。呼吸抑制发酵作用的的现象呼吸抑制发酵作用的的现象 巴斯德效应的本质是能荷调节。巴斯德效应的本质是能荷调节。33在厌氧条件下，酵母菌无法通过呼在厌氧条件下，酵母菌无法通过呼吸链产生吸链产生ATPATP，细胞能荷较低。，细胞能荷较低。ADPADP和和AMPAMP激活磷酸果糖激酶，使利激活磷酸果糖激酶，使利用葡萄糖生产酒精的速度加快。用葡萄糖生产酒精的速度加快。34微生物的代谢调节的特性1.酶活性调节与酶量调节的区别和配合酶量的调节是基因水平，见效慢但节约生物合成的原料和能量属于粗调；活性调节在蛋白质水平上，主要是作用关键酶（一般是途径中的第一或第二个酶）为调节酶，调节直接、迅速和灵活属于细调。二者共同调节才能达到更好效果352.终产物反馈调节与终产物浓度的关系在合成途径中只有终产物达到一定浓度才引起反馈调节作用；同时低于某一浓度反馈调节作用解除。终产物反馈调节取决于终产物的浓度。3.代谢途径中反馈调节的作用点