微生物分类年.pptx

1v第一节第一节 通用分类单元通用分类单元v第二节第二节 微生物在自然界的地位微生物在自然界的地位v第三节第三节 各大类微生物的分类系统纲要各大类微生物的分类系统纲要 v第四节第四节 微生物分类鉴定的方法微生物分类鉴定的方法2第一节第一节通用分类单元通用分类单元v 分类是认识客观事物的一种基本方法。我们要认识、研究和利用各种微生物资源也必须对他们进行分类。v分类学内容涉及三个相互依存又有区别的组成部分：分类、命名和鉴定。分类、命名和鉴定。3v分类（分类（classificationclassification）是根据一定的原则（表型特征相似性或系统发育相关性）对微生物进行分群归类，根据相似性或相关性水平排列成系统，并对各个分类群的特征进行描述，以便考察和对未被分类的微生物进行鉴定；v命名（命名（nomenclaturenomenclature）是根据命名法规，给每一个分类群一个专有的名称；v鉴定（鉴定（identificationidentification或或determinationdetermination）则是指借助于现有的微生物分类系统，通过特征测定，确定未知的、新发现的或未明确分类地位的微生物所应归属分类群的过程。4一.分类单元及其等级 界界Kingdom 门门Phylum亚门亚门 纲纲Class亚纲亚纲 目目Order亚目亚目 科科Family亚科亚科 属属Genus 种种Species5二、微生物的命名规则：命名按照国际细菌命名法规，一般采用林奈氏双名法。学名=属名+种名+（首次命名人）+现在命名人+现名命名时间排斜体字排正体字（一般省略）6如：大肠杆菌:Escherichia coli(Migula)Castellani&Chalmers1919属名属名:名词,大写首字母,一般描绘主要形态或生理特征。种名种名:形容词,小写,代表一个种次要特征。未确定种名或不指特定的种时，可在属名后加sp.（表示单数）或SPP.（表示双数）表示。如如Aspergillus niger 曲霉曲霉 黑色的黑色的 黑曲霉黑曲霉 7其他其他:某属中一个种或几个种时，属后加某属中一个种或几个种时，属后加sp.或或SPP.Micrococcus sp.(spp.)一种或一批小单孢菌一种或一批小单孢菌当微生物是一个亚种或变种时，应按三名法命名既：学名=属名+种名+（subsp或var）+亚种（变种）名称排斜体排正体（可省略）排斜体（不可省略）如：椭圆酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae（subsp/var）ellipsoideus8新名称的发表新名称的发表 根据细菌命名法规的规定，有效发表新根据细菌命名法规的规定，有效发表新的细菌名称应在的细菌名称应在公开发行的刊物公开发行的刊物上进行，在菌种目上进行，在菌种目录、会议记录、会议论文摘要的均不能视为录、会议记录、会议论文摘要的均不能视为有效发有效发表表。此外，若新名称是在国际系统细菌学杂志。此外，若新名称是在国际系统细菌学杂志（IJSB）以外的其他杂志上发表的，还必须经过新）以外的其他杂志上发表的，还必须经过新名称的合格化发表，被认为合格后，在该杂志上定名称的合格化发表，被认为合格后，在该杂志上定期公布，命名日期即从公布之日算起，否则不算期公布，命名日期即从公布之日算起，否则不算合合格发表格发表，也不能取得国际上的承认。，也不能取得国际上的承认。发表新名称时，应在新名称之后加上所属新分发表新名称时，应在新名称之后加上所属新分类等级的缩写词，类等级的缩写词，如新目如新目“ord.nov.”、新属、新属“gen.nov.”、新种、新种“sp.nov.”等。等。9俗名（俗名（commonname）:普通的、通俗的、地区性的名字，具有简明和大众普通的、通俗的、地区性的名字，具有简明和大众化的优点，但往往涵义不够确切，易于重复，使用范化的优点，但往往涵义不够确切，易于重复，使用范围局限。围局限。如如绿脓杆菌：绿脓杆菌：铜绿假单孢菌铜绿假单孢菌Pseudomonas aeruginosa白念菌：白念菌：白色假丝酵母白色假丝酵母Candida albicans金葡萄：金葡萄：金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus10v常用的细菌分类术语常用的细菌分类术语v培养物（培养物（culture),culture),是指一定时间一定空间内微是指一定时间一定空间内微生物的细胞群或生长物。生物的细胞群或生长物。v种（种（species)species),是生物分类中基本的分类单元和是生物分类中基本的分类单元和分类等级分类等级。是一大群表型特征高度相似，亲缘是一大群表型特征高度相似，亲缘关系极其接近、与同属内的其他物种有明显差关系极其接近、与同属内的其他物种有明显差异的一大群菌株的总称。异的一大群菌株的总称。v 型（型（formform或或type),type),常指亚种以下的细分，当同常指亚种以下的细分，当同种或同亚种不同菌株之间的性状差异，不足以种或同亚种不同菌株之间的性状差异，不足以分为心的亚种时，可以细分为不同的型。分为心的亚种时，可以细分为不同的型。11v菌株（菌株（strain)或品系，或品系，从自然界分离得到的从自然界分离得到的任何一任何一种微生物的纯培养物种微生物的纯培养物都可以称为微生物的一个菌株；都可以称为微生物的一个菌株；用实验方法（如通过诱变）所获得的某一菌株的变异用实验方法（如通过诱变）所获得的某一菌株的变异型，也可以称为一个新的菌株，以便与原来的菌株相型，也可以称为一个新的菌株，以便与原来的菌株相区别。区别。v模式菌株：模式菌株：一个被指定为能代表一个种群的菌株，是一个被指定为能代表一个种群的菌株，是活体标本活体标本12第二节第二节微生物在自然界的地位微生物在自然界的地位 科学家估计有分类纪录的各类物种大约有150万，其中微生物超过10万种，而且其数目还在不断增加。微生物学工作者要认识、研究和利用微生物或控制有害微生物，必须对它们进行分类（classification）。131、两界系统两界系统动物界动物界 AnimaliaAnimalia：不具细胞壁，可运动，不进 行光合作用。植物界植物界 PlantaePlantae：具有细胞壁，不运动，可行光合作用。三界三界：原生生物界Protista：（E.H.Haeckel,1866年提出）14l2、五界系统R.H.Whitakker,Science,163:150-160,1969原核生物界原核生物界 MoneraMonera：细菌、放线菌等原生生物界原生生物界 ProtistaProtista：藻类、原生动物、粘菌等真菌界真菌界 FungiFungi：酵母、霉菌动物界动物界 AnimaliaAnimalia：植物界植物界 PlantaePlantae：五界系统是以细胞结构分化的等级以及和光合、吸收、摄食这三种主要营养方式有关的组织类型为基础的。六界：六界：加上病毒界。15l3.3.三界（域）系统三界（域）系统 WoeseWoese用寡核苷酸序列编目分析法对60多株细菌的16SrRNA16SrRNA序列序列进行比较后发现：产甲烷细菌完全没有作为细菌特征的那些序列，于是提出了生命的第三种形式-古细菌古细菌(archaebacteria)。随后对包括某些真核生物在内的大量菌株进行了16Sr RNA(18SrRNA)序列的分析比较，又发现极端嗜盐菌和极端嗜酸嗜热菌极端嗜盐菌和极端嗜酸嗜热菌也也和产甲烷细菌产甲烷细菌一样，具有既不同其他细菌也不同于其核生物的序列特征，而它们之间则具有许多共同的序列特征。三界三界(域域)为：为：lBacteria(Bacteria(细菌细菌)、Archaea(Archaea(古生菌古生菌)和和Eukarya(Eukarya(真核生物真核生物)。1617第三节第三节各大类微生物的分类系统纲要各大类微生物的分类系统纲要一、原核生物分类系统一、原核生物分类系统细菌鉴定手册细菌鉴定手册1.1.伯杰氏细菌鉴定手册伯杰氏细菌鉴定手册（BergeysManualofDeterminativeBacteriology）（1923-1974的1-8版）2.2.伯杰氏系统细菌学手册伯杰氏系统细菌学手册（BergeysManualofsystematicBocteriology,1984）放线菌放线菌：1.中国科学院微生物研究所编著的放线菌目分科、分属检索表。中国科学院微生物研究所编著的放线菌目分科、分属检索表。2.克拉西里尼可夫（前苏联）克拉西里尼可夫（前苏联）“细菌放线菌分类手册细菌放线菌分类手册”。3.瓦克斯曼（美）瓦克斯曼（美）“放线菌分类放线菌分类”18二、真菌的分类系统二、真菌的分类系统Ainsworth(1973)的分类系统。AinsuorthandBisbys的真菌学辞典真菌学辞典DictionaryoftheFungi,Sixth.edition,197119 1.经典鉴定分类法经典鉴定分类法 2.数值分类法数值分类法 3.化学分类法化学分类法 4.遗传分类法遗传分类法第四节第四节 微生物分类鉴定的方法微生物分类鉴定的方法20l四个水平：四个水平：l细胞的形态和习性水平：营养需求等细胞的形态和习性水平：营养需求等l细胞组分水平：细胞壁细胞组分水平：细胞壁l蛋白质水平：氨基酸蛋白质水平：氨基酸l核酸水平：碱基，核酸水平：碱基，16sRNA21l两大类方法：两大类方法：l微生物鉴定的经典方法微生物鉴定的经典方法l微生物鉴定的现代方法微生物鉴定的现代方法22菌种鉴定的共同步骤：n获得该微生物的纯培养物获得该微生物的纯培养物n测定必要的鉴定指标测定必要的鉴定指标n查找权威性的菌种鉴定手册查找权威性的菌种鉴定手册23 1.经典鉴定分类法经典鉴定分类法一、形态学和生理生化特征一、形态学和生理生化特征1 1形态学特征形态学特征 v 形态学特征始终被用作微生物分类和鉴定的重要依据之一，其中有两个重要原因：v一是它易于观察和比较，尤其是在真核微生物和具有特殊形态结构的细菌中；v 二是许多形态学特征依赖于多基因的表达，具有相对的稳定性。因此，形态学特征不仅是微生物鉴定的重要依据，而且也往往是系统发育相关性的一个标志。常用于原核生物分类鉴定的形态学特征 24个体个体:细胞形态细胞形态,大小大小,排列方式排列方式,染色染色,运动等运动等形态特征形态特征:菌落形态菌落形态营养要求营养要求:碳源碳源,氮源氮源,矿质元素矿质元素生理生化特征生理生化特征:代谢产物种类代谢产物种类,产量产量,显色反应显色反应酶酶:产酶种类和反应特征产酶种类和反应特征生态学特征生态学特征:生长温度生长温度,氧需求氧需求,酸碱度酸碱度,宿主种类宿主种类血清学反应血清学反应噬菌体的敏感性噬菌体的敏感性其他其他:全细胞蛋白的分析等全细胞蛋白的分析等25细菌的培养特征细菌的培养特征26与微生物的酶和调节蛋白质的本质和活性直接相关；代谢产物等代谢产物等营养类型；营养类型；与氧的关系；与氧的关系；对温度的适应性；对温度的适应性；对对pH的适应性；的适应性；对渗透压的适应性；对渗透压的适应性；酶及蛋白质都是基因产物；酶及蛋白质都是基因产物；对微生物生理生化特征的比较也是对微生物基因组的间接比较；测定生理生化特征比直接分析基因组要容易得多；生理生化特征生理生化特征27281 1、API API 细菌数值鉴定系统细菌数值鉴定系统2 2、Enterotube Enterotube 系统系统3 3、Biolog Biolog 全自动或手动细菌鉴定系统全自动或手动细菌鉴定系统 微型、简便、快速或自动化鉴定技术微型、简便、快速或自动化鉴定技术291、API 细菌数值鉴定系统细菌数值鉴定系统菌种菌种基本培养基基本培养基（液体）（液体）菌悬液菌悬液检测、编码、查表、鉴定检测、编码、查表、鉴定适用于适用于APIAPI鉴定细鉴定细菌有菌有700700多种多种AnalyticaProductsINC的简称。法国生物-梅里埃公司生产的细菌数值分类分析鉴定系统。约有1000种生化反应,可鉴定的细菌大于550种。目前中国各级疾病预防控制机构在细菌学检验中比较多地应用了此项技术30312、Enterotube 系统系统 不同培养基分装不同小槽中，同不同培养基分装不同小槽中，同步接种，培养后检测、查表、鉴定。步接种，培养后检测、查表、鉴定。32该装置可做下列15种试验：葡萄糖产酸产气，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶，硫化氢，靛基质，乳糖和卫矛醇发酵，苯丙氨酸脱氨酶，尿素酶和柠檬酸盐,侧金盏花醇、阿拉伯糖、山梨醇和V.P试验等试验。查阅专门设计的结果判定表。Enterotube系统系统333 3、BiologBiolog全自动或手动细菌鉴定系统全自动或手动细菌鉴定系统 在在96孔的细菌培养板上检测微生物对孔的细菌培养板上检测微生物对不同发酵性碳源利用情况进行的分类鉴定。不同发酵性碳源利用情况进行的分类鉴定。自动化、快速自动化、快速 可鉴定细菌有可鉴定细菌有11401140多种、酵母菌多种、酵母菌267267种、目种、目前已经可用于丝状真菌。前已经可用于丝状真菌。每个孔中含有每个孔中含有不同的底物不同的底物菌悬液或菌悬液或无菌水无菌水34 1.数值分类法数值分类法现代鉴定方法现代鉴定方法35即统计分类法，在即统计分类法，在200200年前年前M.AdansonM.Adanson（1727-18061727-1806，法，法国植物学家）发表的分类原理基础上结合现代计算机国植物学家）发表的分类原理基础上结合现代计算机技术发展而来的。技术发展而来的。主要观点：主要观点：在一个分类群中，其所含信息量越大，即分类所依在一个分类群中，其所含信息量越大，即分类所依据的性状越多，其分类效果也越好；据的性状越多，其分类效果也越好；顺序建立自然分类单元时，每个性状都是等权的；顺序建立自然分类单元时，每个性状都是等权的；任何两分类实体间的整体相似性，都是由每一对的任何两分类实体间的整体相似性，都是由每一对的相似性计算而来的；能够由类群间相似性的差异识相似性计算而来的；能够由类群间相似性的差异识别不同的分类实体；别不同的分类实体；如果给予有关进化途径和机制的某些假定，可以从如果给予有关进化途径和机制的某些假定，可以从组群的分类学结构或从性状相关上作出种系发生的组群的分类学结构或从性状相关上作出种系发生的推论；推论；分类学应作为一门经验科学来看待和实践；分类学应作为一门经验科学来看待和实践；数值分类学是以表象相似性为基础的。数值分类学是以表象相似性为基础的。36测定测定100100项以上的各种性状，利用计算机进行项以上的各种性状，利用计算机进行菌株的相互比较，并得出总的相似值。菌株的相互比较，并得出总的相似值。一般认为同种微生物菌株之间的相似值一般认为同种微生物菌株之间的相似值80%80%。3738细胞成分细胞成分 分析内容分析内容 在分类水平上的作用在分类水平上的作用 细胞壁细胞壁 肽聚糖结构肽聚糖结构 多糖多糖 种和属种和属 胞壁酸胞壁酸 脂肪酸脂肪酸 膜膜 极性类脂极性类脂 种和属种和属 霉菌酸霉菌酸 蛋白质蛋白质 氨基酸序列分析氨基酸序列分析 血清学比较血清学比较 属和属以上单位属和属以上单位 电泳图电泳图 酶谱酶谱 代谢产物代谢产物 脂肪酸脂肪酸 种和属种和属 全细胞成分分析全细胞成分分析 热解热解-气液色谱分析气液色谱分析 种和亚种种和亚种 热解热解-质谱分析质谱分析 2.化学分类法化学分类法39(1).DNA碱基比例的测定碱基比例的测定 DNA分子含有四种碱基：腺嘌呤、鸟胞嘧啶胸腺分子含有四种碱基：腺嘌呤、鸟胞嘧啶胸腺.DNA的的碱基碱基组成组成和和排列顺序排列顺序决定生物的遗传性状决定生物的遗传性状.每一个微生物物种的每一个微生物物种的DNA中的中的(G+C)mol%的数值是恒定的的数值是恒定的,不会随着环境及培养条件等的变不会随着环境及培养条件等的变化而变化化而变化,而且在同一个属不同种之间而且在同一个属不同种之间,GC含量不会差异太大含量不会差异太大,具有具有一定的范围一定的范围,因此可以作为判定的微生物间亲缘关系的依据因此可以作为判定的微生物间亲缘关系的依据3.遗传分类法遗传分类法40v8080年代以前螺菌属年代以前螺菌属(Spirillum)(Spirillum)不同的不同的G+CG+C含量高达含量高达38%38%66%,66%,后来伯杰氏手册后来伯杰氏手册(1984)(1984)结合其他特征已将结合其他特征已将其分为三个属其分为三个属:螺藻属、海洋螺菌属螺藻属、海洋螺菌属(Oceanospirillum)(Oceanospirillum)和和水螺菌属水螺菌属(Aquaspirillum),(Aquaspirillum),它它们的们的G+CG+C含量分别为含量分别为38%38%、42%42%51%51%和和49%49%66%;66%;v过去根据形学特征曾认为球菌属过去根据形学特征曾认为球菌属(Micrococcus)(Micrococcus)葡萄葡萄球菌属球菌属(Staphylococcus)(Staphylococcus)是关系很近的两个属是关系很近的两个属,因而因而长期放在一个科里长期放在一个科里,由于由于G+CG+C含量的差异表明它们的含量的差异表明它们的亲缘关系相当远亲缘关系相当远,现在根据现在根据16SrDNA16SrDNA序列资料已进行序列资料已进行新的调整新的调整.41v然而然而,值得强调的是值得强调的是:G+C:G+C含量的分类学意义主要是作含量的分类学意义主要是作为建立新分类单元的一项基本特征和把那些为建立新分类单元的一项基本特征和把那些G+CG+C含量差含量差别大的种类别大的种类排除排除出某一分类单元出某一分类单元.v测定测定DNADNA碱基组成的方法很多碱基组成的方法很多,常用的是常用的是:热变性温度法、浮力密度法热变性温度法、浮力密度法和和高效液相色谱法高效液相色谱法.细菌细菌DNA G+C或或A+T摩尔百分比能反映细菌间摩尔百分比能反映细菌间DNA分子分子同源程度，不同种属间同源程度，不同种属间G+C mol%范围在范围在25%75%之间，之间，但同一种细菌但同一种细菌G+C mol%相当稳定，不受菌龄、培养条件和相当稳定，不受菌龄、培养条件和其他外界因素影响其他外界因素影响.亲缘关系越近的细菌，亲缘关系越近的细菌，G+C mol%越相近，越相近，亲缘关系较远的细菌，亲缘关系较远的细菌，GCmol%也不同，也不同，但但GCmol%相同或近似其亲缘关系不一定相近。相同或近似其亲缘关系不一定相近。42（2 2）核酸的分子杂交）核酸的分子杂交生物的遗传信息以（遗传密码）形式线性的排列生物的遗传信息以（遗传密码）形式线性的排列在在DNADNA分子中，不同分子中，不同DNADNA碱基排列顺序碱基排列顺序的异同直接反映的异同直接反映这些生物之间亲缘关系的远近，这些生物之间亲缘关系的远近，碱基排列顺序差异越碱基排列顺序差异越小小，它们之间的亲缘关系越近，反之亦然。，它们之间的亲缘关系越近，反之亦然。其基本步骤均是先提取菌株的其基本步骤均是先提取菌株的DNADNA，加热，加热变性变性解解链，然后将两种变性的链，然后将两种变性的DNADNA（其中一种为标记（其中一种为标记DNADNA或或rRNArRNA）混合液在一定的温度下保温）混合液在一定的温度下保温复性复性，重新得到，重新得到杂交的双螺旋杂交的双螺旋DNADNA分子，鉴定其双螺旋分子，鉴定其双螺旋结合率结合率。结合。结合率的大小反映了率的大小反映了DNADNA碱基序列的相似程度和菌种之间碱基序列的相似程度和菌种之间的亲缘关系的亲疏。的亲缘关系的亲疏。43 核核酸酸分分子子杂杂交交在在微微生生物物分分类类鉴鉴定定中中的的应应用用包包括括：DNADNADNADNA杂杂交交、DNADNArRNArRNA杂杂交交以以及及根根据据核核酸酸杂杂交交特特异异性原理制备核酸探针。性原理制备核酸探针。(1)DNADNA杂交杂交 亲亲缘关系相对近的微生物之间的亲缘比较缘关系相对近的微生物之间的亲缘比较(2)DNArRNA杂交杂交 亲缘关系相对远的微生物之间的亲缘比较亲缘关系相对远的微生物之间的亲缘比较(3)核酸探针核酸探针 利用特异性的探针，用于细菌等的快速鉴定利用特异性的探针，用于细菌等的快速鉴定44核酸分子杂交法核酸分子杂交法遗遗传传分分类类法法45(3).rRNA寡核苷酸编目分析寡核苷酸编目分析遗遗传传分分类类法法一种通过分析原核或真核细胞中最稳定的一种通过分析原核或真核细胞中最稳定的rRNA寡核苷酸序列同源行程度寡核苷酸序列同源行程度,以确定不同生物间的以确定不同生物间的亲缘关系和进化谱系的方法亲缘关系和进化谱系的方法46确定生物之间的进化关系，须挑选确定生物之间的进化关系，须挑选大分子大分子来进行序列研来进行序列研究。在挑选大分子时应注意：究。在挑选大分子时应注意：它必须普遍存在于所研究的各个生物类群中。它必须普遍存在于所研究的各个生物类群中。所研究的是整个生命界的进化，那么所选择的分子必所研究的是整个生命界的进化，那么所选择的分子必须在所有生物中存在，这样才便于分析和比较。须在所有生物中存在，这样才便于分析和比较。选择在各种生物中功能同源的大分子。选择在各种生物中功能同源的大分子。催化不同反应的酶的氨基酸序列或者具有不同功能核酸的核苷催化不同反应的酶的氨基酸序列或者具有不同功能核酸的核苷酸序列不能进行比较，因酸序列不能进行比较，因为功能不相关的分子也意味着进化过程为功能不相关的分子也意味着进化过程中来源不同，中来源不同，对这一类不相关分子进行比较也不期望他们会表现对这一类不相关分子进行比较也不期望他们会表现出序列的相似性。出序列的相似性。所以，大分子进化的研究必须所以，大分子进化的研究必须从鉴定大分子的功能开从鉴定大分子的功能开始始。47 为了鉴定大分子序列的同源位置或同源区，要为了鉴定大分子序列的同源位置或同源区，要求所选择的分子序列必须能严格求所选择的分子序列必须能严格线性排列线性排列，以，以便进行进一步的分析比较。便进行进一步的分析比较。还应注意根据所比较的各类还应注意根据所比较的各类生物之间的进化距生物之间的进化距离离来选择适当的分子序列。来选择适当的分子序列。48rRNA作为进化的指征作为进化的指征 大量的实验研究表明：在众多的生物大大量的实验研究表明：在众多的生物大分子中，最适合于揭示各类生物亲缘关系的分子中，最适合于揭示各类生物亲缘关系的是是rRNA,尤其是尤其是16SrRNA。16SrRNA所以被所以被普遍公认是一把好的谱系分析的普遍公认是一把好的谱系分析的“分子尺分子尺”，这是因为：这是因为：49 rRNArRNA参与生物蛋白质的合成过程，参与生物蛋白质的合成过程，其功能是任何生其功能是任何生物都必不可少的物都必不可少的，而且在生物进化的漫长历程中，而且在生物进化的漫长历程中，其功能保持不变；其功能保持不变；在在16SrRNA16SrRNA分子中，即含有高度保守的序列区域，分子中，即含有高度保守的序列区域，又有中度保守和高度变化的序列区域，因而它适用又有中度保守和高度变化的序列区域，因而它适用于于进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究；16SrRNA16SrRNA相对分子质量相对分子质量大小适中大小适中，便于序列分析；，便于序列分析；16SrRNA16SrRNA普遍存在普遍存在于真核生物和原核生物中（真核于真核生物和原核生物中（真核生物中其同源分子是生物中其同源分子是18SrRNA18SrRNA）。50rRNA的顺序和进化的顺序和进化培养微生物培养微生物提取并纯化提取并纯化rRNArRNA序列测定序列测定分析比较分析比较微生物之间的系统发育关系微生物之间的系统发育关系51-致病菌检验致病菌检验检验程序检验程序-被检药物的预处理被检药物的预处理 -增菌培养（提高检出率）增菌培养（提高检出率）-分离、纯化（获纯培养）分离、纯化（获纯培养）-鉴别（定）试验鉴别（定）试验 -染色镜检染色镜检 -生化反应生化反应 -血清学试验血清学试验 -毒力试验毒力试验 报告报告52绿脓杆菌：绿脓杆菌：检查要点：检查要点：-染色镜检染色镜检革兰阴性短杆菌革兰阴性短杆菌-鉴别（十六烷三甲基溴化铵）培养基鉴别（十六烷三甲基溴化铵）培养基（淡）绿色带荧（淡）绿色带荧光的菌落光的菌落-生化反应生化反应氧化酶试验（氧化酶试验（+）、绿脓菌素试验（、绿脓菌素试验（+）；若绿脓菌素试验阴性，则须明胶液化试验、硝酸盐还）；若绿脓菌素试验阴性，则须明胶液化试验、硝酸盐还原试验、原试验、42C42C生长试验均（生长试验均（+）。报告：及时写出报告报告：及时写出报告535455金黄色葡萄球菌：金黄色葡萄球菌：检查要点：检查要点：-染色镜检染色镜检革兰阳性球菌，葡萄样排列革兰阳性球菌，葡萄样排列 -鉴别（卵黄高盐）培养基鉴别（卵黄高盐）培养基金黄色菌落金黄色菌落 -生化反应生化反应凝固酶试验（凝固酶试验（+）、甘露醇试验、甘露醇试验（+）。）。报告：及时写出报告报告：及时写出报告