微生物实验三学校公共环境微生物的分离与纯化.pptx

实验三实验三 学校公共环境微生物学校公共环境微生物的分离与纯化的分离与纯化 林标声实验三实验三 学校公共环境微生物的分离与纯化学校公共环境微生物的分离与纯化 n n一、实验目的一、实验目的n n通过本实验的学习，使学生掌握微生物的分离与纯化分离与纯化的原理与方法，熟练掌握微生物的染色方法染色方法以及微生物的计数微生物的计数等基本技能，为今后微生物的遗传、生理以及分子生物学等学习打下基础。二、实验原理二、实验原理-空气中微生物的发布空气中微生物的发布n n空气中微生物的主要来源于土壤、水体表面、土壤、水体表面、动植物、人体及生产活动、污水污物处理动植物、人体及生产活动、污水污物处理等，其组成浓度不稳定，种类多样，有细菌、真细菌、真菌、病毒、噬菌体菌、病毒、噬菌体等。空气微生物是大气污染物之一。空气微生物往往吸附在悬浮颗粒物上，随风飘荡，可导致人类和动植物某些疾病的发生与传播，且常与环境的其他污染物协同作用，致使环境恶化，空气质量降低。空气微生物的浓度是评价空气质量的重要指空气微生物的浓度是评价空气质量的重要指标之一标之一。实验原理实验原理-空气中微生物的发布空气中微生物的发布n n校园是学生集中生活学习的区域，采用微生物学方法，检测校园空气微生物的时空分布，可进一步了解校园空气污染现状，对于防止呼吸道疾病的传播，保护学生身体健康具有重要的现实意义。n n土壤、水样、食品等三、实验器材三、实验器材 n n（一）主要仪器（一）主要仪器（一）主要仪器（一）主要仪器n n高压蒸汽灭菌锅、生化培养箱、电子分析天平、高压蒸汽灭菌锅、生化培养箱、电子分析天平、干燥箱、显微镜、超净工作台干燥箱、显微镜、超净工作台n n（二）主要试剂（二）主要试剂（二）主要试剂（二）主要试剂n n牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、可溶性淀粉、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、可溶性淀粉、KNO3KNO3、KH2P04KH2P04、K2HP04.3H20K2HP04.3H20、MgS04.7H20MgS04.7H20、FeS04.7H20FeS04.7H20、K2HP04K2HP04、蔗糖、葡萄糖、链霉素、蔗糖、葡萄糖、链霉素、孟加拉红溶液、碱性美兰染液、革兰氏染色液、孟加拉红溶液、碱性美兰染液、革兰氏染色液、香柏油、二甲苯等香柏油、二甲苯等四、实验方法和步骤四、实验方法和步骤n n1.1.培养基的配制（牛肉膏蛋白胨培养基）培养基的配制（牛肉膏蛋白胨培养基）培养基的配制（牛肉膏蛋白胨培养基）培养基的配制（牛肉膏蛋白胨培养基）n n2.2.选定采样点（教学楼、宿舍、图书馆、食堂、体选定采样点（教学楼、宿舍、图书馆、食堂、体选定采样点（教学楼、宿舍、图书馆、食堂、体选定采样点（教学楼、宿舍、图书馆、食堂、体育馆、操场等）育馆、操场等）育馆、操场等）育馆、操场等）n n3.3.不同采样时间进行采样（上午、中午、下午各不同采样时间进行采样（上午、中午、下午各不同采样时间进行采样（上午、中午、下午各不同采样时间进行采样（上午、中午、下午各1 1次），每次采样时间分次），每次采样时间分次），每次采样时间分次），每次采样时间分5 5分钟、分钟、分钟、分钟、1010分钟、分钟、分钟、分钟、3030分钟分钟分钟分钟（平皿暴露时间）采样。（平皿暴露时间）采样。（平皿暴露时间）采样。（平皿暴露时间）采样。n n4.4.采样的平皿进行培养采样的平皿进行培养采样的平皿进行培养采样的平皿进行培养n n5.5.菌落计数菌落计数菌落计数菌落计数n n6.6.菌落鉴别菌落鉴别菌落鉴别菌落鉴别n n7.7.作出校园空气微生物分布图（数量、种类）作出校园空气微生物分布图（数量、种类）作出校园空气微生物分布图（数量、种类）作出校园空气微生物分布图（数量、种类）实验设计方案实验设计方案n n（1）空气空气 将一个牛肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂表面暴露在空气中，5min后盖上皿盖n n（2）超净工作台 将一个牛肉膏蛋白胨琼脂平板放在超净工作台上，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在超净工作台内的空气中，15min后盖上皿盖采样空气中细菌总数计算公式采样空气中细菌总数计算公式n空气的细菌数空气的细菌数=W*1000/(Q*T)n式中：式中：W-平皿细菌数，平皿细菌数，Q-流量流量:L/min，T-采样时间：采样时间：min实验设计方案实验设计方案n n（3）手指（洗手前与洗手后）手指（洗手前与洗手后）uuA A 分别在两个琼脂平板上标明洗手前、后，并用记号笔在分别在两个琼脂平板上标明洗手前、后，并用记号笔在皿底划分三个区域皿底划分三个区域uuB B 移去皿盖，同组的三个人将未洗过的手指分别在三个区移去皿盖，同组的三个人将未洗过的手指分别在三个区域的琼脂平板表面轻轻的来回画线。域的琼脂平板表面轻轻的来回画线。uuC C 用肥皂和刷子用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，用肥皂和刷子用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖n n（4）头发头发 在揭开皿盖的琼脂平板上方，用手将头发用力摇动数次，在揭开皿盖的琼脂平板上方，用手将头发用力摇动数次，使细菌降落倒琼脂平板表面，然后盖上皿盖。使细菌降落倒琼脂平板表面，然后盖上皿盖。实验设计方案实验设计方案n n（3）土壤样品 采集不同的土壤样品，称采集不同的土壤样品，称1g1g溶解于溶解于100mL100mL的无菌生理盐的无菌生理盐水中（水中（0.85%NaCl0.85%NaCl），梯度稀释，取），梯度稀释，取0.2mL0.2mL稀释液涂布于含牛稀释液涂布于含牛肉膏蛋白胨培养基平板中，肉膏蛋白胨培养基平板中，3737培养培养24h24h，计数。，计数。（4）其他样品其他样品 如鱼丸、方便面调味料等，各取如鱼丸、方便面调味料等，各取1g1g，捣碎后，溶于，捣碎后，溶于100mL100mL的的无菌生理盐水，剩余操作同上无菌生理盐水，剩余操作同上 （5）水样品微生物检测水样品微生物检测水样品微生物检测水样品微生物检测：取：取100mL100mL水检测，其余步骤同上水检测，其余步骤同上0.90.10.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.9ml分离纯化分离纯化基本流程基本流程每克含菌样品中微生物每克含菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成的活细胞数（菌落形成数，数，CFU（同一稀释度平板上菌（同一稀释度平板上菌落平均数落平均数 5稀释倍数）稀释倍数）/含菌样品克数含菌样品克数 倾注平板倒置培养 培养的时候培养基会有水分蒸培养的时候培养基会有水分蒸发上去的嘛，当水蒸气累积到发上去的嘛，当水蒸气累积到一定的程度会聚成水滴，倒流一定的程度会聚成水滴，倒流到培养中的细菌中，冲散菌体，到培养中的细菌中，冲散菌体，不利于培养观察。不利于培养观察。倒置培养可以防止水蒸气蒸发倒置培养可以防止水蒸气蒸发 分离纯化分离纯化纯化（平板划线法）倒平板划线培养挑菌落纯种（纯培养）移接斜面常用的接种方法划线接种点接种穿刺接种涂布接种液体接种注射接种平板划线分离的方法平板划线分离的方法1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法四、实验结果四、实验结果n n1.空气中微生物数量、性质（革兰氏染 色）、分离保存分离保存n n2.头发、手指等一些物品表面的微生物数量、性质（革兰氏染 色），分离保存分离保存n n3.每g样品中（土壤、水样、食品）中的微生物数量、性质（革兰氏染 色）、分离保存。思考题思考题n n1.影响校园环境空气中微生物分布的因素 有哪些？n n2、如何进一步改进本实验？实验安排实验安排n n6人一组n n除实验报告以外，还必须上交打印稿的 实验设计方案，包括：实验目的，实验原理，实验器材，实验设计步骤n n 本次实验共两周时间下一个实验下一个实验n n实验四、放线菌、霉菌、酵母菌的形态观察