细胞骨架和胞间连丝录像.pptx

一、植物细胞骨架的光学显微镜观察一、植物细胞骨架的光学显微镜观察（一）实验目的（一）实验目的掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构。（二）实验原理（二）实验原理细胞骨架定义：狭义的细胞骨架（cytoskeleton）概念是指真核细胞中的蛋白纤维网络结构。它所组成的结构体系称为“细胞骨架系统”，与细胞内的遗传系统、生物膜系统、并称“细胞内的三大系统”。包含三类蛋白纤丝？包含三类蛋白纤丝？广义的细胞骨架概念是在细胞核中存在的核骨架-核纤层体系。核骨架、核纤层与中间纤维在结构上相互连接，贯穿于细胞核和细胞质的网架体系。细胞骨架作用：1维持细胞形态，承受外力、保持细胞内部结构的有序性；2参与细胞分裂中细胞骨架牵引染色体分离，在细胞物质运输中，各类小泡和细胞器可沿着细胞骨架定向转运；在肌肉细胞中，细胞骨架和它的结合蛋白组成动力系统；在白细胞(白血球)的迁移、精子的游动、神经细胞轴突和树突的伸展等方面都与细胞骨架有关；3植物细胞中细胞骨架指导细胞壁的合成。tritonx-100(聚乙二醇辛基苯基醚)，中文名为曲拉通x-100，分子量为647，常作为非离子型表面活性剂（或称清洁剂）。它能溶解脂质，以增加抗体对细胞膜的通透性。免疫细胞化学中，tritonx-100常用浓度为1%和0.3%，1%的tritonx-100常用于漂洗组织标本，在水溶液中促进蛋白降解。0.3%的tritonx-100则常用于稀释血清。植物细胞用适当浓度的TritonX100处理后，可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质却保存完好。考马斯亮蓝R250(CoomassiebrilliantblueR250)是一种蛋白质染料，处理后的材料用考马斯亮蓝R250染色后，用光学显微镜观察，可以见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。（三）实验材料、用品（三）实验材料、用品1、材料：洋葱鳞叶（四）实验步骤（四）实验步骤1.用镊子撕取洋葱鳞叶内表皮若干片约用镊子撕取洋葱鳞叶内表皮若干片约 1cm2 大小若干片大小若干片)，置于，置于 50mL 烧杯中，加入烧杯中，加入 pH6.8 磷酸缓冲液，使其下沉，如果难以下沉，可用磷酸缓冲液，使其下沉，如果难以下沉，可用镊子夹住往下压沉。镊子夹住往下压沉。2.吸去磷酸缓冲液，用吸去磷酸缓冲液，用1Triton X-100 处理处理 20 min。3.吸去吸去Triton X-100，用，用 M 缓冲液洗缓冲液洗 3 次，每次，每 次次5 min。4.用用 3戊二醛固定戊二醛固定 30 min。5.磷酸缓冲液磷酸缓冲液(pH 6.8)洗洗 3 次，每次次，每次 5min。6.0.2%考马斯亮蓝考马斯亮蓝 R250 染色染色 20 min。7.蒸馏水洗蒸馏水洗 2 次，然后将样品置于载玻片次，然后将样品置于载玻片 上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。8.如果染色效果好，则可依次用如果染色效果好，则可依次用 50乙醇、乙醇、70%乙醇、乙醇、95乙醇、正丁醇、二甲苯乙醇、正丁醇、二甲苯 处理样品各处理样品各 5 min，然后将样品平展于载，然后将样品平展于载 玻片上，加一滴中性树胶，盖上盖玻片封玻片上，加一滴中性树胶，盖上盖玻片封 片，制成永久切片。片，制成永久切片。（五）实验结果（五）实验结果（六）实验报告（六）实验报告1 统一使用中南民族大学生命科学院实验报告用纸；统一使用中南民族大学生命科学院实验报告用纸；每次实验结束，由实验老师检察结果、实验报告和每次实验结束，由实验老师检察结果、实验报告和实验用品后方可离去实验用品后方可离去（做值日除外）。（做值日除外）。2 实验报告内容实验报告内容1）实验原理）实验原理2）实验步骤）实验步骤3）实验结果及分析：描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞）实验结果及分析：描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞 骨架图。骨架图。4）思考题）思考题 5）实验收获、个人体会、改进建议和注意事项等）实验收获、个人体会、改进建议和注意事项等二、植物细胞胞间连丝的光学显微镜观察二、植物细胞胞间连丝的光学显微镜观察（一）实验目的（一）实验目的观察植物细胞间的胞间连丝，进一步认识细胞并不是独立王国，而是与周围细胞有着千丝万缕的联系。胞间连丝为细胞间的物质运输与刺激传递起着桥梁的作用。二）实验原理二）实验原理胞间连丝，是贯穿细胞壁沟通相邻细胞的细胞质连线。为细胞间物质运输与信息传递的重要通道，通道中有一连接两细胞内质网的连丝微管。用适当的方法染色，可以看见细胞壁的存在。用碘液对植物细胞壁进行染色，在胞间连丝处发生“断裂”现象，其实是胞间连丝连接的地方没有细胞壁。胞间连丝的细微结构必须在电子显微镜下才能看清楚，我们可以根据显微镜下细胞壁“断裂”现象感知植物细胞间的胞间连丝的存在。用红墨水对细胞质进行染色，也可以观察到胞间连丝的存在。（二）实验材料、用品（二）实验材料、用品1、材料：新鲜的红辣椒果实2、仪器：显微镜，载玻片，镊子，玻璃吸管，刀片，碘液，红墨水等。（三）实验步骤（三）实验步骤剪取一小块红辣椒，用刀片小心刮去果肉，留下一层极薄的表皮，分别进行以下操作：1.放在载玻片上，滴一滴水，盖上盖玻片后即可观察。镜检时光线不要太亮。2.加碘液染色制片观察。在高倍镜下，可以看见其表皮是由不太规则的细胞群构成的，细胞中有着淡黄色的细胞质。细胞壁很厚，着深黄色，壁上有小孔（纹孔），孔里有细胞质丝穿过。3.用红墨水染色30分钟，然后吸去多余的染料，加水封片镜检，可见其细胞质被染成粉红色。也可观察到纹孔和胞间连丝。（四）实验结果（四）实验结果（五）实验报告（五）实验报告描绘所观察到的红辣椒细胞胞间连丝图。注意事项：要小心用刀片刮去果肉，既要用力，又要不刮破表皮，以确保最后能得到很薄的表皮。显微镜下观察到的细胞，用水装片时红颜色应很淡或基本呈白色。