微生物的实验室培养新人教版选修.pptx

是一切肉眼看不见或看不清楚的微是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。小生物的总称。一、微生物一、微生物微生物微生物病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物是一切肉眼看不见或看不清楚的微是一切肉眼看不见或看不清楚的微小小生物生物的总称。的总称。一、微生物一、微生物 1.1.分类分类特点：小特点：小 简简 低低病病毒毒的的结结构构 2.2.病毒病毒病病 毒毒 SARS冠状病毒、冠状病毒、禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白质病毒朊病毒（蛋白质病毒）病毒的增殖病毒的增殖细菌的外形与大小细菌的外形与大小 3.3.细菌细菌 A.A.球菌球菌 B.B.杆菌杆菌 C.C.弧菌弧菌 常见的细菌三种典型形态常见的细菌三种典型形态ABC细菌的结构细菌的结构芽孢：芽孢：细菌形成的椭圆形的休眠体细菌形成的椭圆形的休眠体芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。异养菌：异养菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌细菌的细菌的营养营养类型类型根据细菌所利用的能源和碳源的不根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。同，将细菌分为两大营养类型。自养菌：自养菌：光能自养型：光能自养型：光合细菌光合细菌化能自养型化能自养型：硝化细菌，铁细菌，硫细菌硝化细菌，铁细菌，硫细菌菌落菌落单个或少数细菌在固体培养基上大单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落。菌落是鉴定菌种的菌落是鉴定菌种的重要依据。重要依据。4.4.放线菌放线菌结构结构：单细胞原核生物单细胞原核生物分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）（2）繁殖）繁殖孢孢子子丝丝|孢孢子子链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其微生物中发现了几千种抗生素，其中中2/3是由放线菌产生的是由放线菌产生的 应用应用:5.5.真菌真菌酵母菌酵母菌酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉生生 殖殖腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖微生物的实验室微生物的实验室培养条件：培养条件：（1）合适的营养和环境条件）合适的营养和环境条件（2）确保其他微生物无法混入）确保其他微生物无法混入一一.培养基培养基 1.概念：概念：按照微生物对按照微生物对营养物质营养物质的不同需求，配制出的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。供其生长繁殖的营养基质。固体培养基：菌落固体培养基：菌落液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长半固体培养基半固体培养基：2.种类：种类：（按物理形态分）（按物理形态分）液体培养基液体培养基 增菌、工业生产增菌、工业生产固体培养基固体培养基半固体培养基半固体培养基应用微生物纯化（分离）、鉴定、计数和应用微生物纯化（分离）、鉴定、计数和菌种保存等方面菌种保存等方面 按照培养基用途分按照培养基用途分 选择性培养基选择性培养基鉴别培养基鉴别培养基按照培养基的成分来分按照培养基的成分来分 合成培养基、天然培养基、半合成培养基合成培养基、天然培养基、半合成培养基3.成分：成分：思考：思考：各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？水、无机盐、碳源、氮源、（生长因子）水、无机盐、碳源、氮源、（生长因子）+满足微生物对满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的要求、特殊营养物质、氧气的要求C碳源：如碳源：如CO2和糖类、脂肪酸等有机物，和糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，自养构成微生物的结构物质和分泌物，自养微生物需无机碳，异氧微生物需有机碳微生物需无机碳，异氧微生物需有机碳还能提供能量。还能提供能量。氮源：如氮源：如N2、氨盐、硝酸盐和牛肉膏、氨盐、硝酸盐和牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等，无机氮源可为硝化细及含氮代谢物等，无机氮源可为硝化细菌提供能量。菌提供能量。含有含有C、H、O、N的化合物既可以作为的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。C二二.无菌技术无菌技术思考：思考：1.什么是无菌技术？包括哪些方面？什么是无菌技术？包括哪些方面？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考）旁栏思考）3.消毒和灭菌有何不同？消毒和灭菌有何不同？4.常用的消毒和灭菌方法有哪些？常用的消毒和灭菌方法有哪些？无菌技术：无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有泛指培养微生物操作中，所有防防 止杂菌污染止杂菌污染的方法。的方法。无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。芽孢的壁很芽孢的壁很厚厚，对干旱、低温、高温，对干旱、低温、高温等等恶劣的环境有很强的抵抗力恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又芽孢又小小又又轻轻，可以随风飘散。，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。3.常用的常用的消毒消毒方法：方法：煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法常用的常用的灭菌灭菌方法：方法：灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌：100kPa 121 15-30min判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。（1）豆浆）豆浆 （2）游泳池）游泳池 （3）超净工作台超净工作台 （4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶）玻棒、试管、吸管、锥形瓶（5）培养细菌用的培养皿）培养细菌用的培养皿（6）无菌水）无菌水 （7）牛肉膏蛋白胨培养基）牛肉膏蛋白胨培养基（8）接种环、接种针接种环、接种针（9）实验操作者的双手）实验操作者的双手牛奶牛奶 接种室、接种箱或超净工作台接种室、接种箱或超净工作台 接种工具，接种环、接种针或其他金属用具接种工具，接种环、接种针或其他金属用具 玻璃器皿（吸管、培养皿）玻璃器皿（吸管、培养皿）三三.实验操作实验操作-大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算称量溶化灭菌计算称量溶化灭菌倒平板倒平板（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌 最常用的接种方法有：最常用的接种方法有：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法（冷却至（冷却至50）涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。等。菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏法：、临时保藏法：对象：对象：温度：温度：缺点：缺点：2 2、甘油管藏法：、甘油管藏法：对象：对象：温度：温度：结果分析与评价结果分析与评价课题延伸课题延伸（P20）频繁使用的菌种频繁使用的菌种 44（冰箱）（冰箱）容易被污染或容易被污染或产生变异产生变异 长期保存的菌种长期保存的菌种 -20-20（冷冻箱）（冷冻箱）接种环接种环接种针接种针倒平板倒平板讨论讨论1，2讨论讨论3，4平板划线法平板划线法讨讨论论2，31.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环：操作的第一步灼烧接种环：每次划线前灼烧接种环：每次划线前灼烧接种环：划线结束后灼烧接种环：划线结束后灼烧接种环：避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？次划线的末端开始划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。划线后，线条划线后，线条末端末端细菌的数目比细菌的数目比线条起始处线条起始处要要少少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落单个细菌繁殖而来的菌落涂布器涂布器1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：可以用提示：可以用手触手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手刚刚不烫手时，就可以进行时，就可以进行倒平板了。倒平板了。通过灼烧灭菌，通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基防止瓶口的微生物污染培养基3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？微生物吗？为什么？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。不要不要空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生选择培养基不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入四环素等抗生素的培养基加入四环素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞不加氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基不加氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌