SN∕T 5326.5-2023 进出口食品化妆品专业分析方法验证指南 第5部分：免疫学方法.pdf

I C S6 7.0 5 0C C SX 0 4中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T5 3 2 6.52 0 2 3进出口食品化妆品专业分析方法验证指南第5部分:免疫学方法G u i d e l i n e o n v a l i d a t i o n o f t e s t m e t h o d s f o r f o o d a n d c o s m e t i c s o f i m p o r t a n d e x p o r tP a r t 5:I mm u n o l o g i c a l m e t h o d2 0 2 3-0 5-0 5发布2 0 2 3-1 2-0 1实施中华人民共和国海关总署发 布前 言 本文件按照G B/T 1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。本文件是S N/T 5 3 2 6 进出口食品化妆品专业分析方法验证指南 的第5部分。S N/T 5 3 2 6已经发布了以下部分:第1部分:通用指南;第2部分:化学方法;第3部分:传统微生物学方法;第5部分:免疫学方法。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国福州海关、中华人民共和国深圳海关、中华人民共和国广州海关。本文件主要起草人:杨方、邵碧英、岳振峰、席静、柯秋璇、叶洪、郑洁、李耀平。S N/T5 3 2 6.52 0 2 进出口食品化妆品专业分析方法验证指南第5部分:免疫学方法1 范围本文件规定了进出口食品化妆品免疫学分析方法的验证指南。本文件适用于进出口食品化妆品免疫学分析方法标准建立过程中方法的验证,无论该标准是新制定标准、修订标准,还是等同采用或修改采用国际标准。此外,实验室采用非标准方法及自主研究开发新方法时,也可参照本程序用以验证这些方法的适用性。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T 6 3 7 9.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义 G B/T 1 9 4 8 9 实验室生物安全通用要求 G B/T 2 7 0 2 5 检测和校准实验室能力的通用要求 G B/T 2 7 4 0 3 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 G B/T 2 7 4 0 4 实验室质量控制规范 食品理化检测 G B/T 2 7 4 0 5 实验室质量控制规范 食品微生物检测 S N/T 0 0 0 1 出口食品化妆品理化测定方法标准的基本规定 S N/T 3 2 6 6 食品微生物检验方法确认技术规范 S N/T 5 3 2 6.1 进出口食品化妆品专业分析方法验证指南 通用指南3 术语和定义 S N/T 0 0 0 1、S N/T 3 2 6 6及S N/T 5 3 2 6.1界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1 免疫学分析方法 i mm u n o l o g i c a l m e t h o d 指基于抗原抗体反应,应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验方法。3.2 钩状效应 h o o k e f f e c t 指由于抗原抗体比例不合适而抑制响应信号的现象。抗体过量称为前带效应,抗原过量称为后带效应,统称为钩状效应。3.3 特异性 s p e c i f i c i t y 指结合试剂专一结合目标分析物的能力。理想的结合试剂特异性强,与结构相关及相似化合物(内源性化合物、异构体、分析物的变体形式、或物理化学性质类似化合物)没有交叉反应。1S N/T5 3 2 6.52 0 2 3.4 选择性 s e l e c t i v i t y 指分析方法从样品中区分基质内源物质与目标分析物的能力。基质内源物质可能会影响目标分析物与配体的结合,造成检测干扰。4 分析方法性能参数的验证4.1 验证样品及制备 验证样品包括不含目标分析物的空白样品与质控样品。可采用目标分析物含量已知的基质标准物质作为质控样品,也可采用添加的方式制备质控样品。质控样品应尽可能与分析样品一致。采用添加方式制备质控样品时目标分析物或干扰化合物的添加量应尽可能少,以不影响样品的组成,添加量一般不大于样品量的1/1 0 0。实验室内验证的样品种类应涵盖分析方法的适用范围,实验室间验证的样品应选择至少3种有代表性的样品(不同种类或不同来源)进行。可参考S N/T 0 0 0 1、S N/T 3 2 6 6及S N/T 5 3 2 6.1的食品化妆品分类方法选择样品进行验证。4.2 验证参数的选择4.2.1 方法制定方应根据所制定方法的预期用途选择合适的验证参数,并形成实验室验证方案。4.2.2 对于定性方法,典型的实验室内验证参数包括方法的检出限、稀释验证、特异性、选择性、稳定性。实验室间验证至少包括方法的检出限与特异性。4.2.3 对于定量方法,典型的实验室内验证参数包括方法的定量限、校准曲线、稀释验证、准确度(正确度和精密度)、特异性、选择性、稳定性。实验室间验证至少包括方法的定量限、特异性和准确度(批内)。5 定性分析方法性能参数的验证5.1 检出限 对于目视定性分析方法,制备一系列目标分析物含量不同的质控样品,在给定的分析条件下进行至少2 0次独立测试。方法检出限水平应至少有9 5%(对于法规禁止检出或不允许使用的物质,应至少有9 9%)测试结果的响应信号明显大于空白样品响应信号。对于仪器定性分析方法,制备一系列目标分析物含量不同的质控样品,在给定的分析条件下进行至少2 0次独立测试。方法检出限水平应至少有9 5%(对于法规禁止检出或不允许使用的物质,应至少有9 9%)测试结果的响应信号大于空白样品响应信号的3倍。5.2 稀释验证 当样品中目标分析物含量过高时,可能因钩状效应而导致假阴性或弱阳性现象。可制备目标分析物含量至少为检出限1 0 0倍以上的质控样品进行验证,按1 0、1 02两个稀释梯度进行稀释,应至少有9 5%测试结果的响应信号(对于法规禁止检出或不允许使用的物质,应至少有9 9%测试结果的响应信号)显示为检出。5.3 特异性 选择至少3种与目标分析物结构相关及相似的干扰化合物(内源性物质、异构体、分析物的变体形式、或物理化学性质类似化合物等),在不同种类或不同来源的空白样品中分别加入含量为检出限与检2S N/T5 3 2 6.52 0 2 出限1 0倍的干扰化合物,每种含量的质控样品至少2 0份,其中至少有9 5%测试结果的响应信号显示为未检出,即特异性计算结果应 9 5%(如表1所示)。表1 特异性验证测试样品实际状态免疫学方法检测结果阳性阴性合计阴性aba+b特异性=b/(a+b)1 0 0%5.4 选择性 采用不同种类或不同来源的样品,制备至少2 0份目标分析物含量为检出限的质控样品进行选择性验证。对于有容许限的化合物,还应同法制备至少2 0份目标分析物含量为关注含量的质控样品进行选择性验证。检出限水平的质控样品应有9 5%测试结果的响应信号显示为检出;关注含量水平的质控样品应有9 9%测试结果的响应信号显示为检出。5.5 稳定性 为确定样品制备、分析以及保存过程可能对目标分析物含量产生的影响,应进行稳定性验证。基质稳定性验证:将至少2 0份目标分析物含量为检出限的质控样品在设定冷冻温度下保存,并于室温下或操作温度下融解,完全融解后,再置于相同条件下冷冻。每一次冷冻至少1 2 h。冻融次数应不低于实际测量时样品可能产生的冻融次数。反复冻融后该质控样品至少有9 5%测试结果的响应信号(对于法规禁止检出或不允许使用的物质,应有9 9%测试结果的响应信号)显示为检出。短期稳定性验证:将至少2 0份目标分析物含量为检出限的质控样品置于室温下或操作温度下4 h2 4 h后进行分析,至少有9 5%测试结果的响应信号(对于法规禁止检出或不允许使用的物质,应有9 9%测试结果的响应信号)显示为检出。长期稳定性验证:将至少2 0份目标分析物含量为检出限的质控样品置于与日常检测样品相同条件下贮存,放置一定时间(应长于检测样品的贮存时间)进行评价。对于大分子物质(肽或蛋白质等),需在每一个涉温点进行分析,以验证其稳定性。至少有9 5%测试结果的响应信号(对于法规禁止检出或不允许使用的物质,应有9 9%测试结果的响应信号)显示为检出。6 定量分析方法性能参数的验证6.1 定量限 制备具有一定含量目标分析物的质控样品,在给定的分析条件下进行至少2 0次独立测试,方法定量限水平应至少有9 5%测试结果的响应信号是空白样本响应信号的5倍。6.2 校准曲线 校准曲线至少包括5个校准点和零点,校准点应尽可能均匀分布在关注的含量范围内,并应覆盖关注浓度的0%1 5 0%。校准曲线应尽可能覆盖一个或多个数量级,每条校准曲线至少重复测定1次。免疫学分析的校准曲线一般呈非线的S型,线性范围一般采用线性最小二乘法进行线性拟合,以多次回归分析确定最佳线性模式,回归分析可采用仪器自带的统计软件或商业统计软件进行,线性回归方程的相关系数不低于0.9 9 0。3S N/T5 3 2 6.52 0 2 6.3 稀释验证 当样品中目标分析物含量过高时,为避免钩状效应导致的假阴性现象或定量不准确,应采用空白基质稀释样品使目标分析物含量在合适范围内。可制备目标分析物含量至少为方法测定范围最高含量水平1 0倍的质控样品进行验证,按1 0、1 02、1 03三个稀释梯度进行稀释,每个稀释样品至少重复6次测定,稀释后系列样品测定结果的平均值与指定参考值的相对误差应在2 0%以内。相对误差的计算公式见式(1)。相对误差(%)=(测定值-指定参考值)/指定参考值1 0 0%式(1)6.4 准确度(正确度和精密度)进行批内准确度验证时,至少选择3个含量水平、每个含量水平至少5种样品进行测试。应包含定量限、3倍定量限与方法测定范围最高含量水平。对于有容许限的化合物,还应验证该关注含量。定量限水平测试结果平均值与指定参考值的相对误差应在2 0%以内、测试结果的相对标准偏差应在2 0%以内,其余含量水平测试结果平均值与指定参考值的相对误差应在1 5%以内、测试结果的相对标准偏差应在1 5%以内。进行批间准确度验证时,至少在2个不同日期针对3种样品的3个不同含量水平进行重复测定。应包含定量限、3倍定量限与方法测定范围最高含量水平。对于有容许限的化合物,还应验证该关注水平。定量限水平测试结果平均值与指定参考值的相对误差应在2 0%以内、测试结果的相对标准偏差应在2 0%以内,其余含量水平测试结果平均值与指定参考值的相对误差应在1 5%以内、测试结果的相对标准偏差应在1 5%以内。相对标准偏差的计算按 G B/T 6 3 7 9.1进行。6.5 特异性 采用不同种类或不同来源的样品制备目标分析物含量为定量限的质控样品,选择至少3种与目标分析物结构相关及相似的干扰化合物(内源性化合物、异构体、分析物的变体形式,或物理化学性质类似化合物等),在各2 0份质控样品中分别加入含量为定量限与方法测定范围最高含量水平的干扰化合物,检测结果平均值与指定参考值的相对误差应在2 5%以内。6.6 选择性 应采用不同种类或不同来源的样品至少验证定量限水平和关注含量水平的选择性,每个含量水平至少采用2 0份质控样品。对于定量限水平,至少有8 0%的样品检测结果的平均值与指定参考值的相对误差在2 5%以内。对于关注含量水平(与定量限不同时),至少有8 0%的样品检测结果的平均值与指定参考值的相对误差在2 0%以内。6.7 稳定性 为确定样品制备、分析以及保存过程可能对目标分析物含量产生的影响,应进行稳定性验证。基质稳定性:将至少2 0份目标分析物含量为定量限的质控样品在设定冷冻温度下保存,并于室温下或操作温度下融解,完全融解后,再置于相同条件下冷冻。每一次冷冻至少1 2 h。冻融次数应不低于实际测量时样品可能产生的冻融次数。反复冻融后该质控样品测试结果的平均值与指定参考值的相对误差应在2 0%以内。短期稳定性:将质控样品置于室温下或操作温度下4 h2 4 h后进行分析,根据新配制的标准曲线计算测试结果,该质控样品测试结果的平均值与指定参考值的相对误差应在2 0%以内。长期稳定性:将至少2 0份目标分析物含量为定量限的质控样品置于与日常检测样品相同条件下贮4S N/T5 3 2 6.52 0 2 存,放置一定时间(应长于检测样品的贮存时间)进行评价。对于大分子物质(肽或蛋白质等),需在每一个涉温点进行分析,以验证其稳定性。经长期贮存后该质控样品测试结果的平均值与指定参考值的相对误差应在2 0%以内。标准储备液和标准工作液稳定性:分别选择高浓度和低浓度标准溶液在规定的贮存条件下放置一定时间后进行测试,与新配制的同浓度标准溶液相比的相对误差应在2 0%以内。7 分析方法性能参数验证的其他要求7.1 平行试验 一般情况下校正曲线和供试样品在上样检测时均应进行平行试验,平行测定结果的绝对差值不超过算术平均值的1 0%。7.2 参考物质 参考物质必须特征清楚、来源明确。应尽可能选择纯度最高的参考物质。7.3 试剂 关键试剂包括对检测结果有直接影响的结合试剂(如结合蛋白、适体、抗体或标记的抗体)和酶试剂等。在验证或样品分析过程中如果试剂批号或来源改变时,应对不同批次或来源的试剂进行验证以确保获得的结果一致。7.4 样品检测 在免疫学方法中使用最多的是微孔板。每个分析批次可能使用数块板,每块板上应分别有校准曲线和质控样品以比较板间差异。如果微孔板可承载的样品数量有限,可将同一套校准曲线分别放在第一块板和最后一块板上,而每个微孔板上有相应的质控样品。每批测试的全部样品应在同一次运行中完成,一次运行至少包括3个含量水平(分别为低、中、高含量)质控样品的两个平行样。7.5 安全要求和质量控制 实验室进行方法验证实验时,应符合G B/T 1 9 4 8 9和G B/T 2 7 0 2 5 相关实验室的安全规定和操作要求,质量控制按照G B/T 2 7 4 0 3、G B/T 2 7 4 0 4、G B/T 2 7 4 0 5中的有关规定执行。5S N/T5 3 2 6.52 0 2 P r e f a c eT h i s d o c u m e n t i s w r i t t e n a c c o r d i n g t o t h e r u l e s f r o m G B/T 1.12 0 2 0 S t a n d a r d i z a t i o n G u i d e l i n e s P a r t 1:T h e S t r u c t u r e a n d W r i t i n g R u l e s o f S t a n d a r d s.T h e d o c u m e n t i s t h e P a r t 5 o f s t a n d a r d S N/T 5 3 2 6 V a l i d a t i o n g u i d e l i n e s o f a n a l y t i c a l m e t h o d s f o r i m p o r t e d a n d e x p o r t e d f o o d a n d c o s m e t i c s.Wh i c h h a d b e e n i s s u e d t h e f o l l o w i n g p a r t s:P a r t 1:G e n e r a l g u i d e l i n e;P a r t 2:C h e m i c a l m e t h o d s;P a r t 3:T r a d i t i o n a l m i c r o b i o l o g y m e t h o d s;P a r t 5:I mm u n o l o g i c a l m e t h o d.P l e a s e n o t e t h a t s o m e o f t h e c o n t e n t s i n t h e d o c u m e n t m a y i n v o l v e p a t e n t s.T h e p u b l i s h e r d o e s n o t t a k e r e s p o n s i b i l i t y t o i d e n t i f y t h e s e p a t e n t s.T h e d o c u m e n t i s p r o p o s e d a n d m a n a g e d b y G e n e r a l A d m i n i s t r a t i o n o f C u s t o m s,P e o p l es R e p u b l i c o f C h i n a.T h e d o c u m e n t w a s d r a f t e d b y t h e f o l l o w i n g i n s t i t u t i o n s:F u z h o u C u s t o m s,S h e n z h e n C u s t o m s,a n d G u a n g z h o u C u s t o m s.T h e d o c u m e n t w a s m a i n l y d r a f t e d b y t h e f o l l o w i n g p e o p l e:F a n g Y a n g,B i y i n g S h a o,Z h e n f e n g Y u e,J i n g X i,Q i u x u a n K e,H o n g Y e,J i e Z h e n g,a n d Y a o p i n g L i.6S N/T5 3 2 6.52 0 2 G u i d e l i n e o n v a l i d a t i o n o f t e s t m e t h o d s f o r f o o d a n d c o s m e t i c s o f i mpo r t a n d e xpo r t P a r t 5:I mm u n o l ogi c a l m e t h o d1 S c opeT h i s d o c u m e n t p r o v i d e s g u i d e l i n e s f o r v a l i d a t i o n t h e s t a n d a r d i mm u n o l o g i c a l m e t h o d s f o r i m p o r t e d a n d e x p o r t e d f o o d a n d c o s m e t i c s.T h i s d o c u m e n t i s a p p l i c a b l e t o t h e v a l i d a t i o n o f m e t h o d s d u r i n g t h e e s t a b l i s h m e n t o f s t a n d a r d s f o r i mm u n o l o g i c a l m e t h o d s o f i m p o r t e d a n d e x p o r t e d f o o d a n d c o s m e t i c s,w h e t h e r t h e s t a n d a r d i s a a n e w l y f o r m u l a t e d s t a n d a r d,a r e v i s e d s t a n d a r d,o r a n e q u i v a l e n t o r m o d i f i e d i n t e r n a t i o n a l s t a n d a r d.I n a d d i t i o n,w h e n t h e l a b o r a t o r y a d o p t s n o n-s t a n d a r d m e t h o d s a n d i n d e p e n d e n t l y d e v e l o p s n e w m e t h o d s,i t c a n a l s o r e f e r t o t h i s p r o c e d u r e t o v a l i d a t e t h e a p p l i c a b i l i t y o f t h e s e m e t h o d s.2 N o r m a t i v e r e f e n c e sT h e f o l l o w i n g d o c u m e n t s,i n w h o l e o r i n p a r t,a r e n o r m a t i v e l y r e f e r e n c e d i n t h i s d o c u m e n t a n d a r e i n d i s p e n s a b l e f o r i t s a p p l i c a t i o n.F o r d a t e d r e f e r e n c e s,o n l y t h e e d i t i o n c i t e d a p p l i e s.F o r u n d a t e d r e f e r e n c e s,t h e l a t e s t e d i t i o n o f t h e r e f e r e n c e d d o c u m e n t(i n c l u d i n g a n y a m e n d m e n t s)a p p l i e s.G B/T 6 3 7 9.1 A c c u r a c y(t r u e n e s s a n d p r e c i s i o n)o f m e a s u r e m e n t m e t h o d s a n d r e s u l t sP a r t 1:G e n e r a l p r i n c i p l e s a n d d e f i n i t i o n sG B/T 1 9 4 8 9 L a b o r a t o r i e sG e n e r a l r e q u i r e m e n t s f o r b i o s a f e t yG B/T 2 7 0 2 5 G e n e r a l r e q u i r e m e n t s f o r t h e c o m p e t e n c e o f t e s t i n g a n d c a l i b r a t i o n l a b o r a t o r i e sG B/T 2 7 4 0 3 C r i t e r i o n o n Q C o f l a b o r a t o r i e sM o l e c u l a r b i o l o g i c a l t e s t i n g o f f o o dG B/T 2 7 4 0 4 L a b o r a t o r y q u a l i t y c o n t r o l s t a n d a r d,P h y s i c a l a n d c h e m i c a l t e s t i n g o f f o o dG B/T 2 7 4 0 5 L a b o r a t o r y q u a l i t y c o n t r o l s t a n d a r d,M i c r o o r g a n i s m t e s t i n g o f f o o dS N/T 0 0 0 12 0 1 6 T h e b a s i c r u l e s f o r t h e s t a n d a r d s o f p h y s i c a l a n d c h e m i c a l m e t h o d s o n e x p o r t e d f o o d a n d c o s m e t i c s7S N/T5 3 2 6.52 0 2 S N/T 3 2 6 6 T h e s t a n d a r d s o f t e s t m e t h o d s a n d c o n f i r m a t i o n t e c h n i q u e s o f f o o d m i c r o o r g a n i s mS N/T 5 3 2 6.1 V a l i d a t i o n g u i d e l i n e s o f a n a l y t i c a l m e t h o d s f o r i m p o r t e d a n d e x p o r t e d f o o d a n d c o s-m e t i c s P a r t 1 G e n e r a l g u i d e l i n e3 T e r m s a n d d e f i n i t i o n sT h e t e r m s a n d d e f i n i t i o n s d e f i n e d i n S N/T 0 0 0 1、S N/T 3 2 6 6 a n d S N/T 5 3 2 6.1 a n d t h e f o l l o w i n g s a r e a p p l i c a b l e t o t h i s s t a n d a r d.3.1 i mm u n o l ogi c a l m e t h o dI t r e f e r s t o a s e r i e s o f e x p e r i m e n t a l m e t h o d s d e s i g n e d b a s e d o n t h e i mm u n o l o g i c a l t h e o r y o f a n t i g e n-a n t i b o d y r e a c t i o n t o d e t e r m i n e a n t i g e n s,a n t i b o d i e s,i mm u n e c e l l s a n d t h e i r s e c r e t e d c y t o k i n e s.I t i s a s e r i e s o f e x p e r i m e n t a l m e t h o d s f o r m e a s u r i n g a n t i g e n、a n t i b o d y、i mm u n e c e l l s a n d t h e i r s e c r e-t e d c y t o k i n e s b a s e d o n a n t i g e n-a n t i b o d y r e a c t i o n a n d d e s i g n e d u s i n g i mm u n o l o g y t h e o r y.3.2 h o o k e f f e c t I t r e f e r s t o a s i g n a l s u p p r e s s i o n c a u s e d b y h i g h c o n c e n t r a t i o n s o f a n a l y t e(s)d u e t o t h e i n a p p r o p r i a t e p r o p o r t i o n o f a n t i g e n a n d a n t i b o d y.A n t i b o d y e x c e s s i s c a l l e d p r o z o n e e f f e c t,a n d a n t i g e n e x c e s s i s c a l l e d p o s t z o n e e f f e c t,w h i c h i s c o l l e c t i v e l y r e f e r r e d t o a s h o o k e f f e c t.3.3 spe c i f i c i tyI t r e f e r s t o t h e a b i l i t y t o b i n d s o l e l y t o t h e a n a l y t e(s)o f i n t e r e s t.I d e a l l y t h e b i n d i n g r e a g e n t s h o u l d b e s p e c i f i c s u c h t h a t n o c r o s s-r e a c t i v i t y o c c u r s w i t h s t r u c t u r a l l y“r e l a t e d c o m p o u n d s”(e.g.e n d o g e-n o u s c o m p o u n d s,i s o f o r m s,v a r i a n t f o r m s o f t h e a n a l y t e(s),o r p h y s i c-c h e m i c a l s i m i l a r c o m-p o u n d s).3.4 s e l e c t i v i tyI t r e f e r s t o t h e a b i l i t y t o m e a s u r e t h e a n a l y t e(s)o f i n t e r e s t i n t h e p r e s e n c e o f u n r e l a t e d c o m p o u n d s i n t h e m a t r i x.T h e s e u n r e l a t e d c o m p o u n d s i n t h e m a t r i x m a y i n t e r f e r e w i t h t h e a n a l y t e(s)o f i n t e r e s t i n t h e l i g a n d b i n d i n g a s s a y.8S N/T5 3 2 6.52 0 2 4 P r o v i s i o n s o f pe r f o r m a n c e pa r a m e t e r s o f t h e a n a lys i s m e t h o d s4.1 S a mpl e s pr epa r a t i o n f o r v a l i d a t i o n S a m p l e s f o r v a l i d a t i o n i n c l u d e b l a n k s a m p l e s a n d t h e q u a l i t y c o n t r o l s a m p l e s(Q C s a m p l e s)w i t h o u t t a r g e t a n a l y t e(s).B o t h t h e m a t r i x r e f e r e n c e m a t e r i a l a n d t h e s a m p l e s f o r t i f i e d w i t h k n o w n c o n c e n t r a t i o n o f t a r g e t a n a-l y t e(s)c a n b e u s e d a s Q C s a m p l e s.T h e Q C s a m p l e s s h a l l b e c o n s i s t e n t w i t h t h e a n a l y t i c a l s a m p l e a s f a r a s p o s s i b l e.Wh e n p r e p a r i n g Q C s a m p l e s b y f o r t i f i e d,t h e a d d i t i o n a m o u n t o f t a r g e t a n a l y t e(s)o r i n t e r f e r i n g c o m p o u n d s s h a l l b e a s s m a l l a s p o s s i b l e s o a s n o t t o a f f e c t t h e c o m p o s i t i o n o f t h e s a m p l e s.G e n e r a l l y,t h e s p i k i n g a m o u n t s s h a l l n o t e x c e e d o n e p e r c e n t o f a m o u n t o f t h e a n a l y s i s s a m p l e.T h e v a r i e t i e s a n d t y p e s o f s a m p l e s f o r i n t r a-l a b o r a t o r y v a l i d a t i o n s h o u l d c o v e r a l l t h e a p p l i c a b l e m a-t r i x o f t h e a n a l y t i c a l m e t h o d.A t l e a s t t h r e e r e p r e s e n t a t i v e s a m p l e s(d i f f e r e n t t y p e s o r d i f f e r e n t s o u r c e s)s h o u l d b e s e l e c t e d f o r i n t e r-l a b o r a t o r y v a l i d a t i o n.T h e v a r i e t i e s a n d t y p e s o f s a m p l e s c a n b e s e l e c t e d b y r e f e r r i n g t o t h e c l a s s i f i c a t i o n m e t h o d s o f f o o d a n d c o s m e t i c s i n S N/T 0 0 0 1,S N/T 3 2 6 6 a n d S N/T 5 3 2 6.1.4.2 S e l e c t i o n o f v a l i d a t i o n pa r a m