激活剂抑制剂.pptx

实验十二实验十二 激活剂和抑制剂对酶活性的影响激活剂和抑制剂对酶活性的影响 一、实验目的一、实验目的(1)(1)了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响。了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响。(2)2)学习鉴定激活剂和抑制剂影响酶活性的原理和学习鉴定激活剂和抑制剂影响酶活性的原理和方法。方法。二、二、实验原理实验原理 在酶促反应过程中，酶的活性常常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活力增加，称为酶的激活剂激活剂；有些物质它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶分子上的某些必需基团发生变化，使酶的活性降低，称这些物质为酶的抑制剂。抑制剂。n酶的激活剂种类：一些简单的无机离子，如Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+等阳离子和Cl、Br、I、PO43、NO3等阴离子；一些中等大小的有机分子，如抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱苷肽等；能除去抑制剂的物质也称为激活剂，如EDTA能除去重金属，因而能解除重金属对酶的抑制作用。n酶的抑制剂种类：重金属离子(Ag+、Hg2+、Pb2+、Cu2+等)、砷化物、氟化物、生物碱、有机磷农药等都是抑制剂。抑制作用的类型抑制作用的类型不可逆性抑制不可逆性抑制(irreversible inhibition)可逆性抑制可逆性抑制(reversible inhibition)：竞争性抑制竞争性抑制(competitive inhibition)非竞争性抑制非竞争性抑制(non-competitive inhibition)反竞争性抑制反竞争性抑制(uncompetitive inhibition)有机磷化合物对羟基酶的抑制有机磷化合物对羟基酶的抑制n激活剂和抑制剂影响酶活性常具有特异性，如Mg2+对脱羧酶、烯醇化酶等有提高活力的作用，而对肌球蛋白ATP酶则有降低活力的作用n激活剂和抑制剂影响酶活性的剂量是很少的，并且同一种酶可因激活剂的浓度不同而作用不同，如Cl在低浓度时为唾液淀粉酶的激活剂，而在高浓度时（达到13饱和度）就可抑制唾液淀粉酶的活性。唾液由三对大唾液腺（下颌腺、肋腺和舌下腺）分泌的液体和口腔壁上许多小粘液腺分泌的粘液，里面含有唾唾液淀粉酶液淀粉酶,淀粉酶一般作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖元等1，4-葡聚糖，水解1，4-糖苷键的酶。根据作用的方式可分为-淀粉酶（EC3211）与-淀粉酶（EC3212）。可以催化淀粉水分解为麦芽糖。唾液淀粉酶发挥作用的最适pH值在中性范围内。n在本实验中，以稀释的唾液作为淀粉酶液。唾液内的淀粉酶可将淀粉逐步水解为不同阶段的产物，它们遇碘呈不同的颜色，以此来定性研究激活剂和抑制剂对淀粉酶活性的作用(Cl是唾液淀粉酶的激活剂，而Cu2+则是它的抑制剂)。直链淀粉(即可溶性淀粉)不同水解阶段的产物与碘反应的颜色如下：n不同水解的产物：淀粉紫色糊精红色糊精 麦芽糖及少量葡萄糖n与碘的颜色：呈蓝色呈紫色 呈红色不显色三、三、实验仪器与试剂实验仪器与试剂 n1实验材料实验材料 新鲜唾液，淀粉。新鲜唾液，淀粉。n2实验器材实验器材 普通试管：普通试管：20mL420mL4；移液管：；移液管：lmL4lmL4，2mL12mL1，5mLl5mLl；100mL100mL容量瓶，容量瓶，150mL150mL三角瓶；恒温水浴箱；试三角瓶；恒温水浴箱；试管架；漏斗。管架；漏斗。n3实验试剂实验试剂：0.1%淀粉溶液淀粉溶液 1%NaCI溶液溶液 1%CuSO4溶液溶液 1%Na2SO4溶液溶液 KI-I2溶液：称取碘化钾溶液：称取碘化钾3g及碘及碘1g溶于溶于100mL蒸馏水中。蒸馏水中。0.2mol/L pH6.6的磷酸缓冲液的磷酸缓冲液四、操作方法1唾液淀粉酶液的制备：取唾液lmL放人100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至100mL，用脱脂棉花过滤至150mL三角瓶，备用。唾液稀释倍数因人而异，可稀释50400倍，甚至更高。2激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响取试管4支，按下表操作。五五 注意事项注意事项n如如1，2，3，4管呈色反应无明显差别，可能是管呈色反应无明显差别，可能是唾液淀粉酶活力太高或太低，若酶活力太高可唾液淀粉酶活力太高或太低，若酶活力太高可将酶稀释后重做；若酶活力太低，可延长保温将酶稀释后重做；若酶活力太低，可延长保温时间或增加酶的浓度。时间或增加酶的浓度。