第6章一般毒性作用.pptx

一般毒性作用（general general toxicitytoxicity），又称基础毒性，是指外源化学物在一定剂量、一定接触时间和接触方式下对试验动物产生的综合毒效应综合毒效应。n n根据接触毒物的时间长短，可分为：急性毒性急性毒性亚慢性毒性亚慢性毒性慢性毒性慢性毒性重要3 3外来化学物一般毒性试验项目一般毒性测试污染物理化特性了解毒性大小和特征确定阈和阈下剂量了解对机体毒作用靶点和指标了解在体内蓄积和耐受特征急性毒性试验蓄积毒性试验亚慢性毒性试验慢性毒性试验亚急性毒性试验致死试验非致死试验3个月及以内3-6个月6个月至终身4 4第一节 急性毒性作用及其评价5 51 基本概念n n急性毒性(acute toxicity)是指机体(人或试验动物)一次接接触触或24小时内多次接触化学物后在短短期期(最长到14天)内所发生的毒性效应。包包括括一一般般行行为为、外外观观改改变变、大大体体形形态态变变化化以以及及死亡效应，最死亡效应，最主要主要主要主要的观察指标是的观察指标是LDLD5050。重要6 62 急性毒性试验的目的n n测试和求出化学毒物对一种或几种试验动物的致死量(以LD50表示)以及其它的急性毒性参数，了解急性毒作用强度。n n并通过观察动物中毒表现和死亡的情况，了解急性毒作用性质、可能的靶器官和致死原因，提供化学毒物的急性中毒资料、初步评价对人体产生损害的危险性。7 7n n探求化学毒物急性毒性的剂量反应关系与中毒特征。n n为亚慢性、慢性毒性作用试验的染毒剂量设计提供参考依据。n n研究化学毒物急性中毒的预防和急救治疗措施。n n为毒理学机制研究提供线索。8 83 急性毒性试验设计n n3.1 试验动物的选择n n3.2 试验动物的饲养环境n n3.3 实验动物染毒方法n n3.4 染毒剂量与分组n n3.5 试验周期n n3.6 观察指标9 93.1 试验动物的选择n n原则：急急性性毒毒性性试试验验要要求求选选择择对对化化学学毒毒物物的的代代谢谢和和毒效应表现与人的反应尽可能一致的试验动物。毒效应表现与人的反应尽可能一致的试验动物。动物易于获得动物易于获得品系纯化品系纯化价格较低和易于饲养等条件。价格较低和易于饲养等条件。1010n n3.1.1 试验动物的种属和品系1111n n最好用两种种属的动物啮齿类啮齿类:小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔非啮齿类：狗或猴。非啮齿类：狗或猴。n n急性皮肤毒性试验可选用成年大鼠、豚鼠或家兔，优先考虑白色家兔。而急性吸入毒性试验和经口急性毒性试验则优先考虑大鼠。1212试验动物的选择1313n n3.1.2 试验动物的年龄和体重：急急性性试试验验动动物物不不宜宜过过老老或或过过幼幼，通通常常要要求求选选择择刚刚成成年年动动物物进进行行试试验验，而而且且须须是是未未曾曾交交配配和和受受孕的动物。孕的动物。例例如如：大大鼠鼠180180240g240g、小小鼠鼠181825g25g、家家兔兔 2 2 2.5kg2.5kg、豚豚 鼠鼠 200200 250g250g、狗狗 101015kg15kg。同同一一批批试试验验动动物物体体重重变变异异范范围围不不应应超超过过该批动物平均体重的该批动物平均体重的2020。1414n n3.1.3 试验动物的性别：急急性性毒毒性性试试验验的的主主要要内内容容是是求求LDLD5050，除除特特殊殊要要求求外外，一一般般急急性性毒毒性性试试验验对对动动物物性性别别要要求求为为为为雌雌雌雌雄各半雄各半雄各半雄各半。如如果果在在预预试试验验时时发发现现化化学学毒毒物物(如如农农药药)对对雌雌、雄雄动动物物毒毒效效应应的的敏敏感感性性有有明明显显差差异异，则则应应单单独独分分别别求求出出雌雌性性与与雄雄性性动动物物各各自自的的LDLD5050。如如果果试试验验是是为为致致畸畸试试验验作作准准备备，也也可可仅仅作作雌雌性性动动物物的的LDLD5050测试。测试。1515n n3.1.4 动物数量与随机分组：大、小鼠等小动物大、小鼠等小动物 每组每组1010只只狗等大动物狗等大动物 每组每组6 6只只n n分组原则随机化原则1616鼠的编号图图21717n n3.1.5 禁食：经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食大鼠、小鼠隔夜进食；染毒后禁食4h大动物每日上午喂食前染毒染毒后继续禁食24h，但在禁食时要保障饮水。1818n n3.1.6 实验动物的预检：选择健康动物，选择健康动物，1212周的检疫期。周的检疫期。根根据据我我国国的的法法规规和和有有关关规规定定，国国家家实实行行实实验验动动物物的的质质量量监监督督和和质质量量合合格格证证制制度度。实实验验动动物物的的保保种种、饲饲育育、供供应应和和应应用用单单位位，由由各各级级医医学学动动物物管管理理委委员员会会进进行行定定期期监监督督、监监测测，并并颁颁发发实实验验动动物物和和实实验验设设施施的的合合格格证证书书(有有效效期期5 5年年)。应应用用的的实实验验动动物物必必须须有有完完整整的的资资料料。进进行行动动物物实实验验的的人人员员应应经经培培训训，取取得得资资格格认认可可(上上岗岗证证)。实实验验动动物物的的饲饲养养设设施施、环环境境条条件件及及饲饲料料等等必必须须符合有关的国家标准。符合有关的国家标准。19193.2 试验动物的饲养环境n n恒定的温度：223n n湿度：3070%n n照度：昼夜各半n n饲料合格、饮水合格、垫料合格20203.3 实验动物染毒方法的选择:n n染毒途径（exposure routesexposure routes）的选择需考虑：模模拟拟人人在在生生活活和和生生产产环环境境中中实实际际接接触触受受试试物物的的途径和方式；途径和方式；有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较；有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较；受试物的性质和用途；受试物的性质和用途；各种受试物毒性评价程序的要求等。各种受试物毒性评价程序的要求等。n n最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及注射途径。2121n n3.3.1 经口(胃肠道)接触:灌胃灌胃:小鼠小鼠0.21.0mL/0.21.0mL/只或只或0.10.5mL/10g0.10.5mL/10g大鼠一次灌胃体积不超过大鼠一次灌胃体积不超过5mL/5mL/只只家兔不超过家兔不超过10mL/2kg10mL/2kg狗不超过狗不超过50mL/10kg 50mL/10kg 吞咽胶囊吞咽胶囊:适合大动物适合大动物掺入饲料法掺入饲料法重要2222n n3.3.2 经呼吸道接触 吸入接触注入肺内 n n3.3.3 经皮肤接触 2323n n3.3.4 注射途径接触2424染毒的时间n n由于动物存在时间节律，外源化学物在不同时间表现的毒性反应有差别，所以在毒理学实际工作中，尤其是进行亚慢性和慢性染毒时，每日的染毒时间应固定一致，以防止出现时间毒性的影响。25253.4 染毒剂量与分组n n3.4.1 3.4.1 查阅文献查阅文献 了了解解化化学学毒毒物物的的结结构构式式、分分子子量量、常常温温常常压压下下的的状状态态、熔熔点点、沸沸点点、密密度度、闪闪点点、挥挥发发度度、蒸蒸气气压压、水水溶溶性性和和脂脂溶溶性性等等理理化化特特性性，生生产产批批号号及及纯纯度度，杂杂质质成成分与含量等。分与含量等。确确定定使使用用哪哪一一种种计计算算方方法法求求LDLD5050，然然后后再再设设计计剂剂量量分分组组。LDLD5050的的计计算算方方法法常常用用寇寇氏氏法法、概概率率单单位位法法、霍霍思法等。思法等。找找出出与与受受试试化化学学毒毒物物结结构构与与理理化化性性质质近近似似的的化化学学物物的的毒毒性性资资料料，并并以以文文献献资资料料中中相相同同的的动动物物种种系系和和相相同同接接触触途途径径所所测测得得的的LDLD5050(LC(LC5050)值值作作为为受受试试化化学学物物的的预预期毒性中值。期毒性中值。2626n n3.4.2 预试验 设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并在该剂量的上下各设计l一2个剂量组作为预试验剂量。根据确定的剂量组进行染毒。根据预试验的死亡资料确定组距。2727n n可根据以下公式计算出剂量分组：i=(lgLDi=(lgLD9090-lgLD-lgLD1010)(n-1)(n-1)或：或：i=(lgLDi=(lgLD100100-lgLD-lgLD0 0)(n-1)(n-1)n n式中式中i i为组距为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差相邻的两个剂量组对数剂量之差)；n nn为设计的剂量组数。2828n n3.4.3 正式试验一般来说、根据试验设计所选用的LD5050计算方法来确定组数。例如几率单位法、寇氏法一般设610个剂量组；霍恩法固定设4个剂量组。求得i值后以最低剂量组(LD0 0或LD1010)的对数剂量加上一个i值，即是第二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对数即得出各组剂量的真实值2929n n霍恩（Horn）法推荐使用4个染毒剂量组，每组动物数相等（4只或5只）。先将动物在实验动物房饲养观察12d，控制喂养环境，并进行随机分组。小鼠禁食4小时后（在禁食时要保障饮水的供应），给予受试物。3030n n一个染毒剂量系列的剂量组距为2.15倍，另一为3.16倍。以以 组组 距距 2.152.15倍倍 设设 计计 则则 剂剂 量量 系系 列列 为为 110110t t、2.15102.1510t t、4.64104.6410t t（t=0t=0、11、22）。）。以以 组组 距距 3.163.16倍倍 设设 计计 则则 剂剂 量量 系系 列列 为为 110110t t、3.16103.1610t t（t=0t=0、11、22）。）。31313.5 试验周期n试验周期以2周为宜。32323.6 观察指标n n3.6.1 致死剂量或浓度LDLD5050是是经经统统计计学学计计算算得得到到的的毒毒性性参参数数，并并可可报报告告其其9595可可信信限限。LDLD5050(LC(LC5050)值值是是一一个个统统计计量量，较较少少受受实实验验动动物物个个体体易易感感性性差差异异的的影影响响，较较为为准准确确，因因此此是是最最重重要要的的急急性性毒毒性性参参数数，也也用用来来进行急性毒性分级。进行急性毒性分级。重要3333n n对于非致死性指标的量化问题，可以利用ED50(median effective dose)和相应的剂量-反应关系曲线来解决。ED50是指一次给予实验动物某种化学物引起动物群体中50的个体出现某种特殊效应的剂量，该指标也是通过统计学计算处理得到的。3434n n3.6.2 中毒症状中毒症状有有有有些些些些化化化化学学学学物物物物(如如如如有有有有机机机机磷磷磷磷类类类类化化化化合合合合物物物物)中中中中毒毒毒毒症症症症状状状状发发发发展展展展迅迅迅迅速速速速且且且且很很很很快快快快死死死死亡亡亡亡。而而而而有有有有些些些些化化化化学学学学物物物物的的的的中中中中毒毒毒毒症症症症状状状状发发发发展展展展缓缓缓缓慢慢慢慢，甚甚甚甚至至至至出出出出现现现现症症症症状状状状缓缓缓缓解解解解，此此此此后后后后再再再再发发发发生生生生严严严严重重重重症状而死亡。症状而死亡。症状而死亡。症状而死亡。如如如如碳碳碳碳基基基基镍镍镍镍染染染染毒毒毒毒早早早早期期期期先先先先出出出出现现现现上上上上呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道症症症症状状状状，当当当当日日日日即即即即可可可可缓缓缓缓解解解解，2 23 3日日日日后后后后或或或或更更更更晚晚晚晚些些些些才才才才出出出出现现现现严严严严重重重重的的的的肺肺肺肺水肿，呼吸困难而死亡。水肿，呼吸困难而死亡。水肿，呼吸困难而死亡。水肿，呼吸困难而死亡。3535n n化学物给实验动物染毒后，动物往往出现兴奋抑制死亡，或者抑制死亡的现象。如如以以含含有有氰氰基基的的氰氰氢氢酸酸和和丙丙烯烯腈腈对对大大鼠鼠和和小小鼠鼠染染毒毒后后，都都很很快快出出现现兴兴奋奋。染染毒毒丙丙烯烯腈腈的的动动物物首首先先出出现现活活动动增增加加、骚骚动动、窜窜跑跑、甚甚至至跳跳跃跃，之之后后出出现现呼呼吸吸困困难难，耳耳与与尾尾青青紫紫色色；而而氰氰氢氢酸酸呈呈一一过过性性兴兴奋奋，呼呼吸吸加加快快、加加深深，之之后后呼呼吸吸困困难难，耳耳与与尾尾则则为为桃桃红红色色。可可见见同同为为氰氰化化物物，其其中毒机制有所不同。中毒机制有所不同。3636n n3.6.3 死亡和死亡时间重重点点观观察察和和记记录录每每只只动动物物死死亡亡的的时时间间，特特别别是是最最早早出出现现死死亡亡的的时时间间以以及及各各个个剂剂量量组组动动物物的的死死亡亡数数。分分析析中中毒毒死死亡亡时时间间的的规规律律具具有有一一定定意意义义，可为深人研究化学物的毒作用机制提供参考。可为深人研究化学物的毒作用机制提供参考。小小鼠鼠腹腹腔腔注注射射相相同同剂剂量量的的乙乙醇醇，发发现现下下午午4 4时时和和8 8时时死死亡亡率率最最高高；给给大大鼠鼠相相同同剂剂量量的的苯苯丙丙胺胺，清清晨晨3 3时时的的死死亡亡率率为为78%78%，而而上上午午8 8时时仅仅为为7%7%。3737n n3.6.4 体重在在观观察察试试验验动动物物中中毒毒症症状状的的过过程程中中，应应同同时时观观察察体体重重的的变变化化。体体重重可可以以反反映映动动物物中中毒毒后后的的整整体体变变化化。体体重重改改变变的的原原因因很很多多，若若化化学学毒毒物物刺刺激激或或损损伤伤消消化化道道可可出出现现试试验验动动物物饮饮食食减减少少甚甚至至拒拒食食，表表现现为为体体重重减减轻轻。若若化化学学毒毒物物引引起起腹腹泻泻，将将影影响响食食物物吸吸收收和和利利用用，体体重重也也会会减减轻轻。如如果果化化学学毒毒物物影影响响水水的的摄摄取取或或肾肾功功能能急急性性损损伤伤，也也可可能能在在体体重重上上反反映映出出来来。所所以以，对对存存活活动动物物尤尤其其是是对对低低于于LDLD50剂剂量量组组的的存存活活动动物物应应在在观观察察期期1414天天内内称称量量其其体体重重的的变变化化以以便便了了解解受受试试物物引引起起毒毒效效应应的的持持续续时时间。间。3838n n3.6.5 病理检查及其他指标:急急性性毒毒性性试试验验中中，对对死死亡亡的的动动物物均均应应及及时时进进行行大大体体解解剖剖和和病病理理组组织织学学检检查查，肉肉眼眼观观察察主主要要脏脏器器的的大大体体病病理理变变化化，如如脏脏器器大大小小、外外观观、色色泽泽的的变变化化，有有无无充充血血、出出血血、水水肿肿或或其其它它改改变变，对对有有改改变变的的脏脏器器进进行行取取材材做做组组织织病病理理学学检检查查。对对存存活活动动物物在在观观察察期期结结束束时时进进行行大大体体病病理理检检查查必必要要时时做做组组织织病病理理学学检检查查。根根据据试试验验需需要要可可进进一一步步扩扩大大观观察察项项目目如如体体温温、心心电电图图、脑脑电电图或进行某些生化指标测定等。图或进行某些生化指标测定等。3939观察内容40404 急性毒性评价外源化学物急性毒性分级（外源化学物急性毒性分级（外源化学物急性毒性分级（外源化学物急性毒性分级（WHOWHO）毒性分级毒性分级毒性分级毒性分级大鼠一次经口大鼠一次经口大鼠一次经口大鼠一次经口LDLD50 50 (mg/kg)(mg/kg)6 6只大鼠吸入只大鼠吸入只大鼠吸入只大鼠吸入4 4小时，死小时，死小时，死小时，死亡亡亡亡2424只的浓度只的浓度只的浓度只的浓度(ppm)(ppm)兔经皮兔经皮兔经皮兔经皮LDLD5050(/mg/kg)(/mg/kg)对人可能致死的估计量对人可能致死的估计量对人可能致死的估计量对人可能致死的估计量g/kgg/kg总量总量总量总量(g/60kg)(g/60kg)剧毒剧毒剧毒剧毒111010550.050.050.10.1高毒高毒高毒高毒111010550.050.053 3中等毒中等毒中等毒中等毒505011515100010004141我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法(1994)(1994)急性毒性分级急性毒性分级急性毒性分级急性毒性分级大鼠经口大鼠经口大鼠经口大鼠经口LD50(mg/kg)LD50(mg/kg)大致相当于大致相当于大致相当于大致相当于70kg70kg人的致死量人的致死量人的致死量人的致死量6 6级级级级(极毒极毒极毒极毒)11稍尝稍尝稍尝稍尝,7,150001500010501050克克克克目前我国食品毒理则沿用了国际上六级标准，即极毒、剧毒、中等毒、低毒、实际无毒、无毒 重要42425 经典急性毒性试验的局限性n n（1）消耗的动物量大按经典法的要求测LD50，一次实验需要60100只动物。4343n n（2）获得的信息有限LDLD5050的的值值又又不不能能等等同同于于急急性性毒毒性性，死死亡亡仅仅仅仅是是评价急性毒性的许多观察终点之一。评价急性毒性的许多观察终点之一。化化学学物物单单次次大大剂剂量量急急性性中中毒毒，动动物物多多死死于于中中枢枢神神经经系系统统及及心心血血管管功功能能障障碍碍，并并不不能能很很好好地地显显示示出出各各自自的的毒毒作作用用特特征征，另另外外，由由于于死死亡亡迅迅速速，各各种种器器质质性性变变化化尚尚未未发发展展，不不能能显显示示出出靶靶器器官官的病变。的病变。4444n n（3 3）测得的）测得的LDLD5050仅仅是一个近似值仅仅是一个近似值 19771977年年欧欧洲洲共共同同体体组组织织了了1313个个国国家家的的100100个个实实验验室室，统统一一主主要要的的实实验验条条件件对对5 5种种化化学学物物的的LD50LD50进进行行测测定定。根根据据收收集集到到的的8080个个实实验验室室的的结结果果分分析析，结结果果仍仍然然存存在在相相当当大的差别，可达大的差别，可达2.442.448.388.38倍倍 4545n n（4）在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的症状观察是不够的，更需要的是生理学、血液学及其它化验检查所提供的深入细致的毒性信息。ICH(1991)ICH(1991)规规定定在在新新药药的的报报批批材材料料中中，不不必必准准确确地地测测定定LDLD5050，只只需需了了解解其其近近似似致致死死量量和和详详细细观察记录中毒表现即可。观察记录中毒表现即可。4646第二节 蓄积毒性作用及其评价47471 基本概念n n化学毒物进入机体后，经过生物转化以代谢产物或化学物原型排出体外。但是，当化学毒物反复多次给动物染毒，化学毒物进进入入机体的速度(或总量)超超过过代谢转化的速度和排排泄泄的速度(或总量)时，化学毒物或其代谢产物就有可能在机体内逐渐增加并贮留，这种现象称为化学毒物的蓄蓄积积作作用用(accumulation)(accumulation)。4848n n蓄积作用实际上有二个含义：物质蓄积(material accumulation)功能蓄积(functional accumulation)(functional accumulation)49492 蓄积毒性试验方法及其评价n n化化学学毒毒物物的的蓄蓄积积作作用用是是发发生生慢慢性性中中毒毒的的物物质质基基础础，因因此此研研究究化化学学毒毒物物在在机机体体内内的的蓄蓄积积性性是是评评价价化化学学毒毒物物能能否否引引起起潜潜在在慢慢性性毒毒性性的的依依据据之之一一，也也是是卫卫生标准制订过程选择安全系数的主要依据。生标准制订过程选择安全系数的主要依据。n n蓄蓄积积毒毒性性试试验验是是研研究究化化学学毒毒物物基基础础毒毒性性的的重重要要内内容容之之一一，目目的的是是了了解解化化学学毒毒物物蓄蓄积积毒毒性性的的强强弱弱，并并为为慢慢性性毒毒性性试试验验及及其其他他有有关关毒毒性性试试验验的的剂剂量量选选择提供参考。择提供参考。重要50502.1 蓄积系数法 n n蓄蓄积积系系数数(accumulation(accumulation coefficient)coefficient)是是多多次次染染毒毒使使半半数数动动物物出出现现效效应应(或或死死亡亡)的的累累积积剂剂量量EDED50(n)50(n)与与一一次次染染毒毒使使半半数数动动物物出出现现相相同同效效应应(或或死死亡亡)的的剂剂量量EDED50(1)50(1)的比值，即：的比值，即：n nK KEDED50(n)50(n)/ED/ED50(1)50(1)n nK KLDLD50(n)50(n)/LD/LD50(1)50(1)5151n n2.1.1 固定剂量法：一一般般常常选选用用大大、小小鼠鼠灌灌胃胃或或腹腹腔腔注注射射方方法法进进行行染染毒毒。先先求求出出LDLD5050，然然后后选选取取相相同同条条件件的的4040只只(或或更更多多)实实验验动动物物，分分为为两两组组，一一为为染染毒毒组组，一为对照组，每组至少一为对照组，每组至少2020只，雌雄各半。只，雌雄各半。试试验验组组在在1 12020l l5LD5LD5050的的范范围围内内选选定定一一个个剂剂量量，每每日日以以固固定定剂剂量量、定定时时和和相相同同途途径径进进行行染染毒毒,试试验验期期间间观观察察记记录录每每组组动动物物死死亡亡数数。当当试试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。对照组如何处理？5252n n此时，计算累积总接触剂量LD50(n)，根据公式计算K值，然后依蓄积系数分级标准评价。但若接触剂量已累积达到5个LD50剂量，也可终止试验。n n试验期最长100d，最短25d。n n应根据体重调整剂量。5353n n2.1.2 剂量递增法：在在试试验验期期间间，当当化化学学毒毒物物引引起起动动物物累累积积死死亡亡一一半半时时即即可可终终止止试试验验，计计算算K K值值进进行行评评价价。一一般般来来说说，在在试试验验第第2l2l天天也也可可结结束束试试验验，因因为为这这之之前前如如果果动动物物没没有有死死亡亡或或死死亡亡数数不不足足一一半半，说说明明其其累累积积剂剂量量已已达达5.26LD5.26LD5050，即即K K5 5。使使用用本本方方法法时时要要注注意意染染毒毒期期间间定定期期(每每4 4天天一一次次)给给动动物物称称重重，按按实实测测体体重重，调调整整化化学学毒毒物物的的染染毒毒绝绝对对量。量。5454n n2.1.3 剂量固定的20天蓄积法：它它通通常常采采用用经经口口灌灌胃胃染染毒毒方方式式，将将动动物物随随机机分分为为5 5个个组组，包包括括阴阴性性对对照照组组和和1/20 1/20 LDLD5050、l/10 l/10 LDLD5050、1/5 1/5 LDLD5050和和1/2 1/2 LDLD5050四四个个剂剂量量组组，每每组组动动物物数数1010只只，雌雌雄雄各各半半。每每日日染染毒毒一一次次，连连续续染毒染毒2020天。观察每组雌雄合计的死亡动物数量。天。观察每组雌雄合计的死亡动物数量。5555n n试验结束时根据下列标准进行评定：各剂量组均无死亡，即为蓄积性不明显；各剂量组均无死亡，即为蓄积性不明显；如如仅仅1/2LD1/2LD5050剂剂量量组组有有死死亡亡，其其他他组组均均无无死死亡，则为弱蓄积性；亡，则为弱蓄积性；如如1/20LD1/20LD5050剂剂量量组组无无死死亡亡，其其他他各各组组间间死死亡亡数有剂量反应关系时，则为中等蓄积性；数有剂量反应关系时，则为中等蓄积性；如如1/20LD1/20LD5050剂剂量量组组有有死死亡亡，且且有有剂剂量量反反应应关关系，则为强蓄积性。系，则为强蓄积性。56562.2 生物半减期法：n n生生物物半半减减期期(biological(biological half-lifehalf-life，t t1/21/2)法法是是用用毒毒物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用。物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用。n nt1/2的测定的测定测测定定整整个个机机体体的的半半减减期期较较为为复复杂杂，通通常常是是间间接接测测定定环环境境污污染染物物在在血血液液中中的的浓浓度度降降低低5050所所需需的时间。的时间。57572.3蓄积率及其测定n n蓄积率(cumulative percent)，指在一定的时间内，外源化学物在体内的蓄积量与同一期间进入机体总量的百分比。5858蓄积率测定方法n n常常用用的的动动物物为为小小鼠鼠或或大大鼠鼠。首首先先将将受受试试动动物物分分成成蓄蓄积积和和对对照照两两大大组组，每每组组60607070只只。蓄蓄积积组组动动物物每每次次按按一一定定剂剂量量(低低于于最最小小致致死死量量)按按同同一一给给毒毒途途径径预预先先给给受受试试物物，经经过过一一定定时时间间之之后后，按按常常规规方方法法测测定定蓄蓄积积组组和和对对照照组组的的LDLD5050，并并按按下下式式计计算算蓄蓄积率积率:蓄蓄积积率率=（对对照照组组LDLD5050 -蓄蓄积积组组LDLD5050）/蓄蓄积积组组预预给受试物的总剂量给受试物的总剂量 100%100%蓄蓄积积率率应应标标明明预预先先给给受受试试物物的的时时间间及及剂剂量量，在在相相同同时时间间及及剂剂量量条条件件下下，蓄积率越大则表示该物质在体内的蓄积作用越强蓄积率越大则表示该物质在体内的蓄积作用越强 ，反之则越弱。，反之则越弱。59593 关于机体的耐受性n n在某些情况下，某一外来化学物反复作用于机体后，有时一些本来可以引起机体呈现一定剂量的效应，却没有引起反应，必须加大剂量才能呈现预期效应。加速代谢加速代谢感受能力降低感受能力降低6060第三节 亚慢性、慢性毒性作用及其评价61611 基本概念n n亚亚慢慢性性毒毒性性(subchronic(subchronic toxicity)toxicity)是指人或实验动物连续接触较长时间、较大剂量的外源化合物所引起的毒性效应。n n慢慢性性毒毒性性(chronic(chronic toxicity)toxicity)是指人或实验动物长期(甚至终生)反复接触低剂量的化学毒物所产生的毒性效应。重要62622 试验目的：n n研研研研究究究究受受受受试试试试物物物物亚亚亚亚慢慢慢慢性性性性和和和和慢慢慢慢性性性性毒毒毒毒性性性性剂剂剂剂量量量量反反反反应应应应(效效效效应应应应)关关关关系系系系，确确确确定定定定其其其其观观观观察察察察到到到到有有有有害害害害作作作作用用用用的的的的最最最最低低低低剂剂剂剂量量量量(LOAEL)(LOAEL)和和和和未未未未观观观观察察察察到到到到有有有有害害害害作作作作用用用用的的的的剂剂剂剂量量量量（NOAELNOAEL），提提提提出出出出此此此此受受受受试物的安全限量参考值试物的安全限量参考值试物的安全限量参考值试物的安全限量参考值;n n研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；n n确确确确定定定定受受受受试试试试物物物物亚亚亚亚慢慢慢慢性性性性和和和和慢慢慢慢性性性性毒毒毒毒性性性性的的的的效效效效应应应应谱谱谱谱，对对对对在在在在急急急急性性性性及及及及亚亚亚亚急急急急性性性性毒毒毒毒性性性性试试试试验验验验中中中中发发发发现现现现的的的的毒毒毒毒作作作作用用用用提提提提供供供供新新新新的的的的信信信信息息息息，并并并并发发发发现现现现在在在在急急急急性性性性及及及及亚亚亚亚急急急急性性性性毒毒毒毒性性性性试试试试验验验验中中中中未未未未发发发发现现现现的的的的毒作用；毒作用；毒作用；毒作用；6363n n研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性;n n亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择提供依据;n n确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，为将毒性研究结果外推到人提供依据。64643 亚慢性和慢性毒性试验设计n n3.1 实验动物选择 亚慢性毒性试验亚慢性毒性试验 年龄：年龄：大鼠大鼠80100g 狗狗 812月月 小鼠小鼠1015g数量：数量：小动物小动物20 大动物大动物6性别：性别：雌雄各半雌雄各半 慢性毒性试验慢性毒性试验年龄：年龄：大鼠大鼠 5070g 狗狗 8月月 小鼠小鼠 初断乳初断乳数量：数量：小动物小动物40 大动物大动物8性别：性别：雌雄各半雌雄各半65653.2 实验动物染毒期限：n n工业毒理学 13个月n n食品毒理学 36个月n n环境毒理学 36个月n n致癌试验 接近或等于动物的预期寿命666667673.3 实验动物染毒方式n n经口、经呼吸道、经皮肤。68683.4 试验分组和剂量设计n n亚慢性毒性的剂量选择亚慢性毒性的剂量选择亚慢性毒性的剂量选择亚慢性毒性的剂量选择 阴性对照组阴性对照组阴性对照组阴性对照组 低剂量组低剂量组低剂量组低剂量组 中剂量组中剂量组中剂量组中剂量组 高剂量组高剂量组高剂量组高剂量组n n 急性毒性的阈剂量急性毒性的阈剂量急性毒性的阈剂量急性毒性的阈剂量n n 1/201/5 LD1/201/5 LD5050 组组组组距距距距：310310倍倍倍倍，最最最最低低低低不不不不小于小于小于小于2 2倍倍倍倍n n慢性毒性的剂量选择慢性毒性的剂量选择慢性毒性的剂量选择慢性毒性的剂量选择 阴性对照组阴性对照组阴性对照组阴性对照组 低剂量组低剂量组低剂量组低剂量组 中剂量组中剂量组中剂量组中剂量组 高剂量组高剂量组高剂量组高剂量组 亚亚亚亚慢慢慢慢性性性性阈阈阈阈剂剂剂剂量量量量或或或或其其其其1/51/2 1/51/2 1/101/10 LDLD5050 组组组组距距距距：510510倍倍倍倍，最最最最低低低低不不不不小小小小于于于于2 2倍倍倍倍69693.5 观察指标7070本章重点：n n1、基本概念：急性毒性、蓄积毒性、亚慢性毒性、慢性毒性、蓄积系数n n2、我国食品毒理急性毒性分级法7171谢谢！