蒙药健脾五味丸降血脂作用研究.pdf

作者简介：田向阳（2000），男，汉族，内蒙古集宁人，在读硕士研究生，研究方向为中蒙药质量分析；何春龙（1981）男，汉族，内蒙古呼和浩特人，硕士研究生，副教授，研究方向为中蒙药质量标准及药效物质基础研究。蒙药健脾五味丸降血脂作用研究 田向阳 吴琼 郭轩易 于智远 何春龙（通讯作者）内蒙古医科大学药学院，内蒙古 呼和浩特 010110 摘要：摘要：目的 通过药理学实验观察蒙药健脾五味丸对高脂血症小鼠的降血脂作用效果。方法 采用保健食品检验与评价技术规范中提供的高脂饲料诱导技术，构建高脂血症小鼠动物模型，随机分为 0.5 gkg-1 d-1、1.0 gkg-1 d-1、2.0 gkg-1 d-1 三个剂量组、血脂康模型对照组和空白实验对照组。经过 30d 的持续灌胃实验，评估健脾五味丸对于调节血脂的影响，包括总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白及其低密度脂蛋白的影响，评价健脾五味丸降血脂作用效果。结果 使用健脾五味丸治疗的小鼠都可以缓解高脂血症的症状，并且可以明显减少血清中的总胆固醇（TG）、甘油三酯 TC）以及低密度脂蛋白（LDL-C）的含量。结论 该方法简便、准确，健脾五味丸能显著改善小鼠血脂水平，减轻高脂饮食造成的体重增加，可用于临床治疗高脂血症。关键词：关键词：蒙药；健脾五味丸；降血脂 中图分类号：中图分类号：R286 A study on hypolipidemic ects of Jianpiwuwei pills Tian Xiangyang Wu Qiong Guo Xuanyi Yu Zhiyuan HE Chunlong(Corresponding author)Department of pharmacy,Inner Mongolia Medical University Inner Mongolia Medical University Hohhot 010110 Abstract:Objective:To observe the lipid-lowering effect of Mongolian medicine Jianpi Wuwei Wan on hyperlipidemic mice through pharmacological experiments.Method:Using the high-fat feed induction technology provided in the Technical Specification for Health Food Inspection and Evaluation,a hyperlipidemia animal model was constructed.It was randomly divided into three dose groups:0.5 g kg-1 d-1,1.0 g kg-1 d-1,2.0 g kg-1 d-1,Xuezhikang model control group,and blank experimental control group.After a 30 day continuous gavage experiment,evaluate the effect of Jianpi Wuwei Pill on regulating blood lipids,including the effects of total cholesterol,triglycerides,high-density lipoprotein,and low-density lipoprotein,and evaluate the lipid-lowering effect of Jianpi Wuwei Pill.Result:Mice treated with Jianpi Wuwei Wan were able to alleviate symptoms of hyperlipidemia and significantly reduce the levels of total cholesterol(TG),triglycerides(TC),and low-density lipoprotein(LDL-C)in the serum.Conclusion:This method is simple and accurate.Jianpi Wuwei Wan can significantly improve blood lipid levels in mice,reduce weight gain caused by high-fat diet,and can be used for clinical treatment of hyperlipidemia.Key words:Mongolian medicine;Spleen-strengthening five taste pill;Reduce blood lipid 由于居民的生活质量的显著改善，他们的膳食习惯也得到了改变，导致高脂血症的患者数量呈现出持续上涨的趋势。高脂血症是一种常见的血脂代谢紊乱疾 病，它 可 以 导 致 人 类 血 清 胆 甾 醇（Total Cholesterol，TC）、甘油三酯（TriglyCeride，TG）、低密度脂蛋白（LDL-c）的升高和血清高密度脂蛋白（High-density Lipoprotein Cholesterol，HDL-C）的降低1。高脂蛋白血症是一种严重的血液疾病，因为血液中的脂质主要通过脂蛋白来代谢。高脂血症通常会对人体的血管、心脏、大脑和皮肤造成严重的危害，但大多数患者并不会有明显的症状。根据最新研究，到 2010 年至 2030 年，中国的心血管疾病患者数量将达到 920 万2。高脂血症是动脉粥样硬化（AS）的常见原因，因此治疗高脂血症对于预防和控制 AS 的发生非常重要3。目前，西医常用的降血脂化学药物可以带来短期的改善，但也会产生一些副作用。蒙医学在高脂血症的诊断和治疗方面拥有丰富的理论知识和实践经验，而蒙药则是本地独特的药物资源，其在高脂血症患者的治疗中表现出了显著的疗效。健脾五味丸，蒙药名布特格勒其5，为传统蒙药制剂,由诃子、五灵脂、寒水石、土木香、胡黄连五味药组成。该药收载在中华人民共和国药品标准（蒙药分册），具有健脾和胃、理气镇痛功能,主要用于“赫依协日”、“宝日”、“巴达干”病引起的胃脘胀满、上腹疼痛症4。蒙医在临床使用中，经常用其和其他药物配伍用于治疗高脂血症，为了进一步验证其降血脂作用，本研究通过建立小鼠高脂血症模型，观察健脾五味丸对高脂血症小鼠血脂的影响，通过实验来阐明其降血脂功效，为蒙药健脾五味丸降血脂功效提供科学依据并为其进一步开发利用提供参考。1 材料与方法 1.1 仪器与试药 1.1.1 仪器 万分之一分析天平（型号:AL204）购于梅特勒-托利多中国有限公司；台式高速离心机（型号 TQL-20M）购于上海卢湘仪离心机仪器有限公司；低温冰箱（型号 HYCD-282C，青岛海尔股份有限公司）；酶标仪（型号：SuPerMax 3100）购于上海闪谱生物科技有限公司；数显恒温水浴锅（型号：NTT-2200）购于上海爱朗仪器有限公司；1.1.2 试药 内蒙古库伦蒙药有限公司提供健脾五味丸（批号：220309）；北大维信生物科技有限公司提供血脂康（批号：20220315）；南京建成生物工程研究所提供血清测定试剂盒，包括 TC 测定试剂盒（批号20210803）、TG 测定试剂盒（批号 20210803）、LDL-C 测定试剂盒（批号 20210803）和 HDL-C 测定试剂盒（批号 20210803）；北京科澳协力饲料有限公司提供高脂饲料（批号：2021031566）；采血管；水为蒸馏水。1.1.3 实验动物及饲养环境 昆明小鼠(20 2)g，雄性，购自于内蒙古医科大学实验动物管理中心。放置于恒温恒湿的动物饲养环境中，每次 12h 明暗循环，饲养 3 天，其间小鼠可以自由进食和饮水，采用普通基础饲料喂养。1.2 灌胃药物配制 取健脾五味丸，研细（过 6 号筛），称取 80g，用 0.5%羧甲基纤维素钠溶解并充分混合制备成1000ml 的混悬液，制备成浓度为 0.08g/ml 的给药溶液；从中取出 200ml，以 0.5%羧甲基纤维素钠为溶剂，稀释成浓度为 0.04g/ml 的给药溶液；同法再取 100ml，以 0.5%羧甲基纤维素钠为溶剂，稀释成浓度为0.02g/ml 的给药溶液。1.3 剂量选择 以正常成人体重 60kg 计算，按照健脾五味丸使用说明书换算，人体推荐日用量为 0.1gkg-1 d-1，小鼠给药剂量设计为低、中、高三种剂量，按相当于人体日用量的 5 倍、10 倍、20 倍确定，即各组小鼠每日灌胃剂量分别为 0.5 gkg-1 d-1、1.0 gkg-1 d-1、2.0gkg-1 d-1。按小鼠平均体重 20g 计算，低、中、高剂量组给药方式为 0.02g/ml（0.5ml）0.04g/ml（0.5ml）、0.08g/ml（0.5ml），以保证给药体积的一致性。1.4 高脂血症模型的建立 在 三天的适应性饲养期间，我们从 90 只健壮的雄性小鼠中抽取样本，并根据它们的体重将它们随机划分成两组：一组是正常对照组，有 20 只；另一组是高脂模型组，有 70 只。在 4 周的喂养期内，我们分别给予了普通基础饲料和高脂饲料喂养小鼠，从第 0 周起始，每周对每个试验组的小鼠实施体重测定，在试验完成之后，从每个试验组中分别抽出 10 只，摘眼球取血，将其放入温度 4的离心机中，以4000r/min 的转速离心 10min，以获得血清样本。按照试剂盒使用说明，对血清样品进行处理，并采用酶标仪对血清样本进行检验，比较正常组与高脂模型组小鼠血清中 TC 和 TG 含量，采用 SPSS 18.0 软件进行统计分析，如果结果有显著的变化，则表明高脂血症模型已经建立5,6。1.5 小鼠给药 小鼠造模成功后，把它们随机地划分为三个不同的实验组别：高脂模型组;血脂康阳性对照组;低剂量、中剂量和高剂量药物治疗组;每组 12 只。阳性对照组给予剂量为 0.24gkg-1 d-1 的血脂康，药物组按“1.3”剂量方法分别灌胃给予 0.5 gkg-1 d-1、1.0 gkg-1 d-1、2.0gkg-1 d-1的健脾五味丸，药物组给药期间，分别对正常组及高脂模型组小鼠灌胃给予 0.5ml 的 0.5%的羧甲基纤维素钠。连续给药 4 周，期间普通饲料喂养正常组小鼠，高脂饲料喂养其他组小鼠，并在每周测量各组小鼠的体重。1.6 样本的采集及测定 各组小鼠给药结束后禁食 12 h，摘眼球取血，将血液放入温度 4的离心机中，以 4000r/min 的转速离心 10min，分取血清样本。按试剂盒说明分别处理血清样品，采用酶标仪分别测定血清中 TC、TG、HDL-C 和 LDL-C 的水平。1.7 数据处理 以 s 表示实验测定结果，使用 SPSS 18.0 软件对所有实验测定结果进行数理统计分析，采用单因素方差分析来评估组间的显著性差异，P 0.05 和 P 0.01 分别代表组间有显著性差异和组间有极显著性差异。1.8 评价依据 根据保健食品检验与评价技术规范7的标准，采用以下方式来评价降血脂治疗效果：使用药物后，任一治疗组相比较模型对照组，TC 和 TG 都下降，并且 P 0.05 或 P 0.01，认为具有统计学意义。此外，任一治疗组血清样本的 HDL-C 也没有明显的下降，则认为这种药物是可以降低血脂的，实验结果为阳性8。2 实验结果 2.1 高脂血症小鼠造模结果 经过造模，我们发现正常组和高脂模型组的小鼠都有所增长。特别是模型组的小鼠，它们的体重显著增加（P 0.01），而且 TC 和 TG 也显著提升(P 0.01)。本实验证明，实验成功建立高脂小鼠模型，详情参见表 1 和表 2。2.2 给药对高脂血症小鼠体重的影响 经过小鼠灌胃服用健脾五味丸治疗，各实验组小鼠的体重都有增加。模型组小鼠体重显著高于正常组，其差异具有统计学意义（P 0.01）；灌胃给药治疗后的小鼠体重增长幅度明显低于未接受治疗的模型组小鼠（P 0.01）。通过本实验，我们发现，不同的药物治疗方案都能够有效控制小鼠体重的变化，并且显著降低了它们的体重增长。详情请见表 3。2.3 给药对小鼠血脂水平的影响 经健脾五味丸灌胃治疗，与模型组小鼠相比，无论是使用低、中、高剂量的健脾五味丸，还是血脂康对照组，都可以明显降低高脂小鼠的血脂指数 TC、TG以及 LDL-C（P 0.01）同时明显升高 HDL-C 的水 表 1 造模结束后小鼠体重变化量（n=10）组别 造模前/g 造模后/g 体重差/g 正常组 22.9210.509 31.8910.376 8.970.133b 模型组 22.8320.508 41.0480.593 18.216-0.086b 注：与正常组比较，a:P0.05;b：P0.01。表 2 造模结束后小鼠 TC 和 TG 值（n=10）组别 TC/mmolL-1 TG/mmolL-1 正常组 3.1670.04 0.5590.027 模型组 5.1680.027b 0.8630.022b 注：与正常组比较，a:P0.05;b:P0.01。表 3 各组小鼠体重变化（n=10）组别 剂量/gkg-1 d-1 0 周 2 周 4 周 给药前后体重差/g 正常组 31.7010.47 33.5940.395 35.6930.306 3.992-0.164 模型组 40.7720.317 43.7450.252 46.4130.301 5.641-0.017b 血脂康组 0.24 40.9560.177 41.9310.187 42.2060.428 1.250.251d 0.5 40.7850.295 43.5240.251 42.2630.276 1.478-0.019d 药物组 1 40.9640.283 43.7850.276 42.7280.305 1.7640.022d 2 40.7670.376 42.8530.209 41.2560.099 0.489-0.276d 注：与正常组比较，a:P0.05;b:P0.01;与模型组比较，c:P0.05;d:P0.01。表 4 对高脂血症小鼠血脂水平的影响（n=10）组别 剂量/gkg-1 d1 TC/mmolL-1 TG/mmolL-1 HDL-C/mmolL-1 LDL-C/mmolL-1 正常组 3.6350.023 0.6060.021 2.7340.028 0.6480.021 模型组 6.7970.036b 1.110.018b 1.9270.018b 0.9970.026b 血脂康组 0.24 3.90.036d 0.5860.01d 2.6040.017d 0.6380.019d 0.5 5.440.074d 0.8670.009d*2.0110.02d 0.8230.013d 药物组 1 4.4720.056d 0.6490.027d*2.4590.017d 0.6470.013d 2 4.0190.072d 0.5990.017d 2.4940.019d 0.6140.01d 注：与正常组比较，a:P0.05;b:P0.01;与模型组比较，c:P0.05;d:P0.01;与血脂康组比较，*:P0.05;*:P0.01。平(P 0.01)，研究发现，健脾五味丸在中、高剂量下的降脂效果均良好，其中以高剂（1.0gkg-1d-1）的效果最佳，结果见表 4。3 讨论（1）高血脂症是导致动脉粥样硬化、脑卒中以及其他严重的健康问题，其中冠心病的风险最高。蒙医理论指出高脂血症属“精髓不消证范畴”，人体消化吸收新陈代谢依赖于“消化吸收巴达干”、“调火赫依”、“消化希拉”，这三能失常后，精髓与糟粕混合，可出现胸闷气短、身体厚重乏力、心悸等病症，防治时需遵从祛“巴达干”，调理胃火以加快精髓消化吸收和促使清浊分开的原理9，10。根据蒙医古籍的记载，健脾五味丸的主要成分是诃子，它具有调节元气和解毒的功效，五灵脂可以抑制巴达干宝日的生成，胡黄连可以清除热毒，而土木香则可以调节赫依，清除巴达干热。因此，这种方法可以有效地治疗巴达干型消化不良症，并为其降低血脂提供了物质基础11。（2）为了更好地研究高血脂症和药物开发，我们必须建立一个准确的高脂血症模型。当前，常见的建立方法有两种，第一种是基因缺失技术；第二种方式是通过注射或摄入高脂肪食物来饲养动物12,13，例如大鼠和小鼠。前者费用较高，操作复杂，本研究采用了高脂饲料喂养方法，为了获得更准确的结果，我们选择了昆明小鼠，这些小鼠的代谢水平较高，生长发育较快，而且操作也比较容易。（3）本实验在配制给药溶液时，比较了健脾五味丸水溶液、0.5%羧甲基纤维素钠溶液、1%羧甲基纤维素钠溶液，结果显示：水溶液容易导致药液分层，不容易取药和给药；1%羧甲基纤维素钠溶液粘度较高，药液较粘稠，不容易给药；0.5%羧甲基纤维素钠溶液制备的给药溶液粘度合适，药液呈混悬状态，容易取药和给药。（4）在给药剂量选择时，由于采用的是低、中、高三种剂量，所以配制给药溶液时，我们选择配制高、中、低三种浓度的给药溶液，这样可以采用同一给药体积进行给药，以免出现给药体积不一致，导致小鼠饮食出现偏差，影响实验结果。（5）经过药理学研究，我们发现，健脾五味丸具有良好的血脂调节作用，可以明显减少高脂血症血液中的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）的含量，并且还可以提高血液中的高密度脂蛋白（HDL-C）含量。研究表明，健脾五味丸可以有效降低血脂水平，并且能够缓解高脂饮食所带来的肥胖问题。尽管健脾五味丸的降血脂药效物质基础和作用机制尚未完全揭示，但我们仍可以通过深入研究来探索它的潜力，并且为其在临床实践中的应用提供更加科学的依据10。参考文献 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