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细胞工程高考真题强化训练1。（13上海）在工业化大量培养植物试管苗的过程中，一般进行如下操作，则正确的操作顺序是诱导形成芽 取合适外植体 诱导形成愈伤组织诱导形成未分化状态的细胞 诱导形成根A B C D2。（13天津）花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因.用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株.流程如下图。据图回答下列问题：（1)过程所需的酶是 。(2）过程后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的 存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。（3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是 。原生质体经过 再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。(4）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和 植株的根尖，通过 、 、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。(5)采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA 进行PCR 扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1-4 进行PCR 扩增的结果。据图判断，再生植株14 中一定是杂种植株的有 。（6）对杂种植株进行 接种实验,可筛选出具有高抗性的杂种植株。3.(13海南)单纯疱疹病毒型（HSV）可引起水疱性口唇炎.利用杂交瘤技术制备出抗HSV-的单克隆抗体可快速检测HSV-。回答下列问题:（1)在制备抗HSV的单克隆抗体的过程中,先给小鼠注射一种纯化的HSV蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗 的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了 反应，再从小鼠的 中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的 细胞融合,再经过筛选、检测,最终可获得所需的杂交瘤细胞,该细胞具有的特点是 。(2）若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的 中使其增殖，再从 中提取、纯化获得。（3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV蛋白，其原因是该抗体具有 和 等特性.4.（12广东）培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是A。组织培养 B。细胞杂交 C。显微注射 D。核移植5。（12浙江)请根据以下提供的实验材料,完善生物制剂W对动物不同细胞的分裂具有促进作用的实验思路，并预测实验结果。实验材料:培养液、正常体细胞、癌细胞、W、胰蛋白酶。（要求与说明：答题时不考虑加入W后的体积变化等误差。提供的细胞均具有分裂能力，只进行原代培养且培养条件适宜）（1)实验思路：取培养瓶若干个，分组如下： .每组设置若干个重复样品。各组样品在培养箱中培养一段合适的时间后，各取其中的几个样品,加入 ，摇匀,在显微镜下用血细胞计数板分别计数并记录细胞数。重复若干次. 。（2）预测实验结果（用坐标系和细胞数变化曲线示意图表示）：6.（12江苏）下列事实能体现细胞全能性的是A棉花根尖细胞经诱导形成幼苗B单细胞的DNA在体外大量扩增C动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体D小鼠体细胞经诱导培育成小鼠7.（12江苏）（1)2,4D常用于籼稻愈伤组织的诱导, 对形态的发生有一定的抑制作用。为促进愈伤组织再分化，在配制分化培养基时需（填“升高”、“保持”或“降低）2，4D的浓度。（2）当籼稻愈伤组织在只含有细胞分裂素的培养基上培养时，出现具有分生能力的绿色芽点，但继续出芽，通常在培养基中添加,以促进幼苗形成。（3）研究中用显微镜可以观察到的现象是（填下列序号）。绿色芽点细胞排列松散 刚融合的籼稻和稗草杂交细胞发生质壁分离胚状体细胞中有叶绿体 分化的愈伤组织的各细胞的形态大小一致（4）经组织培养筛选获得的籼稻叶绿素突变体，其叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照,叶绿素总量不变。某同学用（填序号:绿色红色蓝紫色黄色)光照射突变体和对照叶片，检测到两者光合放氧差异不大.若取等量色素提取液进行层析，会发现突变体第条色素带(自上而下）窄于对照组.（5）胚乳(3n）由一个精子与两个极核受精发育而成。若用籼稻种子的胚乳诱导愈伤组织，培育三倍体，需适时晚年除胚，以免胚的存在影响愈伤组织细胞的，还可避免再生苗中混有。8。(11江苏）下列有关植物组织培养的叙述，正确的是A愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞B二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株C用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子D植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得9。（11江苏）关于现代生物技术应用的叙述，错误的是A蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质B体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体C植物组织培养技术可用于植物茎尖脱毒 D动物细胞培养技术可用于转基因动物的培育10.（10广东）新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术（或仪器）与应用匹配正确的是 A技术扩增蛋白质 B杂交瘤技术-制备单克隆抗体 C光学显微镜-观察叶绿体的基粒 D花粉离体培养培育单倍体植物11。（10宁夏)请回答:（1）植物微型繁殖技术属于植物组织培养的范畴。该技术可以保持品种的 ，繁殖种苗的速度 。离体的叶肉细胞在适宜的条件下培养，最终能够形成完整的植株，说明该叶肉细胞具有该植物的全部 。（2)把试管苗转接到新的培养基上时，需要在超净工作台上进行，其原因是避免 的污染。（3)微型繁殖过程中，适宜浓度的生长素单独使用可诱导试管苗 ，而与 配比适宜时可促进芽的增殖.若要抑制试管苗的生长,促使愈伤组织产生和生长，需要使用的生长调节剂是 （脱落酸、2，4-D)。（4）将某植物试管苗培养在含不同浓度蔗糖的培养基上一段时间后，单株鲜重和光合作用强度的变化如图。据图分析，随着培养基中蔗糖浓度的增加,光合作用强度的变化趋势是 ,单株鲜重的变化趋势是 。据图判断，培养基中不含蔗糖时,试管苗光合作用产生的有机物的量 （能、不能）满足自身最佳生长的需要。（5)据图推测，若要在诱导试管苗生根的过程中提高其光合作用能力，应 (降低,增加)培养基中蔗糖浓度，以便提高试管苗的自养能力。12.(10浙江）下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是A培养保留有的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞B克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变C二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的D恶性细胞系的细胞可进行传代培养13。（10福建)红细胞生成素（EPO）是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白,可用于治逆子疗肾衰性贪血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，目前临订、床上使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胸生成素(rhEPO)，其简要生产流程如右图。请回答:（1)图中所指的是 技术。（2）图中所指的物质是 ,所指的物质是 。（3）培养重组CHO细胞时，为便于清除代谢产物，防止细胞产物积累对细胞自身造成危害，应定其更换 .（4）检测rhEPO的体个活性需要抗rhEPO的单克隆抗体。分泌该单克隆抗体的 细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓癌细胞融合而成。14。（09理综1卷)下列关于体细胞杂交或植物细胞质遗传的叙述，错误的是A.利用植物体细胞杂交技术可克服生殖隔离的限制，培育远源杂种B.不同种植物原生质体融合的过程属于植物体细胞杂交过程C.两个不同品种的紫茉莉杂交，正交、反交所得F1的表现型一致D。两个不同品种的紫茉莉杂交,F1的遗传物质来自母本的多于来自父本的17。（09浙江）用动、植物体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是A。CO2培养箱 B。都须用液体培养基C。都要在无菌条件下进行D。都可体现细胞的全能性18.（08全国卷）下列关于细胞工程的叙述，错误的是A。电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合B。去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理C.小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体D。某种植物甲乙两品种的体细胞杂种与甲乙两品种杂交后代的染色体数目相同19.(08江苏）下列关于植物组织培养的叙述中，错误的是A培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压B培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化C离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织D同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同20。（08江苏）某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染，为查找污染原因设计了4个实验，实验条件除图示外共他均相同.下列各图表示实验结果,据图可得出的初步结论是A污染主要不是培养基灭菌时间短造成的 B污染主要来源于组织培养所用的离体组织C调节培养基pH不能解决污染问题 D调节培养温度不能解决污染问题21.（08宁夏）回答下列有关动物细胞培养的问题:在动物细胞培养的过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面 时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的 。此时，瓶壁上形成的细胞层数是 ，要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是 .随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现 的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成 细胞，该种细胞的黏着性 ，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白)的量 。现用某种大分子染料，对细胞进行染色时,观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是 。检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目,最好选用细胞分裂到 期的细胞用显微镜进行观察。在细胞培养过程中，通常在 条件下保存细胞，因为在这种条件下,细胞中 的活性降低,细胞的 速率降低。给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后,发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作 进行攻击。22.（08北京）白菜、甘蓝均为二倍体，体细胞染色体数目分别为20、18。以白菜为母本，甘蓝为父本，经人工授粉后，将雌蕊离体培养，可得到“白菜-甘蓝杂种幼苗。请回答问题：(1)白菜和甘蓝是两个不同的物种，存在 隔离。自然条件下，这两个物种间不能通过 的方式产生后代。雌蕊离体培养获得“白菜-甘蓝”杂种幼苗，所依据的理论基础的植物细胞具有 。（2)为观察“白菜-甘蓝”染色体的数目和形态，通常取幼苗的 做临时装片，用 染料染色。观察、计数染色体的最佳时期是 。（3)二倍体“白菜-甘蓝”的染色体数为 。这种植株通常不育,原因是减数分裂过程中 。为使其可育,可通过人工诱导产生四倍体“白菜-甘蓝”这种变异属于 细胞工程高考真题强化训练答案1。 B2。【答案】（1)纤维素酶和果胶酶（2)叶绿体（3)保持原生质体完整性细胞壁（4）双亲（或花椰菜和黑芥） 解离漂洗（5）1、2、4 (6)黑腐病菌【解析】（1）过程表示原生质体的制备,要用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁（2）用于融合的两个细胞，一个是黑芥苗的叶肉细胞，一个是花椰菜的根部细胞，其中供体细胞特有的结构是叶绿体，可通过观察叶绿体的有无作为初步筛选杂种细胞的标志。（3)原生质体没有细胞壁的保护，需要加入适宜浓度的甘露醇以保证渗透压的稳定，以避免原生质体吸水或失水破坏原生质体的完整性;原生质体通过细胞壁杂声形成杂种细胞，进而形成愈伤组织。（4)分析再生植株染色体变异类型，需要将再生植株细胞染色体和黑芥苗与花椰菜细胞中的染色体制片观察进行比较,制片的基本程序是解离、漂洗、染色、制片。（5）根据图谱,花椰菜含有碱基对为300 和600 的DNA 片段，黑芥还有碱基对为1000、1300 和1500 的片段,再生植株3,只含有长度为300 和600 的片段，与花椰菜一致，1、2、4 既含有花椰菜DNA 片段，又含有黑芥DNA 片段，为杂种植株。（6）对杂种植株接种黑腐病菌,能正常生长的即为具有高抗性的杂种植株。【试题评价】本题以抗黑腐病花椰菜的培育为信息载体，综合考查了植物细胞工程、细胞分裂装片的制作观察、PCR 图谱的识别等相关内容,同时也考查了考生识图获取信息的能力，具有一定难度。3.【解析】（1)由题意可知,单纯疱疹病毒型可引起水泡性口炎，病毒蛋白HSV-可以作为一种抗原刺激机体通过免疫反应产生特异性抗体。在单克隆抗体的制备过程中，首先应注射纯化的HSV-蛋白作为抗原，一段时间后对小鼠血清进行检测，如果抗HSV蛋白的抗体检测为阳性,说明小鼠体内通过体液免疫产生了特异性抗体.此时可以从小鼠的免疫器官中，如脾脏、骨髓、淋巴结等部位获取已免疫的B淋巴细胞，与小鼠的骨髓瘤细胞融合，经过筛选检测获得能稳定的产生特异性抗体的杂交瘤细胞。已免疫的B淋巴细胞具有产生特异性抗体的特点,而骨髓瘤细胞能无限增殖，因此获得的杂交瘤细胞具有既能无限增殖又能产生特异性抗体(抗HSV-蛋白的抗体）的特点。（2）获得大量单克隆抗体途径有两种:体外培养和体内培养.体外培养即通过动物细胞培养技术获得大量的杂交瘤细胞，进而产生大量的单克隆抗体；体内培养即将杂交瘤细胞注射到小鼠的腹腔中增殖，最后从小鼠的腹水中提取、纯化单克隆抗体.（3)单克隆抗体是通过细胞融合技术单一的B淋巴细胞核杂交瘤细胞融合而获得的,因此融合后的细胞只能产生一种特异性抗体，所制备的单克隆抗体具有特异性强，灵敏度高的特点。【试题点评】本题以疱疹病毒为素材切入，综合考查了学生对单克隆抗体的制备原理、过程及其特点的理解。旨在考查学生的理解和应用能力。4.【答案】 【解析】草莓植株分生区的细胞含病毒的量比较少，可以利用植物组织培养技术培养出脱毒幼苗。5。【答案】（1）A组:培养液中加入体细胞。B组：培养液中加入体细胞,加入W。C组：培养液中加入癌细胞.D组：培养液中加入癌细胞，加入W。胰蛋白酶统计并分析所得数据。（2)【命题透析】本题以实验设计的形式，综合考查了必修和选修的相关内容.【思路点拨】（1)本实验的目的是：完善生物制剂W对动物不同细胞的分裂具有促进作用的实验思路，有两个自变量：是否加入生物制剂W、动物细胞的种类。（2）设计时应遵循单一变量及对照实验原则,进行重复实验可减少误差并使实验结果更为准确可靠，故分组时应分4组分别进行实验。（3）胰蛋白酶用来分解组织细胞间的蛋白质，使组织细胞相互分散开来，有利于细胞的分裂。（4）绘制曲线时,应注意横纵坐标及各组合的最终高度。6。答案: AD解析：证明细胞全能性的实例必须满足的三个条件：起点：高度分化的细胞；终点：形成完整的个体；外部条件：离体、营养物质等。B为分子克隆，C为细胞克隆.7.（1)降低（2）适量的生长素(3）（4)4（5）增殖与分化二倍体幼苗解析：2，4D常用于植物愈伤组织的诱导和生长,但它趋向于抑制植物形态的发生，当愈伤组织再分化形成新的植株个体时，要减小2，4D抑制植物形太发生的作用。所以在配制分化培养基时需降低2，4-D的浓度.根据题意,此时已经出现具有分生能力的绿色芽点，但不能继续出芽。由于生长素有促进再分化过程中芽的生长，所以在培养基中添加适量的生长素，以促进幼苗形成。绿色芽点细胞为分生区细胞,排列紧密；刚融合的杂种细胞没有细胞壁,不可能发生质壁分离；愈伤组织细胞排列疏松无规则；再分化产生胚状体，需要光照刺激,会促进叶绿体的形成，可在光学显微镜下观察到叶绿体。色素具有不同的吸收光谱，叶绿素a、b主要吸收的是红光和蓝紫光。而对绿光和黄光吸收很少。在本题中，通过光合放氧速率反映出二者光合作用强度的大小，自变量是叶绿素a、b比例上的差异.从结果来看，二者放氧速率差异不大,而突变体中叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照。说明该同学用的光不是红色和蓝紫色。所以是绿色和黄色。通过纸层析法分离色素时，叶绿素a、b分布于第3、4条（自上而下)。因为突变体中叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照，所以会发现突变体第4条色素带窄于对照组。利用胚乳诱导愈伤组织,由于胚中含有植物激素，会影响愈伤组织的增殖和分化，所以需适时剔除胚.因为胚是由受精卵发育而来的，是二倍体。剔除胚也可以避免再生苗中混有二倍体幼苗。8. D 9。 B 10。解析:本题主要考查学生的理解能力.PCR技术只能用来扩增核酸，不能用来扩增蛋白质;利用光学显微镜无法观察到叶绿体的内部结构。答案：BD11。答案:(1）遗传特性 快 遗传信息 (2）微生物 （3）生根 细胞分裂素 2,4-D （4)逐渐减小 先增加后下降 不能 （5）降低12。解析:动物细胞培养可分为原代培养和传代培养，原代培养到一定程度后要进行传代,因为细胞有接触抑制现象，当细胞接触时就会停止分裂（在细胞培养过程中进行的为有丝分裂,所以培养出来的多数细胞基因型相同)，但是细胞在培养过程中，传代次数也是有限的,一般为50次就会死亡，留下来的细胞就是发生了癌变的细胞,遗传物质发生改变，具有不死性，但是仍保留接触抑制现象，所以还是要传代培养，这个也就是人体中癌细胞会转移的原因，所以答案为D。答案：D13.解析:获取目的基因的方法有三种（从基因文库中获取、用PCR 扩增技术、人工合成）。图中以核DNA为模板获得目的基因的方法为PCR技术。进行反转录的模板是mRNA。由题意可知重组CHO细胞适用于生产重组人红细胞生成素(rhEPO)，所以重组CHO细胞能过表达出重组人红细胞生成素(rhEPO)或者红细胞生成素.培养动物细胞是用液体培养基即培养液，细胞从培养液中吸收营养,并同时向培养液中排放代谢废物，当代谢废物积累时会危害细胞，因此要不断更新培养液.制备单克隆抗体是让淋巴B细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，然后由杂交瘤细胞来分泌抗体。答案：(1）PCR （2)mRNA rhEPO （3）培养液 (4）杂交瘤14.C15.答案:（1）逆（反)转录 （2)限制性核酸内切酶（限制性内切酶、限制酶） DNA连接酶（注:两空顺序可颠倒)（3）细胞融合 杂交瘤细胞 4）A蛋白 核酸（基因）序列 抗A蛋白的单克隆抗体16. 答案：(8分)(1）1吸收氧气和营养物质、排出代谢废物 （2）维持培养液适宜的pH (3)种类和剂量 （4)向乙（或丁）组装置中放置肝脏小块 染色体形态和数量 肝脏小块对有机物X具有解毒作用17。C. 18.D解析：考查了细菌培养的相关知识.某些细菌如蓝细菌（蓝藻）、光合细菌以及红螺菌都能进行光合作用。生长因子是指微生物生长不可或缺的微量有机物，主要包括维生素、氨基酸和碱基等。而微生物的营养物质包括水、无机盐、碳源、氮源和生长因子,它们都需要从外界获得补充.培养基中加入伊红和美蓝属于鉴别培养基,能与大肠杆菌代谢产生的有机酸结合,使菌落呈深紫色,并带有金属光泽。19.答案：D解析：此题考查学生对植物组织培养技术的掌握。培养基中加入蔗糖的目的一方面可以提供营养，另一方面可以调节渗透压；在整个组织培养过程中影响再分化的关键是生长素和细胞分裂素的使用比例和使用顺序；组织培养过程中的第一个关键环节是脱分化，从而形成愈伤组织；组织培养的对象既可以是体细胞也可以是生殖细胞，因此获得的愈伤组织的基因组成不一定相同。20.答案：ABCD解析：据题图可知，污染率与培养基灭菌的时间、培养基pH以及培养温度并没有规律性关系;二离体组织灭菌时间越长，污染率越低，因此可得出污染的主要来源是离体组织。21。答案：38.相互接触 接触抑制 单层（或一层） 胰蛋白酶衰老甚至死亡 不死性 降低 减少 由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色）中 冷冻(或超低温、液氮） 酶 新陈代谢 抗原解析:本题考查了现代生物科技专题中的有关动物细胞培养的基础知识.在动物细胞的培养过程中，细胞因相互接触而出现接触抑制并有贴壁现象，可用胰蛋白酶将贴壁细胞分离下来。随着细胞培养传代次数的增多，大多数细胞失去分裂能力而衰老死亡，只有少数细胞仍保留有分裂能力,这少数的细胞具有癌细胞的特征，其细胞膜上的糖蛋白减少，细胞的黏罩性下降。细胞膜具有选择透过性，故染料分子不能使活细胞着色。温度能影响细胞内酶的活性而影响细胞的新陈代谢,故可低温保存培养的细胞。22。答案：（1）生殖 杂交（有性生殖） 全能性（2)根尖（茎尖) 醋酸洋红(龙胆紫、碱性） 有丝分裂中期（3)19 没有同源染色体配对现象 染色体变异解析：本题综合性强。涉及的知识点多而简单,包括生殖隔离、植物组织培养、细胞的全能性、细胞的有丝分裂、减数分裂、染色体变异及多倍体育种等知识。组织答案是要以课本基础知识为依据，紧扣生物学的基本术语或课本中的结论性语句等。相关知识如下：白菜与甘蓝是两个物种，两物种之间一定存在生殖隔离，不能进行杂交，植物离体细胞或组织培养获得新个体,其理论基础是植物细胞的全能性.将受精后的白菜雌蕊培养成的“白菜甘蓝,其染色体数目为即，细胞内不存在同源染色体、减数分裂时染色体不会联会、不能产生正常的生殖细胞,故不可育。若诱导使其染色体数目变异。在植物有丝分裂实验中常采用植物的分生组织，如根的分生区、芽的顶端分生组织等做实验材料，常用龙胆紫或醋酸洋红（碱性燃料）来使染色体着色,有利于观察.在有丝分裂中期，染色体的着丝点在赤道板上排列整齐,染色体形态、数目清晰可见,是观察染色体的最佳时期。8