常用大肠杆菌感受态JM109-DH5a-BL21等的区别上课讲义.docx

精品文档1：DH5a菌株 DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的半乳糖苷酶氨基端实现互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。 基因型：F-，80dlacZM15，(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB），gal， dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株 该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZM15进行互补，从而显示半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株 基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi1，hsdR17，supE44，relA1，（lacproAB）/FtraD36，proAB+，lacIq，lacZM155：TOP10菌株 该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。 基因型：F- ，mcrA(mrr-hsd RMS-mcrBC)， 80 ，lacZM15，lac74， recA1 ，ara139(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG6：HB101菌株 该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验 基因型：supE44，hsdS20（rB-mB），recA13，ara14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1 7：M110或 SCS110 大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。 常用的菌株都会产生dam,dcm，从而受到甲基化的影响. 部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。 大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响，如XbaI, BclI等。而且甲基化只发生在特定序列，以XbaI为例，只有在位点序列旁出现GA或TC，该XbaI位才会被甲基化。 而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法： （1）选用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA识别切割位点与MboI相同；但不受甲基化影响； （2）利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备，如E.coli JM110和链霉菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。8：E.coli JM110 要排除dam,dcm甲基化的影响，需要用特定的dam-,dcm-的菌株，如JM110 如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒，则不会被甲基化. 各种感受态细胞的区别 用途 特征Xl1-Blue菌株基因型：endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 FTn10 proAB+ lacIq (lacZ)M15 hsdR17(rK- mK+)。特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和质粒提取。BL21(DE3)菌株基因型：F ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) (DE3 lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5)。特点：该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达。BL21(DE3)ply菌株基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) (DE3) pLysS(cmR)。特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达DH5菌株基因型：F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG 80dlacZM15 (lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, 特点：一种常用于质粒克隆的菌株。 其80dlacZM15基因的表达产物与pUC载体编码的-半乳糖苷酶氨基端实现互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和 endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。JM109菌株基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ (lac-proAB) e14- F traD36 proAB+ lacIq lacZM15hsdR17(rK-mK+)。特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达, 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。DH10B菌株基因型：F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80dlacZM15 lacX74 endA1 recA1 deoR (ara,leu)7697 araD139 galU galK nupG rpsL -The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B 。host for pUC and other -complementation vectors; pBR322根据调查资料分析：大学生的消费购买能力还是有限的，为此DIY手工艺品的消费不能高，这才有广阔的市场。useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues，useful for plasmid rescue procedures。（2） 缺乏经营经验 手工艺制品是我国一种传统文化的象征，它品种多样，方式新颖，制作简单，深受广大学生朋友的喜欢。当今大学生的消费行为表现在追求新颖，追求时尚。追求个性，表现自我的消费趋向：购买行为有较强的感情色彩，比起男生热衷于的网络游戏，极限运动，手工艺制品更得女生的喜欢。ELECTROMAX DH10B T1 CELLS（四）DIY手工艺品的“个性化”（二）创业优势分析说明：大学生对手工艺制作兴趣的调研DH10B细胞是高转化效率的E. coli，可以完美应用于大多数实验应用。DH10B基因型具有以下特点：? lacZM15 用于重组克隆的蓝/白斑筛选大学生个性化消费增多是一种趋势。当前社会、经济飞速发展，各种新的消费品不断增多，流行文化时尚飞速变化，处于校园与社会两者之间的大学生肯定会受影响。目前在大学校园，电脑、手机、CD、MP3、录音笔被称为大学生的“五件武器”。除了实用，这也是一种 表明自己生活优越的炫耀性的东西。现下很大一部分大学生中的“负债消费”表现的典型的超前享乐和及时行乐其消费项目多半是用于奢侈浪费的非必要生活消耗。如举办生日宴会、打网球、保龄球、上舞厅跳舞、进夜总会唱“卡拉”等。“负债消费”使很多学生耽于物欲，发展严重者轻则引起经济纠纷，动武斗殴，影响同窗友谊，重则引发犯罪事件，于社会治安不利。? 消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系统，允许构建更多具有代表性的基因组文库(1,2)? endA1突变，可以增加质粒产量和数量因此不难看出，自制饰品在校园里也大有市场所在。对于那些走在流行前端的女生来说，捕捉新事物便捕捉到了时尚与个性。? 高效率转化大小为150 kb的质粒，用于产生cDNA或基因组文库营销调研课题DH10B?可以表达tonA的基因型，tonA能够提供对T1和T5噬菌体感染的抗性(DH10B? T1R)。功能性手工艺品。不同的玉石具有不同的功效，比如石榴石可以促进血液循环，改善风湿和关节炎；白水晶则可以增强记忆力；茶晶能够帮助镇定情绪，缓解失眠、头昏等症状。顾客可以根据自己的需要和喜好自行搭配，每一件都独一无二、与众不同。DH10B?的基因型：F mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 (ara, leu)7697 galU galK rpsL (StrR) nupGDH10B? T1R的基因型：F mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 (ara, leu)7697 galU galK rpsL (StrR) nupG tonA精品文档