DB45_T 1768-2018慈姑组培苗生产技术规程.pdf

ICS 65.020.20 B 31 DB45 广西壮族自治区地方标准 DB 45/T 17682018 慈姑组培苗生产技术规程 Technical specification for tissue culture seedling of Sagittaria sagittifolia L.2018-05-10 发布 2018-06-10 实施广西壮族自治区质量技术监督局 发 布 DB45/T 17682018 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 生产设备和灭菌.1 5 生产工艺流程.1 6 生产操作.2 7 组培苗质量要求.3 8 生产记录及档案建立.4 附录 A（资料性附录）培养基及培养条件.5 DB45/T 17682018 II DB45/T 17682018 III 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由广西壮族自治区农业科学院提出。本标准起草单位：广西农业科学院生物技术研究所。本标准主要起草人：高美萍、江文、韦绍龙、颜梅新、张尚文、何芳练、董伟清、蒋慧萍、黄诗宇、张驰、王艳、陈丽娟、蔡炳华、闭志强。DB45/T 17682018 1 慈姑组培苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了慈姑（Sagittaria sagittifolia L.）组培苗生产的术语和定义、生产设备和灭菌、生产工艺流程、生产操作、组培苗变异筛选及控制、组培苗质量要求、生产记录及档案建立等技术要求。本标准适用于广西境内慈姑组培苗的生产。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 DB45/T 1655 芋头组培苗生产技术规程 3 术语和定义 DB45/T 1655界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1 慈姑 sagittaria sagittifolia L.又称茨菰、剪刀草、燕尾草。具异形叶性,以膨大地下球茎作蔬菜食用的泽泻科慈姑属宿根性水生草本作物。4 生产设备和灭菌 按NY/T 2306的规定执行。5 生产工艺流程 生产工艺流程见图1。DB45/T 17682018 2 培养基的配置、保存与分装 外植体选择 采集与处理 接种 初代培养 继代培养 生根培养 炼苗 出圃 图1 组培苗生产工艺流程图 6 生产操作 6.1 培养基 6.1.1 母液的配制与保存 按DB45/T 1655的规定执行。6.1.2 分装 加热溶解后趁热按每瓶（袋）33 mL40 mL的量分装至250 mL的培养瓶（或100 mm120 mm聚丙烯培养袋）中并封好瓶（袋装消毒盒）盖，经121 20 min高压蒸汽消毒,于室温凝固，即用，或存放3 d 5 d。存放后的培养基，使用前，应检查有无污染，不得使用有污染的培养基。6.2 外植体采集与处理 6.2.1 采集 宜选用品种纯正、遗传性状稳定、优质高产的无污染母本园或母株。切取生长健壮、无病虫害的球茎的顶芽或匍匐茎茎尖生长点作为外植体。6.2.2 灭菌 6.2.2.1 预处理 将采集的球茎顶芽或匍匐茎茎尖放入加有0.20.5洗衣粉温水中浸泡30 min，用自来水冲洗23遍，剪取所需幼芽茎段（2 cm3 cm），置于接种室中晾5 min10 min。DB45/T 17682018 3 6.2.2.2 球茎顶芽灭菌 在超净台上，将经预处理的慈姑球茎顶芽截取直径3 mm5 mm，长10 mm20 mm茎尖段放入烧杯中，倒入75的酒精浸没，轻轻摇晃1 min，倒出酒精，用无菌水冲洗外植体23遍。再用0.1的升汞消毒10 min15 min或2次氯酸钠浸泡10 min15 min，然后用无菌水冲洗35遍后，沥干封存于经灭菌的培养瓶内供接种用。6.2.2.3 匍匐茎茎尖灭菌 在超净台上，将经预处理的慈姑匍匐茎截取直径3 mm5 mm，长5 mm10 mm茎段尖放入烧杯中，倒入75的酒精浸没，轻轻摇晃10 s30 s，倒出酒精，用无菌水冲洗外植体35遍。再用0.1的升汞消毒8 min10 min或2次氯酸钠浸泡8 min10 min，然后用无菌水冲洗35遍后，沥干封存于经灭菌的培养瓶内供接种用。6.3 接种和增殖培养 6.3.1 初代培养（萌发培养）在无菌垫纸（或铝片）上切取经消毒处理的3 mm5 mm的外植体，接种在初代培养基上（参照附录A），培养7 d10 d后，选择无污染且已萌芽的外植体再进行继代培养。6.3.2 继代培养 将经初代培养所得外植体分切成带有23个芽点的小块，转接到继代培养基上（参照附录A）。28 d为一个继代周期，继代次数宜控制在10代以内，增值系数宜控制在2.05.0以内。6.4 生根和炼苗 6.4.1 生根培养 将继代苗接种在生根培养基上（参照附录A），培养10 d15 d，苗高5 cm8 cm，茎粗壮，根系发达，即可转移到炼苗大棚培养。6.4.2 炼苗 将组培苗转移到自然散射光下，常温（15 35）的大棚，炼苗20 d30 d后,及时淘汰具有：植株失绿、叶片畸形扭曲、分蘖叶片细弱，呈丛生状、匍匐茎明显过长，植株矮小、生根数少等症状的变异株，即可出圃种植。7 组培苗质量要求 组培苗无污染，植株生长形态正常无变异，质量应符合表1的要求。表1 组培苗质量要求 指标名称 指标值 株高(cm)8.0 茎粗（cm）0.3 单株叶片数 3 生根数(条)5 DB45/T 17682018 4 表 1 组培苗质量要求（续）指标名称 指标值 根长（cm）3.0 植株叶色 浅绿色浓绿 变异率（）3.0 8 生产记录及档案建立 应建立生产记录档案，生产记录宜包括：母液配制及培养基配制记录、培养基高压蒸汽灭菌工作记录、员工接种工作记录、组培材料继代和生根入出库记录、品种材料生产档案和产品销售记录。DB45/T 17682018 5 A A 附 录 A（资料性附录）培养基及培养条件 各类培养基及培养条件见下表A.1。表A.1 培养基及培养条件 培养基名称 成分 培养条件 初代培养基 1/2MS6-BA0.5 mg/L1.0 mg/LNAA 0.01 mg/L0.05 mg/L蔗糖30 g/L 温度（262），光照1 500 Lx2 000 Lx，光照16 h 继代培养基 MS6-BA2.0 mg/L3.5 mg/LNAA0.1 mg/L0.5 mg/L蔗糖30 g/L 温度（262），光照1 500 Lx3 000 Lx，光照12 h 生根培养基 MS6-BA0.5 mg/L1.0 mg/LNAA 0.5 mg/L1.0 mg/L蔗糖30 g/L 温度（282），光照1 500 Lx2 000 Lx，光照8 h B _ 中华人民共和国广西地方标准 慈姑组培苗生产技术规程 DB45/T 17682018 广西壮族自治区质量技术监督局统一印刷 版权专有 侵权必究