液相色谱柱维护保养及仪器冲洗教学提纲.doc

液相色谱柱维护保养及仪器冲洗精品资料液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意：每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书。色谱柱维护保养是很重要的，关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性，所以任何人用过色谱柱之后，一定要对色谱柱进行保养，管理人员和使用者互相监督。总的原则是色谱柱要轻拿轻放，避免损坏填料；另外没有使用的情况下，一定要保证两端的堵头封好。对于具体的色谱柱，下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项，以便使用者参考。C18柱（包括预柱）对于未启用的新的色谱柱，先用甲醇或乙腈以小流速（0.2ml/min缓慢升高到0.5ml/min）不接检测器冲洗色谱柱30分钟后，将色谱柱与检测器连上，流速调为1.0 ml/min冲洗色谱柱60分钟，然后不断降低有机相的比例（如80%、50%、10%甲醇或乙腈）各冲洗至少30分钟。若色谱柱暂时不用，则将色谱柱保存在高比例有机相中（如80%甲醇或乙腈，或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中）；色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂（将缓冲盐溶液换成水）冲洗色谱柱15分钟，然后再换成流动相进行样品分析。样品分析完后，色谱柱维护与保养方法：流动相中若含酸、碱、盐类物质，则要先用10%甲醇或乙腈冲洗，1.0ml/min的流速冲洗至少30min，再用80%甲醇或乙腈冲洗至少30min，柱子保存在80%甲醇或乙腈里（具体问题具体分析，洗脱程序可以是梯度洗脱程序，注意如果最后色谱柱保存的是高有机相，第二天用之前一定要用高水相过渡一下，再换成流动相）。如柱子长时间未用，则柱子保存在100%的甲醇或乙腈里。对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等，柱子应采用梯度洗脱，一般用乙腈-水系统（水：90-10；乙腈：10-90）冲洗时间要稍长些，然后保存于90%乙腈。需要特别强调的是，目前所有的C18柱均不能用纯水进行长时间（1小时以上）冲洗，除非有专门耐水的专用柱，否则，用纯水长时间冲洗色谱柱，会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷，损坏色谱柱。大多数反相色谱柱的pH稳定范围是28，有的pH稳定范围会宽，具体pH稳定范围参照色谱柱说明书，当分析条件的pH值偏小或偏大时，可选择pH稳定范围宽的柱子进行分析，否则，会损坏色谱柱。在每次进行样品分析时，要保证流动相（包括盐、缓冲盐、酸等）与色谱系统及柱内的保存液要互溶，如不能互溶，则需要用一定比例的有机溶剂（不低于10%）或与分析流动相相当的有机溶剂对柱子进行过渡，否则，流动相中的盐会在系统与柱内析出，影响样品分析或损坏柱子。硅胶柱、正相手性色谱柱【包括AS-H、AD-H、OD-H系列，5DMB、5TBB系列，OA系列（如OA-3100、OA-3300）】 对于未启用的新的色谱柱，在保证系统是正相的情况下，可先用异丙醇小流速（流速为0.10.3ml/min）冲洗色谱柱约15分钟，然后换上正相流动相平衡进行色谱分析。硅胶柱及正相手性柱不能过水相（对于sepax系列的硅胶柱，可以过低比例的水相（有机相不低于50%），接上色谱柱之前要保证液相色谱系统中的所有管路为正相流动相【如是不含盐的反相溶液（如水/乙腈；水/甲醇），先用异丙醇冲洗所有管路，然后用正相流动相冲洗所有管路，最后再接上色谱柱；若反相流动相中含有缓冲盐（如缓冲盐/乙腈；缓冲盐/甲醇），先用纯水冲洗HPLC系统，然后用异丙醇冲洗所有管路，最后用正相流动相冲洗，再接上色谱柱。】使用结束后，先用异丙醇冲洗色谱系统与色谱柱，再用色谱级的正己烷冲洗色谱柱，（或者直接用正己烷异丙醇（90：10）冲洗，并保存在正己烷异丙醇（90：10）中）。如长时间未用，则保存在正己烷中。需要特别强调的是，冲洗硅胶柱时，不能用纯水或含水的有机溶剂或缓冲盐体系冲洗色谱柱，只能用纯有机溶剂冲洗色谱柱（对于sepax系列的硅胶柱可以用不低于50%有机相冲洗色谱柱），最后保存在纯的有机溶剂中。在进行样品分析前，一定要保证流动相与色谱系统及色谱柱柱内的保存液要互溶，如不互溶，则需要用异丙醇过度，否则，会影响色谱系统与损坏柱子。反相手性色谱柱（如：CHIRALCEL OZ-3R）：同C18柱阴离子柱和阳离子柱： 目前常见的阴子柱有waters IC-PakTM anion，阳离子柱有磺酸基阳离子柱与waters阳离子交换柱（钙型）。对于waters IC-PakTM anion 和waters阳离子交换柱（钙型），新柱子使用前用高纯水小流速（0.2ml/min缓慢升高到0.5ml/min）冲洗约30分钟，然后再换成流动相平衡色谱柱。在冲洗色谱柱之前，要保证整个色谱系统为纯水相。对于磺酸基阳离子柱（含有硅胶基柱的），使用前用甲醇或乙腈小流速冲洗30分钟，然后高纯水替换系统冲洗，然后接上色谱柱。分析完样品后，对于waters IC-PakTM anion和waters阳离子交换柱（钙型）用高纯水冲洗色谱柱，色谱柱最后保存在纯化水中。对于磺酸基阳离子柱，用50%的乙腈或甲醇冲洗色谱柱30分钟，最后保存在甲醇或乙腈中（参照柱子说明书）。冲洗所用流速根据柱子耐压情况进行调整。需要特别强调的是waters IC-PakTM anion和waters阳离子交换柱（钙型）是不能过有机相（纯有机溶剂或有机溶液），否则会损坏色谱柱。氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱目前所使用的氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱基本都是使用反相系统，其操作方法与维护保养与C18相同。对于新碰到的别的型号的色谱柱，如本规程没有说明时，要参照色谱柱说明书具体问题具体分析。液相仪器的冲洗1、冲洗色谱系统（具体情况具体分析，可针对缓冲盐浓度较高的流动相）一般做完试验冲洗完色谱柱后，换上两通，将各通道放于10%乙腈中冲洗至少30分钟（若原色谱系统中流动相含盐，则用高纯水（有时候用温水效果更好）冲洗至少30分钟后再用10%乙腈冲洗）。若仪器长时间不用，则将仪器保存于80%乙腈中。2、清洗进样针、柱塞杆洗针液应选择能较好溶解样品的溶剂（如该样品在70%甲醇中溶解，则洗针液应选择70%甲醇或更高比例的甲醇洗针液洗针的外壁,流动相一直走内壁）；清洗柱塞杆的溶剂（为了清洗流动相中析出的盐），一般选择低比例的有机相，如10%甲醇或乙腈。3、仪器的钝化色谱泵溶剂过滤头、进出口阀及管路（包括进样器和检测池）若被污染，系统应做清洗和钝化处理。一般采用30%磷酸水溶液作为清洗剂，用6mol/L硝酸作为钝化剂，先清洗再钝化。清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢。钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜。30%磷酸水溶液制备：取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀。6mol/L硝酸的制备：取浓硝酸40ml与60ml水混匀。方法：将色谱柱取下，用两通连接进样器和检测器，将所有吸滤头放入高纯水中，以1.0ml/min流速过渡（至少30分钟），待管路中有机溶剂洗脱干净；再换用30%磷酸清洗系统（约45分钟），再换高纯水冲洗，直至出口水pH值约为67(用pH试纸测试），清洗完成；然后换用6mol/L硝酸冲洗系统（约45分钟），再换高纯水冲洗，直至出口水pH值约为67，钝化完成。用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用。仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除 谢谢6