宁夏地区欧李根癌病病原菌鉴定及防治药剂筛选_赵岩.pdf

第 51 卷 第 3 期东北林业大学学报Vol51 No32023 年 3 月JOUNAL OF NOTHEAST FOESTY UNIVESITYMar 20231)宁夏自治区重点研发计划重点项目(2020BBF02027);宁夏大学大学生创新创业训练计划项目。第一作者简介:赵岩，男，1996 年 6 月生，宁夏大学农学院，硕士研究生。Email:zy13895378725 163com。通信作者:顾欣，宁夏大学农学院，教授。Email:guxin929163com。收稿日期:2022 年 1 月 29 日。责任编辑:李春雪。宁夏地区欧李根癌病病原菌鉴定及防治药剂筛选1)赵岩白田田顾欣王新谱马文礼王昊杨波(宁夏大学，银川，750021)(宁夏农垦农林牧技术推广服务中心)摘要对宁夏地区欧李(Cerasus humilis(Bge)Sok)根癌病病原菌开展鉴定并筛选防治药剂。采用组织分离法进行病原菌的分离，以胡萝卜和向日葵为指示植物按柯赫氏法则确定其致病性，经形态学、生理生化性质和16S rDNA 序列分析进行分类鉴定。采用滤纸片抑菌圈法对 8 种低毒杀菌剂开展毒力测定，筛选出对病原菌有较强抑菌效果的药剂，以向日葵为指示植物进行防治效果验证。结果表明:从欧李根癌组织中分离获得的 ATJ1 菌株，可以使胡萝卜盘和向日葵接种部位出现明显的增生，具有致病性。ATJ1 菌株分类鉴定为根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)生物 I 型。在室内药剂筛选中，四霉素和乙蒜素的防治效果最好，400 倍稀释液的抑菌率分别为 8380%和 7255%，(EC50)分别为 513 和 98575 mg/L。在盆栽试验中，四霉素和乙蒜素对病原菌 ATJ1 均具有较强的抑菌效果，向日葵接种部位未发病，但是高质量浓度药剂会导致药害。因此，低质量浓度(稀释倍数1 200倍)的四霉素或乙蒜素适用于欧李根癌土壤杆菌的防治。关键词欧李;根癌病;病原菌;四霉素;乙蒜素分类号S4822;S4329Identification of Causal Agent of Cerasus humilis Crown Gall Disease in Ningxia egion and Screening of ControlAgents/Zhao Yan，Bai Tiantian，Gu Xin，Wang Xinpu(Ningxia University，Yinchuan 750021，P China);Ma Wen-li，Wang Hao，Yang Bo(Agricultural Technology Extension and Service Center of Ningxia Agricultural eclamation Man-agement Bureau)/Journal of Northeast Forestry University，2023，51(3):130135The experiment was conducted to identify and screen microbicides against crown gall of Cerasus humilis in NingxiaThe pathogen was isolated using tissue isolation method The pathogenicity of carrot and sunflower was determined accord-ing to robertkoch s law using carrot and sunflower as indicator plants The morphological，physiological and biochemicalproperties were analyzed，and 16S rDNA sequence analysis was used for classification and identification The toxicity ofnine low-toxic microbicides was tested by using the inhibition zone method of filter paper，and the microbicides with stronginhibitory effect on the pathogenic bacteria were screened out，and the control effect was verified with sunflower as the indi-cator plant The results showed that ATJ1 strain isolated from the root cancer tissue of C humilis could obviously proliferateon the inoculation site of carrot disk and sunflower，and was pathogenic The ATJ1 strain was classified as Agrobacteriumtumefaciens biotype I In the indoor agent screening，tetramycin and ethephon had the best control effect，with 8380%and7255%inhibition at 400dilution，and EC50of 513 and 98575 mg/L，respectively In pot experiments，both tetramycinand ethylicin had strong antibacterial effects on the pathogen ATJ1 No disease occurred at the inoculation site of sunflow-er，but high concentration of the drug would lead to phytotoxicity Therefore，low concentrations(1200dilution)of tet-ramycin or ethylicin are suitable for the control of Agrobacterium tumefaciens in C humilisKeywordsCerasus humilis;Crown gall;Pathogenic bacteria;Tetramycin;Ethylicin欧李(Cerasus humilis(Bge)Sok)，蔷薇科(osaceae)樱桃属(Ceraras)多年生落叶灌木，因果实富含活性钙，又称钙果1，为我国特有的果树资源。欧李的根蘖更新能力强，根系发达，具有抗寒耐旱、耐瘠薄、耐盐碱等特性，果实色泽鲜艳，风味独特，营养丰富，具有较高的开发利用和研究 价值24。2011 年，宁夏香山地区压砂地试种欧李成功，全区多地进行引种栽培，种植面积扩大至约1 400 hm2。2015 年，宁夏多地发现欧李根癌病。随着种植年限增加和栽培面积扩大，该病害在宁夏呈蔓延趋势，对当地欧李产业发展造成严重威胁。果树根癌病是由根癌土壤杆菌引起的土传植物病害5。该菌寄主范围广，已知可侵染 93 科 331 属643 种植物6，涉及核果、浆果、坚果类果树和其他观赏类植物7。病原菌的侵染可诱导植株大量合成生长素和细胞分裂素，导致细胞异常增殖，在根颈、侧根部位形成大小不一的冠瘿89。植株患病早期，树体的地上部无明显症状。随着冠瘿数量和体积的增加，植株细根数量减少，生长迟缓，树势逐渐衰弱，直至全株枯死，造成林果业严重损失1011。根据生理生化特征和致病性差异，根癌土壤杆菌被分为型、型、型 3 种生物型1213。桃、苹果和樱桃的根癌病菌为生物型或型，葡萄根癌病菌为生物型1417。欧李根癌病病原菌及其生物型有待确定。果树根癌病是典型的土传病害，主要防治技术包括选育抗病品种、物理切除、化学防治和生物防治18。其中，选育抗病品种难度高、耗时长;根癌组DOI:10.13759/ki.dlxb.2023.03.007织增生发生在植株根部，对其进行物理切除既对植株造成伤害，又无法根治，易导致反复发病;化学防治主要采用蘸根、灌根或涂抹法，常用药剂有石硫合剂、硫酸铜、波尔多液和三氯异氰尿酸等1920，宁夏欧李栽培区土壤均为碱性21，大量使用石硫合剂和波尔多液等碱性药剂不利于植物生长，硫酸铜和波尔多液等含铜化合物使用过量易造成环境污染22，三氯异氰尿酸对根癌土壤杆菌具有较强的抑制效果20，但是其与铵盐、氨、尿素混合可生成易爆的三氯化氮，遇有机物易燃，不适用于大田管理;根癌病的生物防治主要利用农用抗生素、生物源杀菌剂或生防菌，如春雷霉素、农用链霉素、大蒜、生姜、青蒿等的提取物和 K84 放 线 菌 菌 剂等2325，由于生姜和青蒿等的提取物研究多处于试验阶段，K84 菌剂只能对植株提供短期保护26，因此，防治根癌病仍以化学杀菌剂、农用抗生素和生物源杀菌剂为主。为了兼顾防病效果和环境保护，寻找针对欧李根癌病的高效、低毒、无污染的杀菌剂具有重要意义。为明确宁夏欧李根癌病的病原菌并筛选出高效的防治药剂，本研究开展欧李根癌病病情调查和病原菌的分离鉴定，以胡萝卜和向日葵为指示植物进行致病性检测，并选取 4 种低毒化学杀菌剂和 4 种生物源杀菌剂，经室内毒力测定和植物药效试验，筛选能有效防治欧李根癌病的低毒杀菌剂，为该病害的绿色防控提供参考。1材料与方法欧李:2 年生，农大四号。致病性检测材料:胡萝卜(春红二号)和向日葵(金谷葵 3 号)。MW 培养基:甘露醇 100 g，生物素 1000 g，KH2PO403 g，质量分数 01%的 FeEDTA 20 mL，NaNO350 g，质量分数 01%的结晶紫 20 mL，NaCl02 g，琼脂粉 150 g，MgSO47H2O 01 g，水 1 000mL，121 灭菌 20 min，用于病原菌的分离。营养琼脂培养基(NA):用于病原菌的活化、保存和杀菌剂的室内毒力测定。NA 液体培养基:NA 培养基不加琼脂，用于菌株液体培养。8 种杀菌剂的信息如表 1。欧李根癌病病株采集:2020 年 6 月，在宁夏简泉(385037N，1062853E)欧李栽培区调查发病植株，采集全株，观察并记录植株病状和冠瘿增生情况，完成病变组织的采集。病原菌分离:将冠瘿纵向剖开，刮取内部组织。采用马德钦等27 的病原菌组织分离法，将病变组织稀释液接种到 MW 培养基上，28 恒温培养 48 h，挑取不同形态的菌株进行划线纯化，直至获得纯菌株，编号保存。表 1试验用杀菌剂信息杀菌剂有效成分质量分数/%剂型生产厂家化学类氯溴异氰尿酸500WP山东滨海瀚生生物科技有限公司喹啉铜335SC顺毅股份有限公司噻唑锌200SC浙江新农化工股份有限公司甲基硫菌灵700WP江西中迅农化有限公司生物源类 四霉素03AS辽宁微科生物工程股份有限公司春雷霉素60WP陕西韦尔奇作物保护公司硫酸链霉素720WP河北三农农用化工有限公司乙蒜素800EC德州祥龙生化有限公司注:AS 为水剂，WP 为可湿性粉剂，SC 为悬浮剂，EC 为乳油剂。致病性鉴定:菌株用 NA 固体培养基置于 28 条件下活化 48 h，挑取 1 环接种于 NA 液体培养基，摇床设置 28、150 r/min 培养48 h，制备为1 mL 含1108CFU 活菌的菌悬液。选择新鲜、无损伤的胡萝卜，清水洗净，用 75%乙醇擦洗后过火干燥，切成圆片放在铺有水琼脂的培养皿内，靠近根端的一面朝上。采用涂抹法接种，用无菌棉棒蘸取菌悬液均匀涂抹在胡萝卜盘上。每个菌株接种 5 个盘，以无菌水为对照，置于温度28、相对湿度 85%、12 h 光照/12 h 黑暗条件下，培养 14 d，观察并统计发病情况。选取株高 10 cm 的健康向日葵，以距地面 3 cm的茎杆处为接种部位。先用 75%乙醇消毒表面，以无菌接种针围绕茎杆轻刺 46 针，深度约 1 mm，然后用无菌棉棒蘸取菌悬液涂抹针刺部位接种，每个菌株接种 5 株植株，以无菌水为对照。用保鲜膜包裹涂抹处以保湿。置于温度为(285)、自然光照条件下的温室培养 30 d，观察接种部位增生情况。测量接种部位和接种部位上下各 1 cm 处的茎粗，按以下公式计算接种部位增生厚度。接种部位增生厚度=接种部位茎粗(上茎粗+下茎粗)/2。分类鉴定:挑取纯化后的菌株接种到 MW 平板上划线并置于 28 培养 48 h，观察单菌落形态。在油镜下观察菌体形态，生理生化鉴定参照任欣正等28 的方法，根癌土壤杆菌生物型的检测方法参考伯杰细菌鉴定手册29。提取病原菌 DNA，对其 16S rDNA 进行克隆、电泳和回收，委托南京奥维森基因科技有限公司完成测序。将测序结果提交至 GenBank 获得序列号，并使用 BLAST 在美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库中进行比对，依据菌株序列比对信息，对菌株进行分子鉴定。在数据库中选取相近种属基因序131第 3 期赵岩，等:宁夏地区欧李根癌病病原菌鉴定及防治药剂筛选列，使用 MegaX 系统分析软件构建系统进化树，确定菌株的分类地位。室内毒力测定:采用滤纸片抑菌圈法测定 8 种杀菌剂对病原菌的室内毒力。用无菌水制备杀菌剂的 400、600、800、1 000、1 200、1 600、2 400 倍的稀释液。将直径 60 mm 的无菌干燥滤纸片在杀菌剂稀释液中蘸取 2 s。在 NA 平板上加 02 mL 菌悬液，涂抹均匀，每皿中间放 1 个浸药滤纸片，每处理 5 个重复，以无菌水为对照，先将平皿倒置，于 4 培养12 h，使杀菌剂扩散和渗透均匀，再转置，于 28 培养 24 h，观察是否出现抑菌圈。以十字交叉法测量抑菌圈直径，计算不同杀菌剂的抑菌率，公式为:抑菌率=(处理组抑菌圈直径对照组抑菌圈直径)/处理组抑菌圈直径100%。将不同稀释倍数处理的抑菌率转换成几率值(通过查“死亡百分率与几率值单位的转换表”，抑菌率相当于死亡率)，将其作为因变量(Y)，每个稀释度值的对数值作为自变量(X)，利用最小二乘法建立回归方程 Y=A+BX(A为截矩，B 为回归系数)30，获得供试杀菌剂的半最大效应浓度(EC50)值和相关系数(2)。防治效果盆栽试验:选取抑菌率最高和较高的杀菌剂。按致病性鉴定方法在向日葵茎杆上接种病原菌，2 h 后用灭菌脱脂棉蘸取杀菌剂稀释液涂抹接种部位。以不接种病原菌，只涂抹无菌水为 NCK;接种病原菌，再涂抹无菌水为 CK。其他处理和培养条件同“致病性鉴定”，每处理 5 个重复，培养 30 d，观察接种部位组织增生情况。利用 SPSS 220 对数据进行统计分析。2结果与分析21欧李根癌病的田间发病症状病株的冠瘿主要发生在根基部、主根和侧根上，植株长势未见明显异常(图 1A)。冠瘿数量多为15个，偶见 6 个。冠瘿表面坚硬、龟裂，呈黑褐色，外层组织坏死，有轻微腐朽。内部呈土黄色和黄色，组织较软(图1B)。新生组织呈黄色，表面可见龟裂的新鲜韧皮组织(图 1C)。A 为发病植株，黄色箭头指示根部的冠瘿;B 为冠瘿剖面;C 为冠瘿。图 1发病植株与冠瘿22病原菌分离与致病性测定从冠瘿中分离获得 20 株细菌，分别进行致病性鉴定。涂抹无菌水的胡萝卜盘和向日葵茎杆无明显增生(图 2A 和图 2C)。不同菌株的致病性具有差异，其中 ATJ1 菌株的致病性最强。接种 14 d，胡萝卜盘上出现乳白色肿瘤状增生凸起(图 2B)。接种30 d，向日葵茎杆上形成肿瘤状增生凸起(图2D)。向日葵茎杆上的瘤体，初生时呈绿色，表面少量龟裂;成熟瘤体的皮层老化严重，呈黑褐色，表面龟裂更深。A 为接种无菌水的胡萝卜盘;B 为接种 ATJ1 的胡萝卜盘;C 为接种无菌水的向日葵;D 为接种 ATJ1 的向日葵;黄色箭头指示接种部位。图 2病原菌的致病性鉴定结果23菌株的分类鉴定ATJ1 菌株在 MW 培养基上置于 28 条件下培养 48 h。菌落如图 3A，呈灰白色，圆形突起，半透明，边缘整齐，有光泽。菌体呈短杆状，如图 3B，大小为(08 m15 m)(08 m30 m)，无荚膜和芽孢。231东北林业大学学报第 51 卷A 为 ATJ1 在 MW 培养基上的菌落;B 为油镜下观察到的 ATJ1 菌体(1000 倍)。图 3ATJ1 菌株的菌落和菌体形态将 ATJ1 菌株的基因测序结果登入 NCBI，Gen-bank 编号为 MW541859，经基因序列 BLAST 比对，构建系统发育树。如图 4 所示，ATJ1 与 Agrobacteri-um tumefaciens IAM 12048(N_0413961)菌株位于进化树同一分枝上，相似度 100%，确定 ATJ1 菌株为根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)。图 4菌株 ATJ1 的系统发育树ATJ1 菌株的生理生化性质和生物型检测结果如表 2。依据 伯杰细菌鉴定手册 检测根癌土壤杆菌生物型的方法29，确定 ATJ1 菌株为根癌土壤杆菌生物 I 型菌株。表 2ATJ1 生理生化性质检测结果测试项目结果测试项目结果2%NaCl+Meso赤藓糖醇产酸Schroth 培养基+松三糖产酸+Kerr 培养基乙醇产酸+产生 3酮基乳糖+丙二酸钠产碱石蕊牛乳反应产碱L酒石酸钠产碱柠檬酸铁铵产褐色表膜+丙酸钠产碱注:“+”为阳性，“”为阴性。24室内毒力测定滤纸片抑菌试验结果如表 3 和表 4，8 种杀菌剂对病原菌的抑菌效果具有差异。四霉素 4002 400倍稀释液对病原菌都具有抑菌作用，抑菌圈直径为5173645 mm，抑菌率为 8380%3921%，效果最好。乙蒜素 400 2 400 倍稀释液的抑菌圈直径为2643421 mm，抑菌率为 7255%2963%。甲基硫菌灵 400 倍和 600 倍稀释液的抑菌圈直径分别为1511 和 516 mm，抑菌率为 6018%和 3404%，其他稀释倍数无抑菌效果。春雷霉素、喹啉铜、硫酸链霉素、噻唑锌等处理均无抑菌效果。因此，四霉素和乙蒜素对病原菌 ATJ1 具有较好的抑菌作用。表 3不同杀菌剂对 ATJ1 菌株的抑菌圈直径杀菌剂不同稀释倍数下的抑菌圈直径/mm400 倍600 倍800 倍1 000 倍1 200 倍1 600 倍2 400 倍四霉素517315834190232886105244004019520951025098645045乙蒜素26430892116032183804314920181176025825125421078甲基硫菌灵1511020516029注:表中数据为“平均值标准差”。表 4不同杀菌剂对 ATJ1 菌株的抑菌率杀菌剂不同稀释倍数下的抑菌率/%400 倍 600 倍800 倍1 000 倍 1 200 倍 1 600 倍 2 400 倍四霉素8380773774277093661250883921乙蒜素7255679164765987540445202963甲基硫菌灵60183404根据毒力回归方程求得几率值为 5(即抑菌率为 50%)时的质量浓度即为(EC50)。由表 5 可知，四霉素对病原菌 ATJ1 的(EC50)为 513 mg/L，乙蒜素的(EC50)为 98575 mg/L。表 5不同杀菌剂对 ATJ1 菌株的 EC50值杀菌剂毒力回归方程2(EC50)/mgL1四霉素y=1790 8x+6271 60939 6513乙蒜素y=1467 2x+9395 20946 69857525防治效果盆栽试验在向日葵茎杆上进行四霉素和乙蒜素的防效测定。结果如表 6，所有涂抹四霉素和乙蒜素的部位均未出现组织增生现象。但是 2 种药剂 4001 000倍稀释液对向日葵组织产生药害，茎秆接种部位收缩、变黑直至干枯。稀释倍数 1 2002 400 处理未出现药害，其接种部位和 NCK 基本一致。说明低质量浓度的四霉素和乙蒜素适用于作物上根癌病原菌的防控。3结论与讨论本研究结果表明，宁夏栽培区欧李根癌病致病菌为根癌土壤杆菌生物 I 型，与樱桃31、梨32 等果树根癌病病原菌同种，为该病害的致病机制研究和科学防治提供了参考。果树根癌病是土传病害，病原菌可长期在土壤中生存，加之栽培环境复杂，导致防治难度较大。针对果树根癌病已开展部分杀菌剂的筛选。如农用硫酸链霉素和乙蒜素对葡萄根癌病菌具有显著的室内331第 3 期赵岩，等:宁夏地区欧李根癌病病原菌鉴定及防治药剂筛选抑菌效果19。四霉素、乙蒜素和农用链霉素对樱桃根癌病菌的(EC50)分别为 303、53827、1 43582mg/L23。本研究与前人研究结果具有差异，室内毒力测定结果显示，只有四霉素、乙蒜素和高质量浓度甲基硫菌灵对欧李根癌病菌具有一定抑菌效果。其中四霉素和乙蒜素的(EC50)分别为 513 和 98575mg/L，显著高于樱桃根癌病的抑菌试验结果，可能由病原菌不同菌株的生物学特性差异引起。表 6四霉素和乙蒜素的防治效果处理稀释倍数发病药害接种部位增生厚度/mmNCKN(006001)bCKY(196008)a四霉素400NY600NY800NY1 000NY1 200NN(001002)b1 600NN(001002)b2 400NN(005003)b乙蒜素400NY600NY800NY1 000NY1 200NN(0003)b1 600NN(007004)b2 400NN(001005)b注:“发病”列 N 表示未发病，Y 表示已发病;“药害”列 N 表示未产生药害，Y 表示产生药害;“接种部位增生厚度”列数据为“平均值标准差”，同列不同小写字母表示差异显著(P005)。四霉素又称梧宁霉素，属于大环内酯四烯抗生素，是不吸水链霉菌梧州亚种(Streptomyces ahygro-scopicn wuzhouensisn subsp)的发酵代谢物。作为广谱生物杀菌剂，四霉素对 3 大类病原真菌(子囊菌、担子菌和半知菌)和 2 大类病原细菌(革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌)均有极强的抑制作用33，已用于小麦赤霉病、白粉病、杨树溃疡病、细菌性角斑病和稻瘟病等的防治3435。但是，四霉素对根癌土壤杆菌的抑菌机制有待进一步研究。乙蒜素是大蒜素衍生物，属于生物源农药，其抑菌机制主要是作用于病原菌体内含硫基的化合物，导致菌体代谢异常，从而起到抑菌作用36。乙蒜素还能增强植物光合作用，调节植物生长，促进伤口愈合再生，有利于弱苗根系复壮、老化根系复苏，提高作物抗病能力37。甲基硫菌灵是一种广谱性、内吸性、低毒杀真菌剂，其高质量浓度时也具有杀细菌效果，但是机制未明38。本研究中，只有高质量浓度甲基硫菌灵对欧李根癌病菌具有一定抑菌作用，其不宜用于根癌病的田间防治。本研究明确了宁夏栽培区欧李根癌病致病菌为根癌土壤杆菌生物 I 型，经室内毒力测定和盆栽防效试验证明，四霉素和乙蒜素对该病原菌的防治效果较好。建议在欧李移栽前用低质量浓度(稀释倍数1 200 倍)乙蒜素或四霉素蘸根处理种苗，防治根癌病的发生。参考文献 1徐豆，付鸿博，杜灵敏，等欧李正反交 F1果实性状的遗传变异分析 J 山西农业科学，2020，48(5):696699，714 2李卫东，卢宝明，姜英淑，等新型保健食品资源欧李的开发前景及展望 C/第二届全国中药商品学术大会论文集出版者不详，2010:334339 3温琢，高润宏欧李的研究进展J林业科技通讯，2016(12):5153doi:1013456/jcnkilykt201612017 4张士凯，郗良卿，张启月，等欧李开发及利用的研究进展J食品工业科技，2020，41(4):361367 5SHIH P Y，CHOU S J，MULLE C，et al Differential roles ofglucosinolates and camalexin at different stages of Agrobacterium-mediated transformationJ Molecular Plant Pathology，2018，19(8):19561970 6王慧敏植物根癌病的发生特点与防治对策J 世界农业，2000，22(7):2830 7PULAWSKA J Crown gall of stone fruits and nuts，economic sig-nificance and diversity of its causal agents:tumorigenic Agrobacte-rium spp J Journal of Plant Pathology，2010，92:8798 8MOIS O Genes specifying auxin and cytokinin biosynthesisin phytopathogens J Annual eview of Plant Physiology，1986，37(1):509538 9CEASAP J E，EID C L，GOFFINET M C，et al Effect ofwound position，Auxin，and Agrobacterium vitis strain F2/5 onwound healing and crown gall in grapevineJ Phytopathology，2005，95(4):362367 10WANG Y J，HE Y Y，XIE Z，et al First report of crown gall，caused by Agrobacterium tumefaciens on soapberry(Sapindusdelavayi)in ChinaJ Plant Disease，2013，97(5)doi:101094/PDIS10120988PDN 11CHEN L，WANG X H，MA Q H，et al Bacillus velezensisCLA178-induced systemic resistance of osa multiflora againstcrown gall diseaseJ Frontiers in Microbiology，2020，11doi:103389/fmicb2020587667 12SAWADA H，LEKI H，OYAIZU H，et al Proposal for rejectionof Agrobacterium tumefaciens and revised descriptions for the ge-nus Agrobacteriumand for Agrobacterium radiobacter and Agrobac-terium rhizogenes J International Journal of Systematic and Ev-olutionary Microbiology，1993，43(4):694 702 13BOUZA H，OYAIZU H，SAWADA H equest for a judicial o-pinion concerning the type Species of Agrobacterium J Interna-tional Journal of Systematic Bacteriology，1994，44(2):373374 14武荣花，王献，杨喜春，等桃根癌病病原菌的分离和桃砧木抗性试验研究 J 河南科学，2007，25(3):416419 15王红艳樱桃和樱花根癌病病原及生物防治研究D 北京:中国农业大学，1998 16孙艳丽，王慧敏，王建辉，等苹果根癌病菌系及生物防治的初步研究 J 植物病理学报，2000(4):332336 17尹向田，魏彦锋，徐亮，等葡萄根癌病病原菌的筛选及鉴定J农学学报，2019，9(2):2430 18杨雯，张志想，李世访我国河南和甘肃地区梨树根癌病病原菌鉴定 J 植物保护，2020，46(6):5559 19冯瑛樱桃冠瘿病病原分离鉴定及药剂防治D 杨凌:西北农林科技大学，2013 20张洁，师校欣，焦延静，等葡萄根癌病病原菌类型鉴定及几种杀菌剂和抗菌素对其抑菌效果 J 河北农业大学学报，2013，36(3):7781 21张璐瑶，沈晖，田军仓基于模糊综合评价法的压砂地欧李品种筛选 J 北方园艺，2019(3):189196 22AGIOS G N Introduction to plant pathologyM Amsterdam:Elsevier Academic Press Publication，2010 23黄菁华西安灞桥区樱桃根癌病病原囷鉴定及药剂防治研究D 杨凌:西北农林科技大学，2016 24NJAGI A，NYAMWANGE M M，NJEU E M，et al Antibacte-431东北林业大学学报第 51 卷rial effect of Artemisia and ginger extracts in controlling Agrobac-terium tumefaciens in rosesJ Journal of Floriculture and Land-scaping，2021，7:15 25KEA Biological control of crown gall through production ofAgrocin 84 J Plant Disease，1980，64(1):2530 26MOHAMMAD M，TAHI H，ABUBAKA A W，et al Effect ofdifferent concentrations of garlic extract on crown gall and seed-ling growth of some varieties of tomato(Lycopersicon esculentumMill)grown in Dutse town，Jigawa StateJ ATBU Journal ofScience，Technology and Education，2021，9(3):327334 27马德钦，林应锐，周娟，等我国葡萄根癌土壤杆菌的生化型与质粒类型的初步研究J 微生物学报，1985，25(1):4553，92 28任欣正植物病原细菌的分类和鉴定M 北京:中国农业出版社，1994 29布坎南伯杰细菌鉴定手册 M北京:科学出版社，1984 30陈旭玉，钟锦玲，贺春萍，等温郁金根腐病病原菌生物学特性及杀菌剂筛选 J 西北农业学报，2017，26(1):137143 31王莉莉，徐建强，朱凯，等醚菌酯对假禾谷镰孢的抑制作用及对小麦茎基腐病的防效研究J 植物病理学报，2022，52(3):434442 32杨雯，张志想，李世访我国河南和甘肃地区梨树根癌病病原菌鉴定 J 植物保护，2020，46(6):5559 33赵建江，李红霞，王文桥，等番茄叶霉病菌对嘧菌酯的抗性检测及抗性风险评估J 农药学学报，2008，10(1):4752 34赵新海，钟丽娟，张庆华，等四霉素对稻瘟病菌丝和孢子生长的影响 J 微生物学杂志，2010，30(2):4345 35SONG Y Y，HE L M，CHEN L L，et al Baseline sensitivity andcontrol efficacy of antibiosis fungicide tetramycin against Botrytis-cinerea J European Journal of Plant Pathology，2016，146(2):337347 36伏荣桃，克永霞，陈诚，等乙蒜素对几种植物病原真菌的毒力测定及田间药效试验 J农药，2018，57(8):611613 37ZHANG S M，ZHANG M Q，KHALID A，et al Ethylicin pre-vents potato late blight by disrupting protein biosynthesis of Phy-tophthora infestansJ Pathogens，2020，9(4)doi:10 3390/pathogens9040299 38崔凯甲基硫菌灵及其代谢物多菌灵防控黄瓜枯萎病发生的根际微生物效应 D 北京:中国农业科学院，2021(上接 102 页)18FAND M，FANK，YUC P，et al Tea polyphenols dominate theshort-term tea(Camellia sinensis)leaf litter decompositionJ Journal of Zhejiang University-SCIENCE B，2017，18(2):99108 19牛怡，张仁陟，蔡立群，等促腐条件下小麦玉米秸秆还田土壤养分变化特征研究 J，干旱地区农业研究，2015，33(2):152158 20CAO Y F，ZHANG H，LIU K，et al Organic acids variation inplant residues and soils among agricultural treatmentsJ Agron-omy Journal，2015，107(6):21712180 21孔伟，耿明建，储刘专，等光叶紫花苕子在烟田中的腐解及养分释放动态研究J，中国土壤与肥料，2011(1):6468 22宁东峰，马卫萍，孙文彦，等华北地区棉田翻压冬绿肥腐解及养分释放规律研究J，华北农学报，2011，26(6):164167 23赵娜，赵护兵，鱼昌为，等旱地豆科绿肥腐解及养分释放动态研究J，植物营养与肥料学报，2011，17(5):11791187 24吕丽霞，王维，王秀荣，等渭北苹果园绿肥不同深度翻压腐解及养分释放规律J，果树学报，2018，35(5):586595 25刘佳，陈信友，张杰，等绿肥作物二月兰腐解及养分释放特征研究J中国草地学报，2013，35(6):5863 26高浩洁，赵凤香不同含量污泥堆肥对油松幼苗生长的影响J内蒙古林业调查设计，2016，39(3):5253，47 27高超前，彭祚登，于凌霄，等基于粗糙集理论的城市生态林地土壤肥力评价研究J中南林业科技大学学报，2018，38(12):7682 28李萍萍，薛彬，孙德智施用城市污泥堆肥对土壤理化性质及白三叶生长的影响 J 北京林业大学学报，2013，35(1):127131 29GUO D，XIA M，XING W，et al Anatomical traits associatedwith absorption and mycorrhizal colonization are linked to rootbranch order in twenty-three Chinese temperate tree speciesJ New Phytologist，2008，180(3):673683 30史文辉种子养分和土壤肥力对栓皮栎苗木质量和造林效果的影响 D 北京:北京林业大学，2018 31王佳茜，李国雷，孙龙，等木本植物氮素内循环研究综述J世界林业研究，2014，27(4):2429 32MILLADP，POEM F Leaf demography and the seasonal inter-nal cycling of nitrogen in sycamore(Acer pseudoplatanus L)seedings in relation to nitrogen supplyJ New Phytologist，1991，117(4):587596 33MILLA