枇杷抑制α-葡萄糖苷酶和α...活性部位的筛选及其酶动力学_魏爱红.pdf

研究报告2023 年第49 卷第5 期(总第473 期)53DOI:10 13995/j cnki 11 1802/ts 031927引用格式:魏爱红，李晓虹，曾煌，等 枇杷抑制-葡萄糖苷酶和-淀粉酶活性部位的筛选及其酶动力学J 食品与发酵工业，2023，49(5):53 59 WEI Aihong，LI Xiaohong，ZENG Huang，et al Screening of effective fraction from Eriobotrya japonica(Thunb)Lindl with inhibiting activity against-glucosidase and-amylase and its inhibition kinetics J Food and Fermen-tation Industries，2023，49(5):53 59枇杷抑制-葡萄糖苷酶和-淀粉酶活性部位的筛选及其酶动力学魏爱红1，李晓虹2，曾煌1，2，梁淑荷2，林展雯3，庄远杯1，2，张声源1，2*1(广东省山区特色农业资源保护与精准利用重点实验室(嘉应学院)，广东 梅州，514015)2(嘉应学院 医学院客家药用生物资源研究所，广东 梅州，514031)3(嘉应学院 医学院分子生物学中心实验室，广东 梅州，514031)摘要比较研究枇杷不同药用部位(根、茎、叶、花、果肉、种子)醇提取物对-葡萄糖苷酶和-淀粉酶抑制活性，并探究最强活性部位及其总黄酮的酶促反应动力学特征。采用 95%乙醇超声提取制备枇杷不同药用部位醇提取物，超声辅助浸提并经 AB-8 大孔树脂制备总黄酮，利用紫外光谱法测定-葡萄糖苷酶和-淀粉酶抑制活性，通过酶促动力学方法与 Lineweaver-Burk 曲线推断酶抑制类型。结果表明，枇杷不同药用部位醇提取物均具有一定的-葡萄糖苷酶和-淀粉酶抑制活性，-葡萄糖苷酶抑制活性强弱依次为花 茎 根 叶 果肉 种子，-淀粉酶抑制活性强弱依次为根 茎 花 叶 果肉 种子。枇杷花醇提取物、枇杷花总黄酮对-葡萄糖苷酶抑制活性半抑制浓度(half inhibitory concentration，IC50)值分别为(4 65 0 35)、(0 017 4 0 003 5)g/L，均为可逆非竞争性抑制类型;对-淀粉酶抑制活性 IC50值分别为(14 41 0 59)、(1 57 0 03)g/L，均为可逆非竞争性抑制类型。枇杷根对-淀粉酶抑制活性最强，IC50值为(1 51 0 24)g/L，为可逆竞争性抑制类型。该研究结果为枇杷作为降血糖食品药品的开发利用提供了科学依据。关键词枇杷;-葡萄糖苷酶;-淀粉酶;酶促动力学;Lineweaver-Burk 曲线第一作者:学士，助理实验师(张声源副教授为通信作者，E-mail:mcdullzhang yeah net)基金项目:国家自然科学基金青年基金项目(81703662);嘉应学院科研项目(2021KJY06);梅州市医药卫生科研课题(2021-B-63);梅州市应用型科技专项资金项目(2020B0205004，2021B0201001);广东省大学生创新创业项目(202110582008，202010582269)收稿日期:2022-04-11，改回日期:2022-05-06据国际糖尿病联盟(International Diabetes Feder-ation，IDF)第 10 版数据显示，2021 年全球 20 79 岁的成年糖尿病患者达 5 37 亿，预计到 2030 年将增至6 43 亿，到 2045 年将增至 7 83 亿，中国糖尿病患者居世界首位1。持续性高血糖常导致糖尿病心脑血管病变、糖尿病神经病变、糖尿病肾病等并发症，严重危害人体健康2。-葡萄糖苷酶、-淀粉酶是降低餐后血糖的重要靶点，作用于该靶点的阿卡波糖等临床运用制剂在中国糖尿病药物市场占据主导地位，仅次于胰岛素类3。但阿卡波糖对-淀粉酶的过度抑制是其副作用产生的因素之一4。中草药具有多成分、多靶点协调作用的特点，在治疗消渴疾病的运用历史悠久，是现代降血糖先导化合物挖掘的重要来源，从中药材中挖掘更为安全、低毒、有效的天然-葡萄糖苷酶和-淀粉酶抑制剂在降血糖食品药品的开发具有重要的意义。枇杷Eriobotrya japonica(Thunb)Lindl为蔷薇科枇杷属常绿小乔木，食用药用历史悠久，枇杷叶已收录于 中国药典，枇杷花在 2019 年被批准为新食品原料，而果肉则作为水果食用，表明枇杷资源具有良好的药用食用基础，作为大健康食品药品的开发，具有更高的安全性5。枇杷果肉、茎、花、叶、根、种子均可供药用，具有降逆和胃、化痰止咳、止泻功效，主治肺热咳喘、呕吐、烦渴等症状6，现已有枇杷叶膏、枇杷止咳颗粒等多种制剂应用于临床7。现代药理研究显示，枇杷主要含三萜、黄酮、酚类等化学成分，具有镇咳祛痰、降血糖、抗氧化、降血脂、抗菌消炎等药理作用8 12。枇杷降血糖药理活性显著，作为降血糖药用资源的开发具有广泛前景。关于枇杷降血糖的研究主要集中于枇杷叶和枇杷花，枇杷不同药物部位(根、茎、种子、叶、果肉、花)对-葡萄糖苷酶和-淀粉酶抑制活性差异的研究未见报道。本文以枇杷果肉、茎、花、叶、根、种子的 95%乙醇提取物为研究对象，测定枇杷不同药用部位对-葡食品与发酵工业FOOD AND FEMENTATION INDUSTIES542023 Vol.49 No.5(Total 473)萄糖苷酶、-淀粉酶抑制能力，明确活性部位，并进一步探究活性部位醇提取物及其主要组分总黄酮的酶促反应特征，为枇杷资源在降血糖功能食品药品的开发和高效利用提供科学依据。1材料与方法1 1材料与试剂枇杷于 2020 年 7 月采自广东省梅州市梅江区，经嘉应学院医学院客家药用生物资源研究所张声源副教授鉴定为蔷薇科(osaceae)枇杷属(Eriobotrya)枇杷Eriobotrya japonica(Thunb)Lindl 。对硝基苯酚(p-nitrophenol，pNP)、对-硝基苯基-D-吡喃葡萄糖苷(p-nitrophenyl-D-galactopyranoside，pNPG)，上海源叶生物科技有限公司;-葡萄糖苷酶、-淀粉酶、牛血清白蛋白，Sigma 有限公司;阿卡波糖，德国拜耳有限公司;可溶性淀粉，天津市大茂化学试剂厂;NaOH，上海麦克林生化科技有限公司;KH2PO4、K2HPO4，阿拉丁有限公司。1 2仪器和设备SPAK 酶标仪，TECAN 公司;FA2004 电子分析天平，德国赛多利斯有限公司;N-1100V 旋转蒸发仪，上海爱朗仪器有限公司;MING-CHE 24UV 超纯水机，法国 Merck Millipore 公司;PB-21 型 pH 计，北京赛多利斯科学仪器有限公司;DHP-9052 电热恒温培养箱，上海一恒科学仪器有限公司。1 3样品的制备枇杷果肉、茎、花、叶、根、种子，晒干，粉碎，按料液比 1 3(g mL)加入 95%乙醇超声波提取 3 次(30 min、35、100 Hz、200 W)，静置 24 h，用 8 层纱布过滤，合并提取液，浓缩得到枇杷根醇提物(提取率 10 09%)、枇杷茎醇提物(提取率 4 64%)、枇杷叶醇提物(提取率 7.34%)、枇杷花醇提物(提取率6.21%)、枇杷果肉醇提物(提取率 43.90%)、枇杷种子醇提物(提取率 7.93%)，保存备用13。枇杷花总黄酮的提取及纯化:称取枇杷花粉末200 g，依照 1 20(g mL)的料液比，加入体积分数为60%的乙醇，超声波辅助浸提 3 次(250 W、60、40 min)，抽滤，合并滤液，4、4 000 r/min 离心5 min，取上清液，浓缩干燥得枇杷花黄酮粗提物32.04 g，提取率 16 02%，总黄酮含量以芦丁当量，即1 g 干样品中黄酮类化合物相当于芦丁的质量(mg)，以 rutin mg/g 表示，含量为(4446 134)rutin mg/g。准确配制 6 g/L 的枇杷花黄酮粗提物溶液，加至AB-8 大孔树脂层析柱，4 h 的静置吸附时间，先用蒸馏水洗去杂质，洗脱到滴出液无色，再用体积分数为50%的乙醇溶液洗脱，洗脱速率为 2 BV/h，洗脱体积为 3 BV，收集洗脱片段，减压浓缩干燥得精制枇杷花总黄酮，含量为(73 95 1 96)rutin mg/g14 15。1 4-葡萄糖苷酶的抑制活性采用微孔板法测定16，在 96 孔微孔板上加入110 L PBS(pH 6 8，67 mmol/L)，10 L 样品溶液，20 L 0 1 U/mL-葡萄糖苷酶，振荡混匀，37 恒温孵育15 min，加入20 L 40 mmol/L pNPG，混匀，37 恒温反应 15 min，于405 nm 测吸光度，平行3 次。以阿卡波糖为阳性对照，按照公式(1)计算抑制率。抑制率/%=(Ac Ab)(As Ad)Ac Ab100(1)式中:Ac，PBS 代替样品的反应体系吸光度;Ab，PBS代替样品和酶的反应体系吸光度;AS，样品组的反应体系吸光度;Ad，PBS 代替酶的反应体系吸光度。1 5-淀粉酶的抑制活性采用微孔板法测定17，依次加入样品 溶 液120 L，120 L 10 U/mL-淀粉酶溶液，振荡混匀，加入 120 L 已于 37 预温 5 min 的 10 g/L 可溶性淀粉溶液，混匀，37 反应 15 min，立即加入 200 LDNS 显色，沸水浴 5 min，冰水冷浴 5 min，加入1 040 L PBS 至1 600 L，于540 nm 测定吸光度，平行 3 次。以阿卡波糖为阳性对照，按照公式(1)计算抑制率。1 6对-葡萄糖苷酶抑制动力学试验参考文献 18 19，在 pNPG 浓度为 4 0 mmol/L，在 3 组质量浓度下(枇杷花醇提取物为 0、5、10 g/L;枇杷花总黄酮为 0、0 026 1、0 052 2 g/mL)，分别测定不同-葡萄糖苷酶活力时的酶促反应初速度，以酶活力(U/mL)为横坐标，反应初速度 V0mol/(Lmin)为纵坐标作图，判断可逆或不可逆抑制类型。固定-葡萄糖苷酶活力为 0 1 U/mL，在 3 组质量浓度下(枇杷花醇提取物为 0、5、10 g/L;枇杷花总黄酮为 0、0 026 1、0 052 2 g/mL)，测定不同 pNPG浓度反应体系的反应速率，横坐标为 pNPG 浓度的倒数(1/S)，纵坐标为反应初速度的倒数(1/V0)绘制Lineweaver-Burk 曲线，判断其是竞争性抑制、非竞争性抑制抑或反竞争性抑制类型。1 7对-淀粉酶抑制动力学试验参考文献 20 的方法，在 10 g/L 可溶性淀粉溶研究报告2023 年第49 卷第5 期(总第473 期)55液，在 3 组质量浓度下(枇杷根为 0、1 5、3 g/L;枇杷花总黄酮为 0、0 78、1 57 g/L)，分别测定不同-淀粉酶活力反应体系下的反应初速率，以酶活力为横坐标、反应初速率 mol/(Lmin)为纵坐标作图，判断其可逆或不可逆抑制类型。固定-淀粉酶活力10 U/mL，在3 组质量浓度下(枇杷根为 0、1 5、3 g/L;枇杷花总黄酮为 0、0.78、1.57 g/L)，测定其在不同淀粉质量浓度(0.312、0.625、1.25、2.5、5、10 g/L)反应体系下的反应初速率，以底物质量浓度的倒数(1/S)为横坐标、反应初速率的倒数(1/V0)为纵坐标绘制 Lineweaver-Burk曲线，判断其是竞争性抑制、非竞争性抑制抑或反竞争性抑制类型。1 8统计学处理方法实验重复 3 次，通过 Origin 8 5 软件进行数据处理并作图，结果以平均值 标准差表示。2结果与分析2 1-葡萄糖苷酶抑制活性由图 1 可知，枇杷不同药用部位醇提取物均具有-葡萄糖苷酶抑制活性，在一定质量浓度范围内，抑制率随质量浓度的增大而增强，呈现一定的量效关系。图 1样品对-葡萄糖苷酶的抑制效果Fig 1The-glucosidase inhibition of sample枇杷不同药用部位和阿卡波糖对-葡萄糖苷酶的抑制活性强弱依次为:阿卡波糖 枇杷花 枇杷茎 枇杷根 枇杷叶 枇杷果肉 枇杷种子，半抑制浓度(half inhibitory concentration，IC50)值分别为:阿卡波糖(2.46 0.16)g/L，枇杷花(4.65 0.35)g/L，枇杷茎(6.40 0.74)g/L，枇杷根(7.27 0.64)g/L，枇杷叶(15.07 1.04)g/L，枇杷果肉(120.06 2.33)g/L，枇杷种子(179.20 2.95)g/L。枇杷花对-葡萄糖苷酶的抑制效果与阿卡波糖较为接近，且强于其他药用部位。我国枇杷花资源丰富，食用药用历史悠久，据统计，我国枇杷栽种面积达11 万 hm2，为全球之最，但在疏花过程导致 70%的枇杷花资源的浪费21。枇杷花可作为-葡萄糖苷酶抑制剂资源应用于降血糖功能食品的开发。2 2-淀粉酶抑制活性由图 2 可知，枇杷不同药用部位均具有-淀粉酶抑制活性，在一定质量浓度范围内，抑制率随质量浓度的增大而增强，呈现一定的量效关系。枇杷不同药用部位和阿卡波糖对-淀粉酶的抑制活性强弱依次为:阿卡波糖 枇杷根 枇杷茎 枇杷花 枇杷叶 枇杷果肉 枇杷种子，IC50值分别为:阿卡波糖(0.11 0.06)g/L，枇杷根(1.51 0.24)g/L，枇杷茎(12.26 0.56)g/L，枇杷花(14.41 0.59)g/L，枇杷叶(30.30 1.12)g/L，枇杷果肉(48.81 1.53)g/L，枇杷种子(237.16 2.67)g/L。枇杷根对-淀粉酶的抑制效果强于其他药用部位。枇杷不同药用部位对-葡萄糖苷酶、-淀粉酶抑制活性强弱的次序不同，可能与其不同药用部位的萜类、黄酮类成分含量差异有关，郑美瑜等22研究发现枇杷花黄酮含量显著高于叶和种子，曹红云23研究发现枇杷根总萜物质含量高于枇杷叶。故实验进一步探究枇杷花醇提取物对-葡萄糖苷酶以及枇杷根醇提取物对-淀粉酶抑制的酶促动力学特征。此外，对-淀粉酶的过度抑制是导致胃肠胀不良反应主要因素之一，为此我们选取了-葡萄糖苷酶抑制作用最强而对-淀粉酶抑制作用较弱的枇杷花为原料，进一步探究枇杷花纯化后的总黄酮对-葡萄糖苷酶、-淀粉酶抑制作用及其酶动力学特征。图 2样品对-淀粉酶的抑制效果Fig 2The-amylase inhibition of sample2 3枇杷花醇提取物对酶抑制类型的确定2 3 1枇杷花醇提取物对-葡萄糖苷酶抑制类型由图 3-a 可知，当枇杷花醇提取物质量浓度为0 g/L，即未加抑制剂组，得到的反应速率直线经过原点;当枇杷花醇提取物质量浓度为 5、10 g/L 时，所得食品与发酵工业FOOD AND FEMENTATION INDUSTIES562023 Vol.49 No.5(Total 473)的直线均近似通过原点，且为 10 g/L 的直线的斜率低于 5 g/L 的直线的斜率，由此可得枇杷花醇提取物对-葡萄糖苷酶为可逆性抑制。由图3-b 可知，当枇杷花醇提取物质量浓度为0、5、10 g/L，反应速率相对无抑制剂组明显下降，随着枇杷花醇提取物质量浓度的增大，反应速率越慢，且 3 条直线近似交于 x 轴的负半轴于同一点，即 Km值不变，为 2 60 mmol/L，但Vmax值变小，由此可得枇杷花醇提取物对-葡萄糖苷酶为非竞争性抑制类型。该抑制类型与谢子玉24 对枇杷花中槲皮素-3-O-L-吡喃阿拉伯糖苷抑制-葡萄糖苷酶类型不同，由此推测枇杷花 95%乙醇提取物中具有其他潜在成分对-葡萄糖苷酶抑制活性及其结合方式起着重要作用，应进一步探究其潜在的活性成分及其成分间协同降血糖作用效果。a 可逆、不可逆抑制类型的确定;b 竞争性、非竞争性、反竞争性和混合型抑制类型的确定图 3枇杷花醇提取物对-葡萄糖苷酶抑制类型的确定Fig 3Determination of-glucosidase inhibitory type ofE japonica flower ethanol extract2 3 2枇杷根醇提取物对-淀粉酶抑制类型由图 4-a 可知，当枇杷根质量浓度为 0 g/L，即未加抑制剂组，得到一条经过原点的反应速率直线;当枇杷花质量浓度为 1 5、3 g/L 时，所得的直线均近似通过原点，且 3 g/L 的直线的斜率低于 1 5 g/L 的直线的斜率，由此可得枇杷根对-淀粉酶为可逆性抑制。由图4-b 可知，当枇杷根质量浓度为 0、1 5、3 g/L的 3 条线性拟合直线经过 y 轴的正半轴于同一点，即Vmax值不变，为 5 90 mol/(Lmin)，且随着枇杷根质量浓度的增大，反应速率加快，由此可得枇杷根对-淀粉酶属于竞争性抑制类型，表明枇杷根 95%乙醇提取物与淀粉竞争-淀粉酶结合位点，从而达到延缓淀粉水解。该抑制类型与阳性对照阿卡波糖对-淀粉酶的抑制类型不同25，是一种潜在的新型-淀粉酶抑制剂筛选资源。a 可逆、不可逆抑制类型的确定;b 竞争性、非竞争性、反竞争性和混合型抑制类型的确定图 4枇杷根醇提取物对-淀粉抑制类型的确定Fig 4Determination of-amylase inhibitorytype of E japonica root ethanol extract2 4枇杷花总黄酮对酶抑制活性及抑制类型的确定2 4 1枇杷花总黄酮对-葡萄糖苷酶、-淀粉酶抑制活性由表 1 可知，枇杷花总黄酮对-葡萄糖苷酶、-淀粉酶均具有良好的抑制活性，对-葡萄糖苷酶抑制活性的 IC50值为(0 017 4 0 003 5)g/mL，低于枇杷花醇提取物的(4 65 0 35)g/L;对-淀粉酶的抑制活性的 IC50值为(1 57 0 03)g/L，低于枇杷花醇提取物的(14 41 0 59)g/L，即枇杷花总黄酮对-葡萄糖苷酶、-淀粉酶的抑制活性显著强于枇杷花醇提取物，表明经过超声波提取和大孔树脂纯化能有效富集枇杷花中抑制-葡萄糖苷酶、-淀粉酶的活性组分。2 4 2枇杷花总黄酮对-葡萄糖苷酶抑制类型由图 5-a 可知，当枇杷花总黄酮质量浓度为 0、0.026 1、0.052 2 g/L 时，3 组反应速率直线近似经过原点，由此可得枇杷花总黄酮对-葡萄糖苷酶为可逆性抑制。由图 5-b 可知，枇杷花总黄酮质量浓度为0、0 026 1、0 052 2 g/L 的 3 组速率直线相交于横轴负半轴的同一点，且 Km值不变，为 1 825 mmol/L，研究报告2023 年第49 卷第5 期(总第473 期)57Vmax值随着质量浓度的增大而减小，可判断为非竞争性抑制类型。结合 2 3 1 结果可知，枇杷花总黄酮与枇杷花醇提取物对-葡萄糖苷酶抑制类型一致，均为可逆非竞争性抑制类型。表 1枇杷花总黄酮对-葡萄糖苷酶、-淀粉酶抑制活性Table 1The-glucosidase and-amylase inhibition of total flavonoids from E japonica flower-葡萄糖苷酶抑制活性-淀粉酶抑制活性质量浓度/(gL1)抑制率/%IC50/(gL1)质量浓度/(gL1)抑制率/%IC50/(gL1)0 086 396 05 3650 043 178 12 11950 021 656 24 10880 010 834 76 5520 005 415 11 5330 002 73 01 1330 017 4 0003 5506837 308255421 5141254384 3720623337 4110312481 2310151839 165157 003a 可逆、不可逆抑制类型的确定;b 竞争性、非竞争性、反竞争性和混合型抑制类型的确定图 5枇杷花总黄酮对-葡萄糖苷酶抑制类型的确定Fig 5Determination of-glucosidase inhibitory type of totalflavonoids from E japonica flower2 4 3枇杷花总黄酮对-淀粉酶抑制类型由图 6-a 可知，当枇杷花总黄酮质量浓度为 0、0.78、1.57 g/L 时，3 组反应速率直线近似经过原点，由此可得枇杷花总黄酮对-淀粉酶为可逆性抑制。由图 6-b 可知，枇杷花总黄酮质量浓度为 0、0.78、1.57 g/L 的 3 组速率直线相交于横轴负半轴的同一点，且 Km值不变，为 1.536 9 g/L，Vmax值随着质量浓度的增大而减小，可判断为非竞争性抑制类型。3结论本文系统比较研究了枇杷根、茎、叶、花、果肉、种子 6 个药用部位 95%乙醇提取物对-葡萄糖苷酶和-淀粉酶的抑制活性并对其最强活性部位的酶促反应动力学进行了分析。结果显示，在枇杷不同药用部a 可逆、不可逆抑制类型的确定;b 竞争性、非竞争性、反竞争性和混合型抑制类型的确定图 6枇杷花总黄酮对-淀粉酶抑制类型的确定Fig 6Determination of-amylase inhibitorytype of total flavonoids from E japonica flower位中，枇杷根醇提取物具有最强的-淀粉酶抑制活性，IC50值为(1 51 0 24)g/L，对-淀粉酶为可逆竞争性抑制类型，Vmax=5 90 mol/(Lmin);枇杷花醇提取物具有最强的-葡萄糖苷酶抑制活性，IC50值为(4 65 0 35)g/L，对-葡萄糖苷酶为可逆非竞争性抑制类型，Km=2 60 mmol/L。枇杷花总黄酮对-葡萄糖 苷 酶 和-淀 粉 酶 的 抑 制 活 性 IC50分 别 为(0 017 4 0 003 5)、(1 57 0 03)g/L，强于枇杷花醇提取物，且对-葡萄糖苷酶和-淀粉酶的抑制类型与枇杷花醇提取物一致，均为可逆非竞争性抑制类型。明确了枇杷不同药用部位对-葡萄糖苷酶和-淀粉酶抑制活性差异，及其最强活性部位醇提取物和枇杷花总黄酮对-葡萄糖苷酶和-淀粉酶的结合食品与发酵工业FOOD AND FEMENTATION INDUSTIES582023 Vol.49 No.5(Total 473)方式。研究结果为枇杷作为-葡萄糖苷酶和-淀粉酶抑制剂资源及其降血糖功能食品的开发利用提供了科学依据。参考文献 1International Diabetes Federation IDF diabetes atlas，10thedEB/OL 2021 http:/www diabetesatlas org 2闫科润，沈玥，李宁，等 异荭草素调控糖尿病的作用机制研究进展J 食品与发酵工业，2022，48(22):338 344YAN K，SHEN Y，LI N，et al esearch progress on the mecha-nism of isoorientin in regulating diabetes mellitusJ Food and Fer-mentation Industries，2022，48(22):338 344 3李子艳，王春丽，高柳滨 全球糖尿病治疗药物研发及市场态势J 药学进展，2018，42(9):710 717LI Z 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and steam-processed Polygonatum cyrtonema HuaJ Foodand Fermentation Industries，2022，48(8):70 75 17周雯，韩丽娟，马娜娜，等黄刺浆果不同组分多糖理化性质及生物活性的比较 J 食品与发酵工业，2022，48(2):189 197ZHOU W，HAN L J，MA N N，et al Comparative study on thephysicochemical properties and biological activities of polysaccha-rides from different components in the berry of Berberi dasystachya J Food and Fermentation Industries，2022，48(2):189 197 18孟爱莲，陈媛媛，马嫄，等苦笋壳提取物不同极性相抗氧化与降血糖活性研究 J 食品与发酵工业，2022，48(3):92 98MENG A L，CHEN Y Y，MA Y，et al Antioxidant and hypoglycemicactivities of different polar phases of bitter bamboo shoot husk extract J Food and Fermentation Industries，2022，48(3):92 98 19庄远杯，凌梅娣，魏爱红，等 石韦不同极性萃取物体外降血糖活性研究 J 广西植物，2022，42(5):855 859ZHUANG Y B，LING M D，WEI A H，et al Hypoglycemic activi-ties of different solvent extracts from Pyrrosia lingua in vitroJGuihaia，2022，42(5):855 859 20TAHA M，ALASHEDY A S，ALMANDIL N B，et al Synthesisof indole derivatives as diabetics II inhibitors and enzymatic kinet-ics study of-glucosidase and-amylase along with their in-silicostudyJ International Journal of Biological Macromolecules，2021，190:301 318 21王翰华，阮洪生，陈云 枇杷花化学成分及其药理作用研究进展J 中成药，2019，41(12):2 977 2 981WANG H H，UAN H S，CHEN Y esearch progress on chemicalconstituents and pharmacological effects of loquat flowers J ChineseTraditional Patent Medicine，2019，41(12):2 977 2 981 22郑美瑜，陆胜民，陈剑兵，等 枇杷花总黄酮的提取工艺优化 J 食品与发酵科技，2009，45(4):52 54研究报告2023 年第49 卷第5 期(总第473 期)59ZHENG M Y，LU S M，CHEN J B，et al Study on extractiontechnology of flavonoids in loquat flowersJ Food and Fermenta-tion Technology，2009，45(4):52 54 23曹红云 枇杷根、叶主要药效成分含量及活性比较研究D 福州:福建农林大学，2012CAO H Y Comparison on the main medicinal components and ac-tivities of loquat root and loquat leafD Fuzhou:Fujian Agricul-ture and Forestry University，2012 24谢子玉 枇杷花多酚保健成分的分离、作用机理探究及多酚纳米颗粒的制备 D 金华:浙江师范大学，2021XIE Z Y Separation and action mechanism of polyphenols from lo-quat flowers and its nanopaticles preparationD Jinhua:ZhejiangNormal University，2021 25袁向华，周艳玲，勾洵，等 阿卡波糖对胰-淀粉酶的抑制动力学研究 J 世界科技研究与发展，2016，38(1):117 121YUAN X H，ZHOU Y L，GOU X，et al esearches on inhibitionkinetics of pancreatic-amylase by acarboseJ World Sci-Tech D，2016，38(1):117 121Screening of effective fraction from Eriobotrya japonica(Thunb)Lindlwith inhibiting activity against-glucosidase and-amylaseand its inhibition kineticsWEI Aihong1，LI Xiaohong2，ZENG Huang1，2，LIAN