GB 14755-2010 食品安全国家标准 食品添加剂 维生素D2（麦角钙化醇）.pdf

中中华华人人民民共共和和?家家标标准准GB 147552010中中 华华 人人 民民 共共 和和?卫卫 生生 部部 发布2010-12-21 发布 2011-02-21 实施食品安全?家标准 食品添加剂 维生素 D2?麦角钙化醇?氯氯氯GB 14755-2010 I 前 言 本标准代?GB 147551993?食品添加剂 维生素 D2?本标准?GB 147551993 相比，?要变化如?增加了红外?谱鉴别?维生素 D2的测定系统适用性试验所用样品?维生素 D2改?维生素 D3，高效液相色谱含量测定方法?内标法改?外标法?洋地黄皂苷试验检查麦角甾醇修改?薄层色谱法?增加了还原性物质指标和试验方法?增加了重金属指标和试验方法?增加了砷指标和试验方法?本标准的?录 A 和?录 B?规范性?录，?录 C?资料性?录?本标准所代?标准的历次?本发布情况?GB 14755-1993 氯氯氯GB 14755-2010 1 食品安全?家标准 食品添加剂 维生素 D2?麦角钙化醇?1 范围 本标准适用于以麦角甾醇?原料制得的食品添加剂维生素 D2?氯2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必?可少的?凡是注日期的引用文件，仅所注日期的?本适用于本标准?凡是?注日期的引用文件，?新?本?包括所?的修改单?适用于本标准?氯3 化学名称?分子式?结构式和相对分子质量 3.1 化学名称 9,10-开环麦角甾-5,7,10?19?,22-四烯-3-醇 3.2 分子式 C28H44O 3.3 结构式 CH2HOCHCHH3CCH3CHCHCH3CH(CH3)2氯氯3.4 相对分子质量 396.66?按 2007?相对原子质量?4 技术要求 4.1 感官要求：应符合表 1 的规定?表 1 感官要求 项氯氯氯氯氯目氯要氯氯氯氯求氯检验方法氯色泽氯无色或白色氯取适量样品置于清洁?燥的试管中，在自然?线?，?察色泽和组织状态，嗅?气味?氯气味氯无臭氯组织状态氯针状结晶或结晶性粉?氯4.2 理化指标：应符合表 2 的规定?GB 14755-2010 2 表 2 理化指标 项目 指标 检验方法 维生素 D2?C28H44O?,/%98.0103.0?录A中A.4 麦角甾醇，w/%0.2?录A中A.5 比旋?度m(20,D)/?()dm2 kg-1?+102.0+107.0?录A中A.6 质量吸收系数?265nm?/?L/cmg?4649?录A中A.7 还原性物质?四唑蓝显色试验?，w/%0.002?录A中A.8 砷?As?/(mg/kg)2?录A中A.9 重金属?以Pb计?/(mg/kg)20?录A中A.10 氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯GB 14755-2010 3 附 录 A?规范性附录?检验方法 A.1 安全提示 本标准试验方法中使用的部分试剂?毒性或腐蚀性，按相关规定操作，使用时需小心谨慎?若溅到皮肤?应立?用水冲洗，?重者应立?治疗?在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行?氯氯A.2 一般规定 本标准所用试剂除非另?说明，在分析中仅使用确认?分析纯的试剂和 GB/T 6682氨2008 中规定的?水?试验方法中所用杂质测定用标准溶液?制剂及制品，在没?注明?他要求时，均按 GB/T 602?GB/T 603 之规定制备?A.3 鉴别试验 A.3.1 醋酐浓硫酸呈色试验 A.3.1.1 试剂和材料 A.3.1.1.1?烷?氯A.3.1.1.2 乙酸酐?氯A.3.1.1.3 硫酸?氯A.3.1.2 分析步骤 取?0.5 mg实验室样品，加5 mL?烷溶解?，加0.3 mL醋酐?0.1 mL硫酸，振摇，初显黄色，渐变红色，迅?变?紫色，?变?绿色?A.3.2 红外光谱试验 采用溴化钾压?法，按照 GB/T 6040 进行试验，实验室样品的红外?谱应?对照的?谱一?对照?谱?录 B?A.4 维生素D2的测定 A.4.1 方法提要 用高效液相色谱法，在选定的工作条件?，通过色谱柱使样品分离，用紫外吸收检测器检测，用外标法定量，计算样品中维生素 D2的含量?A.4.2 试剂和材料 A.4.2.1?戊醇?色谱纯?A.4.2.2?己烷?色谱纯?A.4.2.3 异辛烷?色谱纯?A.4.2.4 维生素D2对照品?GB 14755-2010 4 A.4.2.5 维生素D3对照品?A.4.3 仪器和设备 高效液相色谱仪?HPLC?A.4.4 色谱分析条件 推荐的色谱柱及?型色谱操作条件?表 A.1，维生素 D3系统适用性试验高效液相色谱?参?C.1，各组分的相对保留时间参?表 C.1?他能达到?等分离程度的色谱柱和色谱条件均可使用?表 A.1 色谱柱和?型色谱操作条件 色谱柱 柱长 250mm，柱内径 4.6mm，硅胶色谱柱 流?相?己烷-?戊醇?1000+3?流速 2 mL/min 检测器检测波长 254 nm A.4.5 分析步骤 A.4.5.1 维生素D3对照品系统适应性试验贮备液的制备?取?25 mg 维生素 D3对照品，精确?0.000 1 g，置 100 mL 棕色容量?中，加 80 mL 异辛烷，用超声处理?溶 1min，避免加热，使完全溶解，再加异辛烷?刻度，摇匀充?密塞，避?，0以?保存?A.4.5.2 实验室样品溶液的制备?取?25 mg 实验室样品，精确?0.000 1 g，置 100 mL 棕色容量?中，加 80 mL 异辛烷，用超声处理?溶 1min，避免加热，使完全溶解，再加异辛烷?刻度，摇匀?量取 5 mL0.05 mL?述溶液，置 10 mL 棕色容量?中，加?己烷?刻度，摇匀?A.4.5.3 维生素D2对照品溶液的制备?取?25 mg 维生素 D2对照品，精确?0.000 1 g，置 100 mL 棕色容量?中，加 80 mL 异辛烷，用超声处理?溶 1min，避免加热，使完全溶解，再加异辛烷?刻度，量取?述溶液 5 mL0.05 mL，置 10 mL 棕色容量?中，加?己烷?刻度，摇匀?A.4.5.4 系统适用性试验 以硅胶?填充剂的色谱柱，?己烷-?戊醇?1000+3?流?相，检测波长254 nm，流速?2 mL/min?量取维生素D3对照品贮备溶液5 mL，置?塞玻璃容器中，充?密塞，置90水浴加热1h，取出迅速冷?，加?己烷5 mL0.05 mL，摇匀，置1 cm?塞石英吸收池中，在2支?波长分别?254 nm和365 nm的紫外?，将石英吸收池斜放成45，并距?管5 cm6 cm，照射5min，使溶液中含?前维生素D3?反式维生素D3?维生素D3和速甾醇D3?取?溶液注入液相色谱仪，测定维生素D3的峰值，?进样5次，相对标准偏差应?大于2.0%，前维生素D3?维生素D3的比保留时间?0.5?反式维生素D3?维生素D3的比保留时间?0.6?以及维生素D3?速甾醇D3?维生素D3的比保留时间?1.1?的峰分离度均应大于1.0?A.4.5.5 测定 取20L实验室样品溶液注入液相色谱仪,记录色谱?，另取维生素D2对照品溶液，?法测定?按外标法以峰面?计算出供试品中维生素D2的含量?A.4.6 结果计算 GB 14755-2010 5 根据色谱?计算维生素D2的质量分数w1，数值以%表示，按公式(A.1)计算 12112100%mAwAm=?A.1?式中?1m氨氨对照品溶液中维生素D2的进样量的数值，单?微克?g?2A氨氨实验室样品溶液中维生素D2的峰面?的数值?1A氨氨对照品溶液中维生素D2的峰面?的数值?2m氨氨实验室样品溶液中维生素D2的进样量的数值，单?微克?g?取?次?行测定结果的算术?均值?测定结果，?次?行测定的允许绝对差?大于 1.5%?A.5 麦角甾醇的测定 A.5.1 方法提要 将维生素 D2溶液点样于薄层板?，经展开，显色?，所得的色谱?对照品溶液按?法所得的色谱?作对比，对维生素 D2进行杂质检查?A.5.2 试剂和材料 A.5.2.1 角鲨烷?仿溶液?10 g/L?A.5.2.2 展开剂:环己烷-乙醚?1+1?A.5.2.3 维生素D2对照品?A.5.2.4 麦角甾醇对照品?A.5.3 分析步骤 A.5.3.1 对照品溶液的配制?取?50 mg 维生素 D2对照品，精确?0.000 2 g，用 1 mL 角鲨烷?仿溶液溶解，得对照品溶液?A.5.3.2 实验室样品溶液的配制?取?50 mg维生素D2实验室样品，精确?0.000 2 g，用1 mL角鲨烷?仿溶液溶解，得实验室样品溶液?A.5.3.3 麦角甾醇对照溶液的配制?取?5 mg麦角甾醇对照品，精确?0.1 mg，置于50 mL容量?中，加角鲨烷?仿溶液40 mL溶解并稀释?刻度，摇匀?A.5.3.4 显色剂的配制 取1.0 g?化锑，加20 mL乙酰?溶解?A.5.3.5 测定 分别取10 L对照品溶液?实验室样品溶液及麦角甾醇对照溶液，分别点于以羧?基纤维素钠?粘合剂的硅胶G 薄层板?，用展开剂暗处展开，晾?，用显色剂显色?实验室样品溶液?对照品溶液的?斑点Rf值及颜色应一?，实验室样品溶液的杂质斑点?得深于麦角甾醇对照溶液相应的斑点?A.6 比旋光度的测定 GB 14755-2010 6 A.6.1 试剂和材料 无水乙醇?A.6.2 仪器和设备 旋?仪?A.6.3 分析步骤 取实验室样品适量，精确?0.000 2 g，加无水乙醇制成1 mL中?含40 mg的溶液，?他按GB/T 613-2007规定的方法进行?注?在溶液配制?30min内测定?A.6.4 结果计算 比旋?度m(20,D)按公式(A.2)计算?()20,mC Dl=(A.2)式中?测得的旋?角,单?度()?l 旋?管的长度,单?分米(dm)?溶液中?效组分的质量浓度,单?克每毫升(g/mL)?A.7 质量吸收系数的测定 A.7.1 试剂和材料 无水乙醇?氯A.7.2 仪器和设备 紫外分?度仪?氯A.7.3 分析步骤?取实验室样品适量，精确?0.000 2 g，加乙醇制成每1 mL中?含10 g样品的溶液，按照GB/T 9721 在265 nm1 nm的波长处测定吸?度A，求?质量吸收系数?A.7.4 结果计算 根据吸?度A计算维生素D2的质量吸收系数，数值以()dm2 kg-1表示，按公式(A.3)计算?Ab=氯氯(A.3)氯式中?A氨氨样品溶液的吸?度的数值?b氨氨?路长度?吸收池厚度?的数值，单?厘米?cm?氨氨实验室样品溶液的质量浓度的数值，单?克每升?g/L?A.8 还原性物质的测定 A.8.1 方法原理 GB 14755-2010 7 还原性物质在强碱性溶液中能将四唑蓝还原?色?formazan?，?对?二酚无水乙醇还原物质的标准溶液颜色比较做限量检查?氯A.8.2 试剂和材料 A.8.2.1 无水乙醇?A.8.2.2?醇?A.8.2.3 冰乙酸?A.8.2.4 四唑蓝?醇溶液?50 mg/mL?A.8.2.5 羟化四?铵溶液?羟化四?铵水溶液(100 g/L)-无水乙醇?1+9?A.8.2.6 对?二酚无水乙醇溶液?0.2 g/mL?A.8.3 分析步骤 A.8.3.1 实验室样品溶液的制备?取?0.1 g实验室样品，精确?0.001 g，溶解于无水乙醇中，稀释?10 mL，加入0.5 mL四唑蓝?醇溶液和0.5 mL羟化四?铵溶液，静置5min，加入1.0 mL冰乙酸，摇匀?A.8.3.2 对照溶液的制备 量取10 mL0.05 mL 0.2 g/mL对?二酚无水乙醇溶液，加入0.5 mL四唑蓝?醇溶液和0.5 mL羟化四?铵溶液，静置5min，加入1.0 mL冰乙酸，摇匀?A.8.3.3 空白溶液的制备 取 10 mL 无水乙醇，加入 0.5 mL 四唑蓝?醇溶液和 0.5 mL 羟化四?铵溶液，静置 5min，加入1.0 mL 冰乙酸，摇匀?A.8.3.4 测定 在525 nm波长处，用空白溶液调零，分别测定实验室样品溶液?对照溶液的吸?度，实验室样品溶液的吸?度?得大于对照溶液?A.9 砷的测定 取5 g0.01 g实验室样品，用?化法处理样品?取相?量的?化镁?硝酸镁?试样?法处理，做试剂空白试验?量取10 mL0.05 mL砷标准溶液?含砷2.0g?，?法处理，制备砷限量标准?按GB/T5009.76氨2003砷斑法的规定进行?A.10 重金属的测定 A.10.1 试剂和材料 A.10.1.1 硝酸?A.10.1.2 硫酸?A.10.1.3 盐酸?A.10.1.4 甘油?A.10.1.5 乙酸铵?A.10.1.6 硝酸铅?A.10.1.7 硫代乙酰胺?A.10.1.8?试液?4001000?GB 14755-2010 8 A.10.1.9 氢?化钠溶液?c?NaOH?=1 mol/L?A.10.1.10 盐酸溶液?c?HCl?=2 mol/L?A.10.1.11 盐酸溶液?c?HCl?=7 mol/L?A.10.1.12?水溶液?c?NH3H2O?=5 mol/L?A.10.1.13 酚酞指示液?10g/L乙醇溶液?A.10.1.14 乙酸盐缓冲液?pH3.5?取25 g 乙酸铵，加水25 mL溶解?，加7 mol/L盐酸溶液38 mL，用2 mol/L盐酸溶液或?水溶液准确调节pH?3.5?pH计?，用水稀释?100 mL?A.10.1.15 硫代乙酰胺试液?取4 g硫代乙酰胺，精确?0.01 g，加水使溶解成100 mL，置冰箱中保存?临用前取5.0 mL混合液?1 mol/L 15 mL氢?化钠溶液?5.0 mL水及20 mL甘油组成?，加?述1.0 mL硫代乙酰胺溶液，置水浴?加热20s，冷?，立?使用?A.10.1.16 铅标准溶液?取0.160 g硝酸铅，精确?0.000 2g,置于1000 mL容量?中，加5 mL硝酸?50 mL水溶解?，用水稀释?刻度，摇匀，作?贮备液?临用前，移取?100.02?mL贮备液，置于100 mL容量?中，加水稀释?刻度，摇匀，?得?每1mL相当于10 g的Pb?配置?贮存用的玻璃仪器均?得含铅?A.10.2 分析步骤 按?中华人民共和?药?200附?二部氯?录氯H氯重金属检查法第二法，?体方法如?氯取 1 g 0.01 g 实验室样品，缓缓灼烧?完全炭化，放冷，加 0.5 mL1.0 mL 硫酸，使恰湿润，用?温加热制硫酸除尽?，加 0.5 mL 硝酸，蒸?，?化?蒸气除尽?，放冷，在 500 50 炽灼?完全?化，放冷，加 2 mL 盐酸，置水浴?蒸?加 15 mL 水，滴加?试液?对酚酞指示液显中性，再加 2 mL 乙酸盐缓冲液?pH3.5?，微热溶解?，移置纳氏比色管?管中，加水稀释成 25 mL?另取配制实验室样品溶液的试剂，置?皿中蒸?，加 2 mL 乙酸盐缓冲液?pH3.5?15 mL 水，微热溶解?，移置纳氏比色管乙管中，加 2 mL0.02 mL 标准铅溶液，再用水稀释成 25 mL?再在?乙?管中分别加 2 mL 硫代乙酰胺试液，摇匀，放置 2min，?置白纸?，自?向?透视，?管中显示的颜色?乙管比较，?得更深?氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯氯GB 14755-2010 1 附 录 B?规范性附录?维生素D2红外光谱?注?引自?药品红外?谱集?第一卷?1版版附?氯氯?B.1 维生素D2红外?谱?GB 14755-2010 1 附 录 C?资料性附录?系统适用性试验高效液相色谱?和相对保留时间 氯氯?C.1 系统适用性试验高效液相色谱?氯氯表 C.1 各峰保留时间和相对保留时间氯峰序氯组分?氯相对保留时间氯1 溶剂峰氯氨 2，3?知峰氯氨 4 前维生素 D3氯0.54 5 反式维生素 D3氯0.60 6 维生素 D3氯1.00 7 速甾醇 D3氯1.11 _氯