DB11_T 373-2006_苏氏圆腹鱼芒.pdf

ICS 65.150 B 52 备案号：19164-2006 北 京 市 地 方 标 准 DB DB11/T 3732006 苏氏圆腹鱼芒 pangasius sutchi 2006-07-25 发布 2006-10-01 实施 北京市质量技术监督局 发布 DB11/T 3732006 I 前 言 为保护该品种优良的经济性状及保存其种质资源，避免在推广中混杂，特制订本标准，作为该品种的种质检测和种质选育依据。本标准的附录A为规范性附录。本标准由北京市农业局提出并归口。本标准由北京市水产技术推广站起草。本标准主要起草人：杨华莲、潘志、张黎、柏文东、马立鸣、张孟才。DB11/T 3732006 1 苏氏圆腹鱼芒 1 范围 本标准规定了苏氏圆腹鱼芒（pangasius sutchi）的主要生物学特性、主要营养成分、细胞遗传学特性、生化遗传学特性、分子遗传学特性，以及检测方法。本标准适用于苏氏圆腹鱼芒的种质鉴定。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 5009.3-2003 食品中水分的测定 GB/T 5009.4-2003 食品中灰分的测定 GB/T 5009.5-2003 食品中蛋白质的测定 GB/T 5009.6-2003 食品中脂肪的测定 GB 17718-1999 鳙 GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分 抽样方法 GB/T 18654.12-2002 养殖鱼类种质检验 3 名称与分类 3.1 学名 苏氏圆腹鱼芒（pangasius sutchi）。3.2 分类位置 属鲇形目(siluriformes),鱼芒科(pangasiidae),鱼芒属(pangasius)。4 主要生物学特性 4.1 外部形态特征 4.1.1 外形 体长，侧扁，背部隆起，具脂鳍。头部扁平略呈圆锥状，吻短，口亚下位。鳃膜与颊部不相连，两眼位于近腹面部。有须2对，1对下颌须，1对口角须。臀鳍基长，从肛门后直达近尾鳍，脂鳍与臀鳍后缘相对。背鳍、胸鳍硬棘坚硬。尾鳍叉形。体表无鳞。体色肉白色，外形似鲨鱼。具前颌齿、下颌齿、腭骨齿及上咽齿，均为密布细小锐利齿。苏氏圆腹鱼芒 外形图见图1。DB11/T 3732006 2 图1 苏氏圆腹鱼芒 外形图 4.1.2 可数性状 4.1.2.1 背鳍 II，6-8。4.1.2.2 臀鳍 IV，25-28。4.1.2.3 鳃耙数 左侧第一鳃弓鳃耙数：20-23。4.1.3 可量性状 苏氏圆腹鱼芒的不同年龄组可量性状测量数值与比值如下表1。表1 不同年龄组可量性状测量数值与比值 年龄 项目 1 龄（n30）2 龄（n30）3 龄（n30）4 龄（n30）全长（cm）42.107.40 48.56.32 68.205.62 86.18.12 体长（cm）34.007.30 38.025.83 63.907.13 80.36.34 全长/体长 1.220.02 1.100.11 1.070.05 1.070.03 体长/体高 3.700.24 3.670.14 3.590.16 3.550.22 体长/头长 4.210.12 4.420.07 4.260.17 4.200.13 头长/吻长 2.760.42 6.000.37 4.260.33 3.450.27 头长/眼径 6.400.77 9.000.65 8.800.58 8.630.62 头长/眼间距 1.550.06 1.360.09 1.540.12 1.600.08 头长/尾柄长 1.470.12 1.380.06 1.400.15 1.870.09 尾柄长/尾柄高 1.880.28 1.970.14 1.640.21 1.280.18 4.2 内部构造特征 4.2.1 鳔 一室，鳔壁较厚，呈锥状,近与腹腔等长。4.2.2 胃 较短小，“V”形。4.2.3 肠 长度与体长相近，接近1:1。4.2.4 脊椎骨总数 36-38。4.2.5 腹膜 银白色。DB11/T 3732006 3 苏氏圆腹鱼芒内部结构图见图2。图2 苏氏圆腹鱼芒内部结构图 4.3 生长与繁殖 4.3.1 生长 不同年龄组的苏氏圆腹鱼芒体长、体重测量数值见表2。表2 不同年龄组鱼的体长、体重测量数值 4.3.2 繁殖 4.3.3 性成熟年龄 人工饲养条件下，雌性4年，雄性3年。4.3.4 性成熟个体性腺每年成熟和产卵次数 成熟1次，产卵1次。4.3.5 繁殖季节 自然条件下每年6月-9月，人工控制条件下全年可繁殖。4.3.6 怀卵量 每尾雌亲鱼怀卵量约（30-70）万粒。不同年龄组个体的怀卵量见表3。表3 不同年龄组个体怀卵量 年龄（龄）3 4 5 体重（g）2650.00422.00 4732.00392.00 5683.00639.00 绝对怀卵量（粒）(18.332.56)104(46.238.66)104(78.3413.2)104 相对怀卵量（粒/g）75.0013.00 108.0025.00 134.0016.00 4.4 生态特征 4.4.1 食性 杂食性。年龄（龄）1龄 2龄 3龄 4龄 全长（cm）42.107.40 48.53.32 68.205.62 86.108.12 体长（cm）34.007.30 38.025.83 63.907.13 80.306.34 体重（g）696.00392.00 1786.00267.00 2650.00422.00 4732.00392.00 DB11/T 3732006 4 4.4.2 温度 生存水温为1535，生活水温为2030，最适生长水温为2428,繁殖水温为2430。5 肌肉营养成分 5.1 主要营养成分 苏氏圆腹鱼芒肌肉蛋白质、粗脂肪、灰分、水分等营养含量指标见表4。表4 肌肉（后肢基部）主要营养成分 检测项目 营养指标（%）粗蛋白 17.17 粗脂肪 0.41 灰分 1.10 水分 82.4 5.2 氨基酸含量 表5 肌肉（后肢基部）主要营养成分 检测项目 氨基酸含量（%）天门冬氨酸 1.66 苏氨酸 0.79 丝氨酸 0.71 谷氨酸 2.68 甘氨酸 0.75 丙氨酸 1.00 胱氨酸 0.21 缬氨酸 0.74 蛋氨酸 0.55 异亮氨酸 0.74 亮氨酸 1.43 酪氨酸 0.62 苯丙氨酸 0.72 赖氨酸 1.52 组氨酸 0.40 精氨酸 0.98 氨基酸（以鲜基计）总量16.05%脯氨酸 0.55 6 细胞遗传学特性 6.1 体细胞染色体 2 倍数 2n=58 6.2 核型公式 24m+12sm+12st+10t NF=94 6.3 染色体组型 苏氏圆腹鱼芒的染色体中期分裂相图见图3，染色体组型图见图4。DB11/T 3732006 5 图 3 染色体中期分裂相 图 4 染色体组型 7 生化遗传学特性 肝脏的乳酸脱氢酶（LDH）同工酶有5条谱带，见图5。肝脏的酯酶（EST）同工酶有3个基因座位，有3条谱带，见图6。图 5 肝脏乳酸脱氢酶（LDH）同工酶图谱 图 6 肝脏的酯酶（EST）同工酶电泳图谱 8 分子遗传学特性 用15个RAPD（随机扩增多态性DNA技术，又称任意引物PCR）引物对其基因组DNA进行分析，确认引物S19的分析结果能够反应其基因组的多态性特征。引物S19序列：tgcccgtcgt。苏氏圆腹鱼芒基因组DNA RAPD图谱见图7。OEst-3 Est-2 Est-1 DB11/T 3732006 6 图 7 基因组 DNA RAPD 图谱 B：苏氏圆腹鱼芒（13 个样品）C：空白样品 M：分子量标准 9 检测方法 9.1 生物学性状测定 参照GB 17718-1999 鳙的生物学测定方法。9.2 肌肉营养成分测定 9.2.1 样品制备 取活体后肢基部肌肉，于105烘干，粉碎。肌肉各成分测定按照GB/T 5009.3、GB/T 5009.4、GB/T 5009.5、GB/T 5009.6规定的方法进行。9.2.2 氨基酸 使用氨基酸自动分析仪进行测定。9.3 细胞遗传学特性分析 根据GB/T 18654.12的相关规定进行。9.4 生化遗传学特性分析 9.4.1 样品制备 样品加3%辅酶I液匀浆，低温离心，至上清液澄清。整个制备过程均在低温下操作。9.4.2 电泳分析 使用水平淀粉凝胶电泳仪。淀粉胶浓度为10%，酯酶（EST）电泳缓冲液为三羟甲基氨基甲烷（Tris）-硼酸-乙二胺四乙酸四钠盐；乳酸脱氢酶（LDH）电泳缓冲液为甲基氨基甲烷（Tris）-柠檬酸，pH值7.0。将10%浓度水解淀粉煮好后倒入制胶模内，待凝固后，切一横裂缝，用滤纸片吸取样品的上清液插入裂缝中。电泳电压为250V，电泳8 h-10h，电泳恒温4，电泳后横切成0.2cm左右的薄片，浸入染色液中保温染色。同工酶染色液配方见附录A。9.4.3 结果判定 将测定结果对照图5、6谱带确定该种同工酶的编码座位数和多态座位的基因数。9.5 分子遗传学特性分析 9.5.1 基因组 DNA 的提取纯化 取肌肉剪碎用组织列解液（0.5mol EDTA，PH值8.0；200g/mL ProteinnseK；0.5%Snrcosyl）于55消化过夜，次日用酚、氯仿、异戊醇（24：24：1）抽提三次，RnaseA消化去除RNA后再抽提一次，然后用2150mmol/L Tris.HCl(pH 8.0)、10mmol EDTA（pH 8.0），透析至OD2700.05，检测DNA浓度，置4保存备用。DB11/T 3732006 7 9.5.2 RAPD 引物及扩增条件 用PE-9600型PCR扩增仪，RAPD扩增引物OPP及OPM组计15个。RAPD反应：10mmol/L Tris.HCl（pH 8.3），50 mmol/L KCl，2.0 mmol/L MgCl2，0.001%明胶；Dapt.dGTP、Dctp，dTTP各为0.1 mmol/L:引物15g，基因组DNA20g，1单位Tag聚合酶。于 93.5变性1 min，36退火1 min，72延伸2min，计45个循环，循环结束后延伸5min，扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。9.5.3 琼脂糖凝胶电泳 凝胶浓度为1.5%的琼脂糖，胶中含0.5g/mL溴化乙锭。电泳缓冲液为TBE，电泳在室温下进行，电压为15V/cm，电泳时间为16h。电泳毕在紫外灯下观察拍照。10 检测规则 10.1 检测分类 检测分为鉴定检测和质量一致性检测。10.2 检测项目 鉴定检测项目包括外部形态特征、可量性状、可数性状。质 量一致性检测项目包括细胞遗传学特性、生化遗传学特性、分子遗传学特性。10.3 取样 样品龟的抽样按GB/T18654.2规定执行。10.3.1 组批 以同龄期的苏氏圆腹鱼芒为同一批。10.4 判定规定 各项检验指标在标准范围内则判定为苏氏圆腹鱼芒良种。DB11/T 3732006 8 附 录 A(规范性附录)同工酶染色液的配方 酯酶染色液配方，见表A.1 表 A.1 酯酶染色液配方-乙酸萘酯（mg）坚牢蓝B盐（mg）三羟甲基氨基甲烷-柠檬酸缓冲液（1mol，PH7.0）(mL)蒸馏水(mL)40 100 10 10 乳酸脱氢酶染色液配方,见表A.2 表 A.2 乳酸脱氢酶染色液配方 乳酸钠(mL)辅酶I(mg)氮蓝四唑(mg)吩嗪甲硫酸(mg)三羟甲基氨基甲烷-柠檬酸缓冲液（1mol，PH8.6）(mL)蒸馏水(mL)0.5 6 2 1 10 10