农残检测步骤.doc

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农残速测步骤
一、 试剂配制
缓冲液：将一包缓冲剂倒入510ml蒸馏水中搅拌溶解。
酶：倒入10ml缓冲液至瓶中，摇匀溶解。
显色剂：倒入10ml缓冲液至瓶中，摇匀溶解。
底物：加入10ml蒸馏水至瓶中，摇匀溶解。
试剂配制好后放入冰箱冷藏，保质期为3个月。
二、仪器预热及空白对照。
提前将仪器开机预热，此过程一般10分钟。登陆账号和密码均为000000。预热结束后点空白对照，观察每个通道显示的光强度，在10000-40000则光源正常。
三、样品制备、提取
1、 将样品剪至1cm左右大小，称取2g样品至样品瓶中。块茎类称4g。
2、 加入10ml缓冲液振荡1-2分钟，放置10-15分钟备用。若液体浑浊
或杂质较多，则过滤后备用。
三、 加试剂
1、 每个样品提取液分别吸取2.5ml至刻度试管中，另取一只试管加入2.5ml缓冲液代替样品作为空白对照。
2、 加入100ul酶、100ul显色剂到各试管中，混匀反应15分钟。若室温低于25℃，需37℃水浴下反应。
3、 加入100ul底物至各试管中，摇匀。
四、上机比色
1、将试管中液体倒入比色皿，放入速测仪检测通道。第一通道放入空白对照，其余通道放入样品溶液。（毛玻璃面对准自己。）
2、关上盖子，点击“试剂对照”--开始，等待3分钟即可。
五、 结果
1、 通过数据管理可查看和打印结果。
2、 若抑制率大于50%，则结果判定为阳性。出现阳性时需复测1-2次，若仍为阳性，方可下结论。
六、 注意
1、葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。
2、对一些含叶绿素较高的蔬菜（缓冲液浸提后，明显颜色较深的样品），也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。
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