DB35_T2066-2022十二卷属软叶类多肉植物组培育苗通用技术规范.pdf

ICS 65.020.20 CCS B 61 35 福建省地方标准 DB35/T 20662022 十二卷属软叶类多肉植物组培育苗通用 技术规范 Technical specification for tissue culture and seedling raising of succulent plants of Haworthia Duval 2022-08-08 发布 2022-11-08 实施 福建省市场监督管理局 发 布 DB35/T 20662022 I 目次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 环境设施与控制.1 5 培养基.1 6 外植体采集与处理.2 7 诱导培养.3 8 增殖培养.3 9 生根培养.3 10 炼苗.4 11 质量标准与出苗.4 12 技术档案.4 附录 A（资料性）MS 基本培养基成分及母液配制.5 附录 B（资料性）十二卷属软叶多肉植物组培培养基配方.6 附录 C（资料性）培养基配制记录表.7 附录 D（资料性）外植体采集记录表.8 附录 E（资料性）接种记录表.9 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由福建省林业局提出并归口。本文件起草单位：龙岩市禾康生物科技有限公司、福建省龙岩市林业种苗站。本文件主要起草人：樊仲书、林能庆、张玉华、洪永辉、樊昌华、黄以法、樊君早、王海斌。DB35/T 20662022 1 十二卷属软叶类多肉植物组培育苗通用技术规范 1 范围 本文件规定了十二卷属软叶类多肉植物组培育苗生产技术的环境设施与控制、培养基、外植体采集与处理、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗、质量标准与出苗和技术档案。本文件适用于阿福花科十二卷属软叶类多肉植物组培育苗。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 155692009 农业植物调运检疫规程 LY/T 18822010 林木组织培养育苗技术规程 NY/T 23062013 花卉种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 LY/T 18822010界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1 十二卷属软叶类多肉植物 succulent soft leafed plants of Haworthia Duval 阿福花科小型多年生高叶型多肉植物。4 环境设施与控制 按照NY/T 23062013的规定执行。5 培养基 5.1 培养基选择 选择MS培养基为基本培养基。5.2 母液配制与保存 5.2.1 母液配制 母液用无菌的蒸馏水或去离子水配制。母液主要包括大量元素、铁盐、微量元素、有机物质和植物生长调节剂等（参见附录A）。5.2.2 母液保存 母液置于3 5 的冰箱中保存，其中铁盐和植物生长调节剂母液储存在避光容器中，母液保存期不超过1个月。母液贮存容器上贴好标签，注明名称、配制日期，发现标签不明或母液中有沉淀、结晶或微生物和藻类应废弃不用。5.3 培养基配制 5.3.1 配制方法 依照培养基配方以及需要配制的培养基体积，量取70%75%最终体积（V）的纯净水，按配方量取母液、称取凝固剂和白砂糖，转至分装桶并定容。诱导培养基、增殖培养基和生根培养基配方（参见附录B）。5.3.2 pH 值的调整 用1.0 mol/L盐酸或1.0 mol/L氢氧化钠调整培养基pH值至5.86.0。5.3.3 分装 配制好的培养基应及时分装到培养容器中，分装时勿将培养基沾到培养容器口，盖好瓶盖，做好标记和记录（参见附录C）。5.4 灭菌 将分装好的培养基放入高压蒸汽灭菌器内进行湿热灭菌，在蒸汽压力为0.105 Mpa，温度121 的条件下，灭菌20 min25 min。灭菌后的培养基应置于无风和洁净的环境中冷却至常温。5.5 贮存 灭菌后的培养基注明培养基编号、配制日期和灭菌锅次。为保证培养基质量，将配制好的培养基在23 27 洁净环境中放置5 d7 d备用，贮存时间不超过一个月。6 外植体采集与处理 6.1 外植体采集 选择植株的叶片或花茎作为外植体。春、秋两个生长旺季选择观赏性高、抗逆性强、生长健壮植株作为采集外植体的母株。采集前将母株放在通风处阴干2 d3 d。采集时，对母株用清水冲洗干净，用毛笔蘸洗衣粉水刷洗，并用无菌水清洗35次。外植体要标明品名、来源、采集地点、时间、人员等（参见附录D）。6.2 外植体处理 在超净工作台上先用75%酒精浸泡外植体20 s30 s，然后用无菌水冲洗3次，再用2%3%的次氯酸钠溶液浸泡15 min25 min，最后用无菌水清洗35次。7 诱导培养 7.1 诱导培养基 参见附录B。7.2 外植体接种 将消毒后的外植体切成1 cm左右的小段，其中以花茎为外植体的需带花芽，垂直或斜插接种到诱导培养基中，外植体与培养基要接触良好，深浅适中。接种后及时填写接种记录表（参见资料性附录E）。7.3 培养条件 接种后先暗培养5 d7 d，再置于光照强度为1 500 Lx2 000 Lx、温度23 27、湿度RH60%环境中进行培养，每天光照12 h14 h，培养28 d35 d。8 增殖培养 8.1 增殖培养基 参见附录B。8.2 增殖接种 应根据不同品种的组培生长分化特性，接种时将无菌增殖材料切成带23个芽的丛芽或小段，芽苗高保留2 cm左右，切除松散的愈伤、褐化组织、畸形苗和玻璃化苗，接种于增殖培养基中。接种后及时填写接种记录表（参见资料性附录E）。8.3 培养条件 置于光照强度为1 500 Lx2 000 Lx、温度23 27、湿度RH60%环境中进行培养，每天光照12 h14 h，培养28 d35 d。9 生根培养 9.1 生根培养基 参见附录B。9.2 生根接种 选择无污染、生长健壮、苗高为2 cm4 cm、叶片数为24片的增殖芽苗，切割成单芽接种到生根培养基中。接种后及时填写接种记录表（参见资料性附录E）。9.3 培养条件 置于光照强度为1 500 Lx2 000 Lx、温度23 27、湿度RH60%环境中进行培养，每天光照12 h14 h，培养28 d35 d。10 炼苗 生根瓶苗根长达到1 2 时，置于光照强度为5 000 Lx8 000 Lx、温度15 30、湿度RH80%环境中进行炼苗15 d30 d。11 质量标准与出苗 11.1 组培苗质量标准 生根苗健壮、无污染、无病虫害，根数2条,叶片数3片。11.2 出苗 炼苗结束后，从培养瓶中取出组培生根苗，用清水洗去苗上的培养基，置于温度10 30、通风条件下阴干3 d5 d后，按11.1进行检验。检验合格的包装出苗，贴上合格证，包括品名、代码、数量、生产日期、检验人员。11.3 检验检疫 按GB 155692009的要求执行。12 技术档案 技术管理档案的内容参见附录C附录E。附录A （资料性）MS 基本培养基成分及母液配制 十二卷属软叶类多肉植物MS基本培养基成分及母液配制参见表A.1。表A.1 十二卷属软叶类多肉植物 MS 基本培养基成分及母液配制 母液种类 基质名称 定量（mg/L）扩大倍数 扩大后称量mg 母液体积 L 配培养基 吸取量（mL/L）A 大量元素 NH4NO3 1 650.000 10 16 500.0 1 100 KNO3 1 900.000 19 000.0 MgSO47H2O 370.000 3 700.0 KH2PO4 170.000 1 700.0 CaCl2 440.000 4 400.0 B 铁盐 FeSO47H2O 27.800 100 2 780.0 1 10 Na2-EDTA 37.300 3 730.0 C 微量元素 MnSO4H2O 16.900 100 1 690.0 1 10 ZnSO47H2O 8.600 860.0 CuSO45H2O 0.025 2.5 NaMoO42H2O 0.250 25.0 CoCl26H2O 0.025 2.5 KI 0.830 83.0 H3BO3 6.200 620.0 D 有机物质 烟酸 0.500 50 25.0 0.5 10 盐酸硫胺素 0.100 5.0 盐酸吡哆醇 0.500 25.0 甘氨酸 2.000 100.0 肌醇 100.000 5 000.0 附录B （资料性）十二卷属软叶多肉植物组培培养基配方 十二卷属软叶类多肉植物组培培养基配方参见表B.1。表B.1 十二卷属软叶类多肉植物组培培养基配方 基质类别 基质名称 诱导培养基（mg/L）增殖培养基（mg/L）生根培养基（mg/L）大量元素 NH4NO3 825.000 825.000 825.000 KNO3 950.000 950.000 950.000 MgSO47H2O 185.000 185.000 185.000 KH2PO4 85.000 85.000 85.000 CaCl2 220.000 220.000 220.000 铁盐 FeSO47H2O 27.800 27.800 27.800 Na2-EDTA 37.300 37.300 37.300 微量元素 MnSO4H2O 16.900 16.900 16.900 ZnSO47H2O 8.600 8.600 8.600 CuSO45H2O 0.025 0.025 0.025 NaMoO42H2O 0.250 0.250 0.250 CoCl26H2O 0.025 0.025 0.025 KI 0.830 0.830 0.830 H3BO3 6.200 6.200 6.200 有机物质 烟酸 0.500 0.500 0.500 盐酸硫胺素 0.100 0.100 0.100 盐酸吡哆醇 0.500 0.500 0.500 甘氨酸 2.000 2.000 2.000 肌醇 100.000 100.000 100.000 植物生长 调节剂 6-BA 0.5000.800 0.2000.400 IBA 0.2000.300 0.3000.600 NAA 0.3000.600 IAA 0.1000.300 蔗糖 白砂糖 30 000.000 30 000.000 3 000.000 凝固剂 卡拉胶 6 000.000 6 000.000 7 000.000 附录C （资料性）培养基配制记录表 十二卷属软叶类多肉植物组培培养基配制记录表参见表C.1。表C.1 十二卷属软叶类多肉植物组培培养基配制记录表 日期 培养基名称 培养基代码 培养基配制量 L 母液代码 A B C D E F G H I J K PH 备注 签名 1 L 配方 取量 mL 附录D （资料性）外植体采集记录表 十二卷属软叶类多肉植物外植体采集记录表参见表D.1。表D.1 十二卷属软叶类多肉植物外植体采集记录表 采集日期 采集人 采集地点 科属名 植物名 学名 基本特征 采集部位 采集数量 照片存放点 备注 附录E （资料性）接种记录表 十二卷属软叶类多肉植物接种记录表参见表E.1。表E.1 十二卷属软叶类多肉植物接种记录表 时间 品种代码 接种人员 原材料数量瓶 阶段 代数 接种数量瓶 培养基 代码 备注