金黄色葡萄球菌检查用培养基适用性检查验证方案.doc

1.概述:培养基是微生物实验的基础，直接影响微生物实验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制是提供优质培养基的保证。供试品微生物限度检查中所使用的培养基应进行合用性检查。
2.验证目的：本次验证的目的是确认金黄色葡萄球菌检查用培养基合用性检查用的甘露醇氯化钠琼脂培养基的质量，以及其制备程序、保存条件等是否满足微生物限度检查用规定。
3.验证依据：《中国药典》2023年版四部“1106非无菌产品微生物限度检查：微生物控制菌检查”、“9203药品微生物实验室质量管理指导原则”。
4.验证项目：甘露醇氯化钠琼脂培养基的合用性检查。
5.合用范围：成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基合用性检查。
6.验证周期：除另有规定外，在实验室中，若采用已验证的配制和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基的合用性检查实验可以只进行一次。假如培养基的制备过程未经验证，那么每一灭菌批培养基均要进行合用性检查实验。
7.验证小组人员及职责：
7.1验证小组人员:
小组人员职务
姓 名
签字
所在部门
职 务
组 长

质量部
质量总监
组 员

质量控制实验室
QC主任
组 员

质量控制实验室
微生物QC
7.2验证人员职责及规定
7.2.1按验证方案及相关文献实行验证。
7.2.2认真观测并做好验证原始记录。
7.2.3对实行验证的结果负责。
7.3验证中各部门的职责
7.3.1验证领导组职责
7.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
7.3.1.2拟定验证项目及验证项目负责人。
7.3.1.3负责验证方案的批准工作。
7.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
7.3.1.5负责验证报告的批准工作。
7.3.2验证项目小组职责
7.3.2.1负责验证方案的起草工作。
7.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
7.3.2.3负责验证方案的实行。
7.3.2.4负责验证结果的分析、记录、报告工作。
7.3.2.5参与验证结果的评价工作。
7.3.3质量部职责
7.3.3.1负责公司验证平常管理工作。
7.3.3.2负责验证方案的审核工作。
7.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
7.3.3.4负责检查仪器及检查方法的验证。
7.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证的检查记录、检查报告，对验证过程中的各项检查工作负责。
7.3.3.6负责对验证人员的培训、考核工作。
7.3.3.7负责验证资料和报告的审核工作。
7.3.3.8负责验证文献回收、归档管理工作。
8.合格标准：
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
9.验证实行条件
9.1验证方案培训：在验证实行前，应对参与验证的人员进行验证方案以及与验证相关的文献进行培训，保证相关人员掌握了验证的相关规定与知识。
9.2微生物限度检测室：检查所使用的检测室应通过HVAC系统确认，并符合规定。
9.3检查用水：验证过程使用的纯化水其制备系统应通过确认并符合规定，纯化水质量应通过检查并符合《中国药典》2023年版二部的规定。
9.4检查仪器设备：验证涉及的检查仪器（设备）与检查方法，应通过技术监督局校验合格或者公司确认/验证合格。
9.5验证菌种：验证所使用的菌种，其种类与传代次数应符合《中国药典》的相关规定。菌种情况见附件2:菌种确认。
10.验证过程
10.1菌液制备
取经30-35℃培养18-24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的新鲜培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释至10-6-10-8，约为≤100cfu/ml的菌悬液备用。
10.2实验操作
10.2.1甘露醇氯化钠琼脂培养基：新鲜配制对照甘露醇氯化钠琼脂培养基，121℃灭菌15min，冷却至60℃倾注平皿，35℃培养箱预培8h后备用。取2个无菌甘露醇氯化钠琼脂平板，涂布接种大肠埃希菌1皿，接种菌液0.1ml（含菌≥100cfu），另一平板不接种菌作为空白对照，涂布均匀后于30～35℃倒置培养。被检培养基同法操作。72h分别观测结果。
10.2.2甘露醇氯化钠琼脂培养基：新鲜配制对照甘露醇氯化钠琼脂培养基，121℃灭菌15min，冷却至60℃倾注平皿，35℃培养箱预培8h后备用。取3个无菌甘露醇氯化钠琼脂平板，分别涂布接种金黄色葡萄球菌2皿，接种菌液0.1ml（含菌≤100cfu），另一平板不接种菌作为空白对照，涂布均匀后于30～35℃倒置培养。被检培养基同法操作。18h分别观测结果。
10.3.检查结果：见附件5：金黄色葡萄球菌检查用培养基合用性检查结果
11.异常情况与偏差解决：当出现偏差时，应按《偏差解决管理规程》进行解决。
12.验证结果评估、结论与建议
验证小组组长负责收集各项验证、实验记录，根据验证、实验结果对验证效果进行综合评审，起草验证报告、做出验证结论。对验证结果的评审应涉及以下内容：
12.1验证实验是否有漏掉？
12.2验证实行过程中对验证方案有无修改？修改因素、依据以及是否通过批准？
12.3验证记录是否完整？
12.4验证实验结果是否符合标准规定？偏差及对偏差的说明是否合理？是否需要进一步补充实验？
13.附件
13.1 附件1:验证实行条件确认
13.2 附件2:培养基确认
13.3 附件3:菌种确认
13.4 附件4:菌液浓度拟定
13.5 附件5:金黄色葡萄球菌检查用培养基合用性检查结果
13.6 附件6:验证结果审批表

附件1： 设施设备验证确认
设施设备名称
验证报告编号
验证结果
实验室HVAC系统

纯化水系统

LDZX-40A型立式自控电热压力蒸汽灭菌器

PSH-500A型生化培养箱

303AS-2型电热恒温隔水式培养箱

SW-CJ-1C型双人净化工作台

确认结论：
确认人： 确认日期：

附件2： 培养基确认
培养基名称
来源
批号
有效期至
甘露醇氯化钠琼脂培养基

对照甘露醇氯化钠琼脂培养基

确认结论：
确认人： 确认日期：

附件3： 菌种确认
培养基名称
来源
批号
大肠埃希菌CMCC(B)44102

金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003

确认结论：
确认人： 确认日期：

附件4：菌液浓度拟定

10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
大肠埃希菌
皿1

皿2

金黄色葡萄球菌
皿1

皿2

结论：
根据规定，菌数要控制在每1ml中含菌数在≤100cfu，因此，我们拟定菌液制备浓度为：
大肠埃希菌： 金黄色葡萄球菌:
检查人

检查时间
年 月 日- 年 月 日
复核人

复核时间
年 月 日

附件5：金黄色葡萄球菌检查用培养基合用性检查结果

培养基
验证菌株
测试特性
皿号
被检培养基cfu/ml
对照培养基cfu/ml
结果
甘露醇氯化钠琼脂培养基
（30～35℃，18-72h）

大肠埃希菌
克制能力
1

2

金黄色葡萄球菌
促生长能力+指示能力
1

2

空白
—
1

检查人

检查时间
年 月 日- 年 月 日
复核人

复核时间
年 月 日

表6:验证结果审批表
验证对象

验证开始日期

验证结束日期

评审意见（在方框中打√）
1、验证实验有否漏掉 □ 漏掉 □ 未漏掉
2、验证实行过程中对验证方案有无修改 □ 有修改 □ 无修改
3、方案修改的因素 □ 通过批准 □ 未经批准
4、验证记录是否完整 □ 完整 □ 不完整
5、是否出现偏差 □ 出现偏差 □ 未出现偏差
6、对偏差的说明是否合理 □ 合理 □ 不合理
7、是否需要作进一步的实验 □ 是　　　　□ 否

验证项目小组组长：
年 月 日

验证领导小组组长：
年 月 日