VPGY0330A1车间环境消毒再验证方案.doc

文件名称
一车间环境消毒方法及效果再验证方案
文件编号
VP-GY-0330
版本号
A版
所属部门
小容量注射剂车间（一车间）
验证类型
周期验证

2015年7月
文件审核及批准：

部门
姓名
签名
日期
起草人
验证部

审核人
验证部

审核人
小容量注射剂车间

审核人
化验室

QA审核
质量保障部

批准人
质量负责人

备注

目 录
1. 目的-----------------------------------------------------------------------------------------------------------3
2. 范围-----------------------------------------------------------------------------------------------------------3
3. 验证小组成员与职责--------------------------------------------------------------------------------------3
4. 概述-----------------------------------------------------------------------------------------------------------4
5. 前提条件----------------------------------------------------------------------------------------------------13
6. 再确认-------------------------------------------------------------------------------------------------------15
7. 附录----------------------------------------------------------------------------------------------------------36
8. 验证总结----------------------------------------------------------------------------------------------------37
1.目的
确认小容量注射剂车间（一车间）洁净区环境在现有规定的消毒方法下，能降低或减少微生物数量，使之达到安全或本厂规程的安全水平，保持洁净区相应的级别。
2.范围
适用于小容量注射剂车间（一车间）洁净区消毒的周期性再验证。
验证地点为：小容量注射剂车间（一车间）洁净区
3.验证小组成员与职责
验证
职务
姓名
所在部门
职务
本验证工作中职责
组长

质量保障部
副厂长
负责验证方案和报告的审核与批准，保证验证正常运行提供必要的资源。
组员

质量保障部
副经理（QA）
负责验证方案和报告的审核，协调安排验证过程中QA相关工作。
组员

小容量注射剂车间
主任
负责验证方案和报告的审核，协调安排验证过程中生产的执行。
组员

验证部
经理
验证方案和报告的审核，组织验证实施
组员

验证部
职员
制定验证方案，人员培训，验证报告整理；现场臭氧浓度监测
组员

质量保障部
现场QA
现场操作监督；挑战性测试时测试皿放置、取样及送样
组员

化验室
QC
测试用菌液、培养皿制备；试验菌片转移及培养检测
组员

小容量注射剂车间
职员
洁净区空间环境消毒操作及记录填写
组员

小容量注射剂车间
职员
洁净区表面擦拭消毒操作及记录填写
4.概述
本验证方案中所述环境消毒方法分为空间环境消毒和表面擦拭消毒。
4.1.洁净区空间环境消毒
小容量注射剂车间（一车间）洁净区空间环境消毒方法为周期性（每月）的甲醛薰蒸和生产期间（每天）在生产结束后进行臭氧消毒。
4.1.1.甲醛薰蒸消毒法
甲醛其水溶液俗称福尔马林（formalin）。杀菌性能的原因主要是构成生物体（包括细菌）本身的蛋白质上的氨基能跟甲醛发生反应。由于其有特殊的刺激气味，对人眼、鼻等有刺激作用,且有一定毒性，故仅作为周期性的空间环境消毒剂。参考《药品生产验证指南》2003，规定使用量见下表：
空调
区域
洁净级别
甲醛含量
使用量（ml）
加水量（ml）
JK2-1机组
灌封
A/B
36%
5000
1250
JK2-2机组
洗瓶
D
3000
750
JK2-3机组
配料
C
4000
1000

消毒流程（空调机组为消毒模式，内置自动程序）：
流程
操作
空调消毒模式运行参数
气化
甲醛溶液加入气化罐，蒸气电磁阀设3小时，开启气化罐与空调机组管阀，经风管送入各洁净室。
新风阀开度0，风机频率30Hz（JK2-3风速频率32Hz），回风阀开度50。
熏蒸
甲醛蒸气全部进入洁净区后，关闭空调机组风机。闷熏7小时。
——
置换
开启空调机组，置换不少于2小时。
新风阀开度100，风速正常，排风机开，回风阀关至最小。
结束
空调机组转为正常模式

消毒周期：每月。
环境残留接受限度：≤0.08mg/m3
注：甲醛浓度换算1ppm≈1.3mg/m3
4.1.2.臭氧消毒法
臭氧是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。
参考中华人民共和国卫生行业标准WS/T 367—2012（医疗机构消毒技术规范）“C.7.2.1空气消毒 采用20mg/ m3浓度臭氧，作用30分钟，对自然菌杀灭率90%以上，消毒后通风30分钟以上人员方可进入”“C.7.2.2物体表面消毒 相对湿度≥70%，采用60 mg/ m3浓度的臭氧，作用60~120分钟”，“有人情况下室内允许臭氧浓度0.16mg/m3.”。设定本厂臭氧消毒参数如下表示：
臭氧发生器
安装位置
所属区域
洁净级别
臭氧浓度
消毒时间
初始电流
DFY-K120B
JK2-2送风段
洗瓶区
D级
10㎎∕m3
1.5小时
2.6A
DFY-K120B
JK2-3送风段
配料区
C级
30㎎∕m3
2小时
3.4A
DFY-K80B
JK2-1送风段
灌封区
A/B级
40㎎∕m3
2小时
4.6A

消毒时空调机组运行模式（值班模式）参数：
机组
风速（m/s）
风机频率（Hz）
新风阀开度（%）
回风阀开度（%）
JK2-1
——
38.5
100
50
JK2-2
——
30
100
50
JK2-3
——
30
100
50

消毒周期：每天生产结束后。
环境残留按受限度：≤0.16mg/m3。
注：臭氧浓度换算1ppm≈2mg/m3。

4.2.洁净区环境表面消毒
环境表面消毒：采用消毒剂对洁净区表面包括墙面、地面、天顶、门、设备外表面等进行人工擦拭方法。
消毒周期：
周期
对象
消毒剂
每日生产结束后
台面、门窗、墙面、地面、用具、附属装置、设备操作台面及外表面。
3%过氧化氢、75%乙醇
每生产周期（2周）结束后
日清洁对象；
天顶、探头、报警器、灯罩、层流罩

消毒剂配制（10000ml配制量）及使用周期：
消毒剂名称
配制
使用
3%过氧化氢
35%过氧化氢860ml，加注射用水至10000ml。
每月轮换交替使用
75%乙醇
95%乙醇7895ml，加注射用水至10000ml。

4.3.参考资料
中华人民共和国卫生行业标准WS/T 367—2012（医疗机构消毒技术规范）
国家食品药品监督管理局认证管理中心《药品GMP指南 》 2011
《药品生产验证指南》 2003
GB/T18883-2002室内空气质量标准
5.前提条件
5.1.文件确认
检查与确认验证该系统所需的相应的操作规程是否已经具备，且经审核批准后按要求发放。
文件确认表
文件编号
文件名称
存放地点
检查情况
SOP-ZL-1001
环境监测管理规程
质量、岗位

SOP-ZL-1003
沉降菌测试标准操作规程
质量、岗位

SMP-ZL-0017
注射剂车间环境监测管理程序
质量、岗位

SOP-XR-0004
洁净室环境消毒（一车间）标准操作规程
质量、岗位

SOP-XR-0003
空调净化系统标准操作规程（一车间）
质量、岗位

SOP-GY-5024
洁净区清洁卫生标准操作规程
质量、岗位

SOP-GY-5018
消毒液配制标准操作规程
质量、岗位

确认人/日期：

5.2.相关消毒设备设施确认
检查以下与消毒相关的设备设施，应已验证合格或处于完好状态
编号
名称
是否符合？
VP-GY-0222
一车间空调净化系统再验证（JK2-1）
是□ 否□
VP-GY-0223
一车间空调净化系统再验证（JK2-2）
是□ 否□
VP-GY-0224
一车间空调净化系统再验证（JK2-3）
是□ 否□
确认人/日期：
5.3.验证培训确认
确保验证相关人员了解验证方案，按照验证方案经行实施，并加强对验证相关文件了解。
培训日期
培训内容
培训人
被培训人

VP-GY-0330(A)
一车间环境消毒方法及效果再验证方案
杨光远
验证小组成员
审核人/日期：
验证培训签到记录见附件一。
5.4.检测仪器设备确认
确认验证用检测仪器均校验合格且在校验合格有效期内。
名称
型号
用途
校验单位
校验结果
有效期至
固定式气体检测变送器
MIC-500
臭氧浓度检测

气体检测仪（甲醛）
GT-901
环境甲醛残留检测

确认人/日期：
检验仪器计量证书见附件二。

结论：
上述前提条件均已完成，可以实施本次验证？
是□ 否□
签名/日期

6. 验证内容
6.1.臭氧消毒测试
确认目的：
确认采用的规定臭氧消毒方法，能杀灭微生物至安全水平，使洁净室微生物水平符合规定。
检测工具：
MIC-500系列固定式气体检测变送器
金黄色葡萄球菌菌液（50~100CFU/ml）、φ90mm培养碟
臭氧消毒流程：
1、空调机组转换成值班模式；
2、分别设定并检查一车间各个洁净区域的消毒时间，开启臭氧发生器。
JK2-2送风段
洗瓶区
1.5小时
JK2-3送风段
配料区
2小时
JK2-1送风段
灌封区
2小时
确认方法：
1、臭氧消毒浓度及残留监测
将MIC-500系列固定式气体检测变送器放置在“最差条件”的洁净室（JK2-1为器具存放室/211309；JK2-2为清洗器具室/210608；JK2-3为洗衣室/211016）进行臭氧浓度测试，通过数据连接线将洁净区外的控制系统（电脑）与臭氧检测仪进行连接，开始监测。并在臭氧消毒程序完成2小时后，再次监测臭氧浓度，以确认臭氧残留。
2、挑战性试验
2.1、试验用测试皿制备：
2.1.1、配制金黄色葡萄球菌菌液，要求浓度为50~100CFU/ml；
2.1.2、吸取1ml菌液，滴入φ90mm培养碟，制成挑战用测试平皿；
2.2、将挑战用测试平皿放入测试房间，每个测试房间放置2个。测试房间与“6.1”项“采样点布置表”同。
2.3、臭氧消毒结束后，人员按照更衣要求，进入洁净区，盖上培养皿盖后取出培养皿并对每个培养皿标注房间名称及日期，交由QC浇注15ml营养琼脂培养基，再倒置放在30～35℃的培养箱中培养48小时。同时另取2个无菌培养皿和2个未经臭氧消毒程序的挑战用测试平皿作为空白和阳性对照。一同培养后检查菌落生长情况。计算臭氧的杀灭率。杀灭率=（阳性对照菌落数—挑战后菌落数）/阳性对照菌落数×100%
接受标准：
1、 臭氧消毒程序中，达到规定的臭氧浓度持续时间应不少于60分钟：JK2-1（灌封区）浓度40mg/m3；JK2-2(洗瓶区)浓度10mg/m3；JK2-3（配料区）浓度30mg/m3。
2、臭氧消毒结束2小时后，臭氧残留限度≤0.16mg/m3。
3、检查挑战性测试平皿菌落数，臭氧杀灭率不小于90%。
（注：臭氧浓度换算1ppm≈2mg/m3）
测试结果：
臭氧消毒效果确认
项目
接受
标准
检查结果
是否
接受？
JK2-1
JK2-2
JK2-3
臭氧消毒流程
与规定一致。

是□否□
臭氧浓度和持续时间
JK2-1：40mg/m3，60分钟
JK2-2：10mg/m3 60分钟
JK2-3：30mg/m3 60分钟

是□否□
臭氧残留检测
残留浓度≤0.16mg/m3

是□否□
挑战性测试
臭氧杀灭率不小于90%

是□否□
确认人/日期：
附件三：臭氧消毒记录（表1）；臭氧浓度监测记录（表2）；挑战性测试记录（表3）；

小结与评价：

分析人/日期：

6.2.洁净区表面微生物监测
确认目的：
确认洁净区在采用擦试消毒和臭氧消毒后，其表面微生物水平符合规定。
测试工具：
Φ55mm接触碟
洁净区擦试消毒流程：
按SOP-GY-5024 洁净区清洁卫生标准操作规程进行，按下表要求用洁净抹布沾取消毒剂人工操作：
对象
消毒剂
台面、门窗、墙面、地面、用具、附属装置、设备操作台面及外表面。
3%过氧化氢、75%乙醇
测试方法：
1、采样时间：按本车间实际生产情况是在生产结束后进行人工擦试清洁消毒，并在人工清洁后进行臭氧消毒。第二天进入下一轮生产周期。据此，模拟实际生产情况，在臭氧环境消毒后第二天进行采样。
2、用Rodac直接接触法取样，取样时，将取样部位直接与接触碟接触10秒钟左右，确保全部琼脂表面与取样点表面充分接触。并做好采样编号标记及记录好培养基批号，同时取2个空白平板做阴性对照。采集完毕后，放培养箱中，30-35℃培养48小时，取出后计算菌落数。
3、采样点选取：在实际生产中，易于接触且接触频率高的点或区域相对风险较高，故验证中遵循上述原则，设置取样点位置如下：
区域
洁净级别
主操作间/房号
采样位置
采样数量（个）
JK2-2洗瓶区

D级
洗瓶室/210610
门把手（内外各一）
2
洗瓶机（3台）操作台面、触摸屏
3+3
遂道干燥灭菌机触摸屏
3
电话机、墙壁
1+1
JK2-3配料区

C级
稀配室/211013
门把手（内外各一）
2
配制罐外壁
1
电话机、墙壁
1+1
JK2-1灌封区

B级
灌封室/211308
门把手（内外各一）
2
电话机、墙壁
1+1
灌封机触摸屏、隔离门
3+3
按受标准：
表面微生物平均值应符合下表规定：
洁净级别
A级
B级
C级
D级
接触（55mm） cfu /碟
<1
5
25
50

测试结果：
洁净区表面微生物监测确认
区域
洁净级别
平均值（cfu /碟）
是否接受？
JK2-2洗瓶区
D级

是□否□
JK2-3配料区
C级

是□否□
JK2-1灌封区
B级

是□否□
汇总人/日期：
附件三：洁净区微生物监测记录（表4）

小结与评价：

分析人/日期：

6.3. 甲醛消毒方法及效果测试
确认目的：
确认采用的规定甲醛消毒方法，能杀灭微生物至安全水平。
测试工具：
枯草黑色变种芽孢生物指示剂(ATCC9372)菌片、φ90mm培养碟子、甲醛检测仪
消毒流程：
按SOP-XR-0004洁净室环境消毒（一车间）标准操作规程进行消毒流程如下：
1、打开气化罐，加放规定量的甲醛和注射用水，关闭气化罐；
2、开启蒸气电磁阀并设置3小时，打开气化罐至空调机组的气化管阀（顶阀）；
3、、切换空调机组为消毒模式；
4、加热气化3小时后，关闭空调，闷熏7小时。
5、置换新风循环通风2小时。
确认方法：
1、生物挑战性测试
1.1、消毒开始前，取枯草黑色变种芽孢生物指示剂(ATCC9372)菌片，将菌片取出，置于培养皿内，每个培养皿内放置1片，然后将培养皿放置于洁净室地面中央。按每个系统放置不少于3个，其中1个放置于系统末端所在房间（注：送风管末端，消毒时间相对较短，换气次数小，属最差条件），另2个放置主要操作房间。建立采样点布置表如下：
采样点布置表
车间
区域
洁净级别
采样房间/房号
采样说明

1车间
JK2-2洗瓶区

D级
清洗器具/210608
系统末端（最差条件）
洗瓶/210610
主要操作室
走廊/210606
主要操作室
JK2-3配料区

C级
洗衣/211016
系统末端（最差条件）
稀配/211013
主要操作室
浓配/211012
主要操作室
JK2-1灌封区

A/B级
器具存放/211309
系统末端（最差条件）
灌封/211308
主要操作室
手消毒/211307
主要操作室
1.2、消毒完成后盖好盖子取出，以无菌技术接种于培养液内，37℃培养48小时，并设置1支未经消毒菌片做阳性对照。阳性对照培养液应变浑浊，颜色有红变黄，以“+”表示。
1.3、消毒菌片培养液应澄清，颜色不变，继续培养至7天，应仍无菌生长，以“-”表示。
2、甲醛残留测试
各洁净环境中暴露于环境中的设备设施均为非直接接触药品的设备，验证中不需对设备表面检测甲醛残留，仅检测环境空气中的甲醛残留，以确认经置换后洁净区环境内甲醛残留。
采用甲醛检测仪，待消毒程序全部结束后，进入被消毒区。抽取不少于3个房间进行检测，检查房间与采样点布置房间同。

按受标准：
1、阳性对照培养液应变浑浊，颜色有红变黄，以“+”表示。消毒菌片培养液应澄清，颜色不变，继续培养至7天，应仍无菌生长，以“-”表示。
2、被测房间空气中甲醛含量均应≤0.08mg/m3。（注甲醛浓度换算1ppm≈1.3mg/m3）

测试结果：
甲醛消毒效果确认
项目
接受标准
检查结果
是否
接受？

甲醛消毒方法
与规定一致。

是□否□
挑战性测试
阳性对照培养液显阳性；消毒菌片培养液应澄清

是□否□
环境残留检测
甲醛含量≤0.08mg/m3

是□否□
确认人/日期：
附件三、甲醛消毒记录（表5）；挑战性测试记录（表6）；残留检测记录（表7）

小结与评价：

分析人/日期：
7. 附件
编号
内容
一
方案培训签到表
二
测试用仪器校准书
三
臭氧消毒记录（表1）
臭氧浓度监测记录（表2）
挑战性测试记录（表3）
洁净区微生物监测记录（表4）
甲醛消毒记录（表5）
挑战性测试记录（表6）
残留检测记录（表7）
8. 验证总结
总结项目
总结内容
偏差调查

验证结论

评价与建议

备注

再验证年月