响应面优化乳杆菌菌株产共轭亚油酸的工艺研究.doc

响应面优化乳杆菌PC-3菌株产共轭亚油酸的工艺研究

摘 要：以共轭亚油酸(CLA)转化率为考察指标，研究乳杆菌PC-3菌株转化生产CLA的发酵工艺。在单因素实验中考察培养基种类、乳糖与硫酸铵添加量比、菌液接种量、培养时间、亚油酸添加量、吐温-80添加量对CLA
转化率影响的基础上，采用三因素三水平响应面实验设计优化乳杆菌PC-3菌株产共轭亚油酸的工艺条件。结果表白：乳杆菌PC-3菌株产共轭亚油酸的较佳条件为：诱导培养基为MRS培养基、乳糖与硫酸铵添加量比3:2
、接种量3.0%、培养时间43.0h、亚油酸(LA)添加量(体积分数)1.30‰、乳化剂吐温-80添加量2.00g/L，此条件下CLA转化率达成6.87%，理论值可达6.96%，实验值与理论预测值的相对误差为1.29%。

关键词：共轭亚油酸；乳杆菌PC-3；响应面分析法；优化

Optimization of Medium Composition and Culture Conditions for Conversion of Linoleic Acid to
Conjugated Linoleic Acid by Lactobacillus PC-3

Abstract
：Themediumcompositionandcultureconditionsforconversionoflinoleicacid(LA)toconjugatedlinoleicacid
(CLA)by
Lactobacillus
PC-3wereoptimizedbyresponsesurfacemethodologytoobtainmaximumconversionefficiencyof
CLA.Culturemediumtype,lactose/ammoniumsulfateconcentrationratio,inoculumsamount,culturetime,LAconcentration
andTween-80concentrationwereinvestigatedbyone-factor-at-a-timeexperiments.Athree-variable,three-levelresponse
surfacedesignwasusedtooptimizeinoculumamount,culturetimeandLAconcentration.Theresultsshowedthattheoptimal
conversionconditionsofLAwasMRSmedium,inoculumsamountof3.0%,culturetimeof43.0h,LAconcentrationof1.30
‰
andTween-80concentrationof2.00g/L.Undertheoptimizedconditions,theexperimentalconversionefficiencyofCLAwas
6.87% compared to 6.96% from theoretical predictions, showing a relative error of 1.29% between both.
Key words
：conjugated linoleic acid；
Lactobacillus
PC-3；response surface methodology；optimization
中图分类号：
Q815
文献标志码：
A 文章编号：1002-6630(2023)19-0213-06
doi:10.7506/spkx1002-4
收稿日期：2023-07-30
基金项目：安徽省年度重点科研项目()
作者简介：章立新(1987—)，女，硕士研究生，研究方向为食品生物技术。E-mail：
*通信作者：王武(1968—)，男，副专家，硕士，研究方向为农产品生物化工。E-mail：
共轭亚油酸
(conjugatedlinoleicacid
，
CLA)
是由必需
脂肪酸中的亚油酸
(linoleic acid
，
LA)
衍生的，是具有共
轭双键的
18
碳原子的不饱和脂肪酸的多种位置和几何异
构体的总称
[1]
。研究发现
[2-3]
，c
9,
t
11-CLA
和t
10,
c
12-CLA
具有增强免疫调节、抗动脉粥样硬化、克制癌症、减
肥、抗氧化等生理功能及保健作用，同时，
CLA
还具有
改善骨组织代谢、调节血糖
[4]
等功效。目前，
CLA
重要由
化学法和生物法合成得到，化学合成法的产物异构体众
多，成分复杂，分离提纯困难，制约了其在食品医药领
域的应用，也导致
CLA
单体在该领域处在垄断地位
[5]
。生
物合成法因其反映条件温和，产物成分较单一，在食品
医药领域展现出了良好的应用潜力。
目前，用来生物合成
CLA
的微生物重要有丁酸弧
菌
(
Butyrivibrio
)
、丙酸杆菌
(
Propionibacterium
)
、乳酸杆
菌
(
Lactobacillus
)
等，这些菌株均可经诱导产亚油酸异
构酶，转化生产具有生物活性的
CLA
。但丁酸弧菌需要
严格厌氧培养，合成的异构体种类较复杂，应用受到限
制；而乳酸菌系益生菌，且酶的作用位点在脂肪酸的c
12
双键上，能把
LA
转化为c
9,
t
11-CLA
，产物可直接从细胞
培养液中提取
[6]
，其发酵条件温和、易控制，生产设备简214 2023, Vol.34, No.19 食品科学 ※生物工程
单，具有工程化的应用潜力，筛选较高的
CLA
转化率的
乳酸菌属菌株仍是当前的研究热点。
PC-3
菌株系从黄瓜泡菜、萝卜泡菜、豇豆泡菜等环
境中筛选出，能转化亚油酸为具有生理活性的共轭亚油
酸
(
c
9,
t
11-CLA
和t
10,
c
12-CLA)
，经形态学、生理生化实
验及
16S rDNA
序列分析，结合气
-
质联用仪检测方法，鉴
定
PC-3
菌株为乳杆菌属，该菌株能转化
LA
为具有生理活
性的
CLA
。本实验以该菌株为研究对象，优化其发酵生产
CLA
的工艺条件。该工艺条件易实行、易实现工业化。
1 材料与方法
1.1
材料、试剂与仪器
1.1.1
菌种与培养基
乳杆菌
PC-3
，自黄瓜泡菜、萝卜泡菜、豇豆泡菜等
环境中分离出。
MRS
培养基，
121
℃灭菌
20min
；脱脂乳培养基
(12g/100mL)
，
115
℃灭菌
15min
。
1.1.2
试剂
亚油酸
C
18:2
(LA
含量
(95
±
1)%
，酸值＞
190mgKOH/g
，
水分含量≤
0.1%)
安庆市中创生物工程有限公司；共
轭亚油酸
(CLA
含量≥
99%)
、
CLA
甲酯
(
≥
99%)
美国
Sigma
公司；c
9,
t
11-CLA(
含量＞
90%)
、t
10,
c
12-CLA(
含
量＞
90%) Nucheckprep
公司；正己烷 江苏强盛功能
化学股份有限公司；脱脂奶粉
(
脂肪含量≤
1.5g/100g
，优质蛋
白含量≥
32g/100g)
内蒙古伊利实业集团股份有限公司。
1.1.3
仪器与设备
SW-CJ-1F
超净工作台 苏净集团安泰公司；
HQ45Z
恒温摇床 中国科学院武汉科学仪器厂；
CT14RD
台式高速冷冻离心机 上海天美生化仪器设
备工程有限公司；
CP-Sil 88
色谱柱
(100m×0.25mm
，
0.20
μ
m)
美国
Varian
公司；
QP-2023
气相色谱
-
质谱联用
仪 日本岛津公司。
1.2 CLA
的测定及标准曲线制定
1.2.1 GC-MS
检测条件
[7]
气
-
质联用仪
CP-Sil 88
色谱柱
(100m×0.25mm
，
0.20
μ
m)
，升温程序为
70℃
维持
10min
，以
5℃/min
速率
升温至
170℃
，维持
15min
，再以
2℃/min
升温至
190℃
，
1℃/min
速率升温至
210℃
，维持
20min
。进样口温度为
220℃，检测器温度为220℃；柱前压为182.2kPa
，柱流
速为
0.8mL/min
；氢气流速为
50.0mL/min
，空气流速为
400.0mL/min
；分流比为
1:30
；进样量为
1
μ
L
。采用电子
电离源
(EI)
，离子阱温度为
250℃
，连接口温度为
220℃，
采用全离子扫描方式，扫描质量(
m
/
z
)
范围为
100
～
350
。
1.2.2 CLA
标准曲线的制定
吸取
200
μ
L
的
CLA
甲酯标准样品，正己烷定容于
25mL
的容量瓶，配制为
8
μ
L/mL
，分别移取
0
、
0.1
、
0.2
、
0.3
、
0.4
、
0.5
、
0.6mL
定容至
1mL
，转移至
7
个气相色谱
自动进样瓶中，进行
GC-MS
分析。并以
CLA
的添加量
为横坐标
(
x，μ
L/mL)
，峰面积为纵坐标
(
y，
×10
4
)
，建
立
CLA
气相色谱标准曲线，得出回归方程y
=3.0246
x－
0.0604(
R
2
=0.9989)
，线性相关范围
0
～
4.8
μ
L/mL
。
1.3 CLA
转化率的测定
1.3.1
诱导产酶与发酵培养
菌株接种于
MRS
液体培养基活化
2
次后，以体积分数
2.5%
的接种量接种乳杆菌
PC-3
菌株于添加有
1.50
‰亚油
酸的
MRS
液体培养基中，诱导菌株产亚油酸异构酶
(
其转
化
LA
为
CLA)
[8-10]
，
37
℃恒温
120r/min
摇床培养
36h
，获得
具有共轭亚油酸异构酶的菌细胞。再次转接菌株，进行
发酵产
CLA
的优化实验。
1.3.2
分离萃取
发酵后的培养液经
4℃
、
6000r/min
离心
10min
，取
发酵液。采用正己烷萃取发酵液，静置，收集上面的正
己烷层。在正己烷溶液中加入无水硫酸钠吸水干燥，于
30℃旋转蒸发，去除有机溶剂，
得脂肪酸提取物收集在
试管中，备用。
1.3.3
脂肪酸甲酯的制备
加入
25
μ
L
的脂肪酸提取物和
1mL
的
2% H
2
SO
4
甲醇溶
液于试管中，在
55℃
条件下进行甲酯化
(10min)
，随后用
正己烷萃取，蒸馏水洗涤
2
次，静置，取上层待测。
由
CLA
标准曲线得
CLA
含量，再根据底物
LA
的添加
量计算出
CLA
的转化率
(
每个水平实验
3
次
)
。
转化率
/%= ×100
CLA
含
量/(
μ
L/mL)
LA
添加
量/(
μ
L/mL)
1.4
单因素及响应面实验
以
CLA
的转化率为响应指标，拟定较适的发酵培养
基
(MRS
液体培养基与脱脂乳培养基
)
，考察乳糖与硫酸
铵添加量比、菌液接种量、培养时间、底物
LA
添加量、
乳化剂吐温
-80
的添加量对
CLA
转化率的影响。
1.4.1
发酵培养基的种类对
CLA
转化率的影响
MRS
液体培养基和脱脂乳培养基都可以作为菌株的
发酵培养基，以乳杆菌
PC-3
菌株为研究对象，活化
2
次后
转接于这两种培养基。亚油酸添加量为
1.50
‰，菌液接种
量为
2.5%
，混匀后于
37
℃、
120r/min
摇床培养
24h
。然后
正己烷萃取发酵液，测得菌体对
CLA
的转化率。
1.4.2
乳糖与硫酸铵的添加量比对
CLA
转化率的影响
发酵培养基中乳糖和硫酸铵的添加量比分别为
2:1
、
3:2
、
1:1
、
2:3
、
1:2(
其中乳糖添加量依次分别为
0.20
、
0.18
、
0.15
、
0.12
、
0.10g/100mL)
，亚油酸添加量为
1.50
‰，
经
LA
诱导过的菌液接种量为
2.5%
，
37
℃、
120r/min
摇床培
养
24h
。以不添加乳糖和硫酸铵的发酵培养基作为参照，
考察
CLA
的转化率情况。※生物工程 食品科学 2023, Vol.34, No.19 215
1.4.3
菌液接种量对
CLA
转化率的影响
乳糖和硫酸铵的添加量比为
3:2
，亚油酸添加量
为
1.50
‰，经
LA
诱导过的菌液接种量为
0.5%
、
1.5%
、
2.5%
、
3.5%
、
4.5%
的发酵条件下，
37
℃、
120r/min
摇床
培养
24h
后分别测得
CLA
的转化率。
1.4.4
培养时间对
CLA
转化率的影响
乳糖和硫酸铵的添加量比为
3:2
，亚油酸添加量为
1.50
‰，经
LA
诱导过的菌液接种量为
2.5%
，发酵培养时
间分别为
12
、
24
、
36
、
48
、
60h
，
37
℃、
120r/min
摇床培
养。然后测得
CLA
的转化率。
1.4.5
底物亚油酸的添加量对
CLA
转化率的影响
考察亚油酸添加量分别为0.50
‰
、1.00
‰
、1.50
‰
、
2.00
‰
、2.50
‰
对
菌体生长的影响。乳糖和硫酸铵的添加
量比为
3:2
，经
LA
诱导过的菌液接种量为
2.5%
，
37
℃、
120r/min
摇床培养
36h
。
1.4.6
乳化剂吐温
-80
的添加量对
CLA
转化率的影响
底物亚油酸添加量为
1.50
‰，其他条件相同的情况
下，考察吐温
-80
的添加量分别为
0
、
0.50
、
1.00
、
1.50
、
2.00g/L
对
CLA
转化率的影响。
1.4.7
响应面实验设计
通过
Excel
软件进行单因素方差分析。在此基础上，
选出具有显著性差异的
3
个影响因素
(
接种量、培养时间、
亚油酸添加量
)
进行响应面实验。按
Box-Behnken
中心组合
设计原理，拟定
3
个影响因素水平的中心点，取
3
个水平。
2 结果与分析
2.1 GC-MS
检测结果
0.0
0.5
1.0
1.5
50 55 60 65 70 75
LA
a
b
A
/min
V(m
01
7
)
100
75
50
25
0
50 100 150 200 250 300
O
O
O
B
m/z
%/
67
81
55
59
41
38
44
95
93
109
123
135
150
164
178
207
220
234
263
281
294
313
100
75
50
25
0
50 100 150 200 250 300
O
O
C
m/z
%/
67
81
55
59
41
38
44
95
93
109
123
135
150
164
178
207
220
234
263
281
294
313
A.
气相色谱图；
B. a
峰的质谱图；
C. b
峰的质谱图。
图 1 气相色谱图与质谱图
Fig.1 GC-MS analysis of CLA sample
由图1可知，
a
峰和
b
峰能较好的分离开
(图1A)
，出
峰时间分别为
65.905min
和
66.551min
，与c
9,
t
11-CLA
甲
酯、t
10,
c
12-CLA
甲酯的出峰时间相吻合，并具有分子离
子峰m
/
z为
294(图1B、C)
。说明
a
峰为c
9,
t
11-CLA
，
b
峰为
t
10,
c
12-CLA
[11-13]
，乳杆菌
PC-3
菌株能将
LA
转化为两种具
有生物活性的
CLA
异构体c
9,
t
11-CLA
和t
10,
c
12-CLA
。
2.2
发酵培养基的种类对
CLA
转化率的影响
0
1
2
3
4
5
6
7
MRS
LAC
%/
图 2 两种培养基对CLA转化率的影响
Fig.2 Effect of culture media on the conversion efficiency of CLA
由图
2
可知，转接经
LA
诱导后的菌株进行发酵培养
的
CLA
转化率要高于直接进行诱导培养的，证实了乳杆
菌
PC-3
菌株产生亚油酸异构酶转化
LA
为
CLA
，减弱
LA
对
其生长的克制作用。
MRS
培养基中的
CLA
转化率高于脱
脂乳培养基中的
CLA
转化率，说明
MRS
培养基是转化
LA
为
CLA
的较适宜培养基。
2.3
乳糖与硫酸铵的添加量比对
CLA
转化率的影响
1
2
3
4
5
6
7
0:0 2:1 3:2 1:1 2:3 1:2
LAC
%/
图 3 乳糖与硫酸铵的添加量比对CLA转化率的影响
Fig.3 Effect of lactose/ammonium sulfate concentration ratio on the
conversion efficiency of CLA216 2023, Vol.34, No.19 食品科学 ※生物工程
由图
3
可知，乳糖与硫酸铵添加量比对
CLA
转化率
的影响不显著
(
P＞
0.05)
。乳糖作为
PC-3
菌株产
CLA
的碳
源，硫酸铵作为氮源
[14]
，与牛肉膏结合使用，影响菌株
的生长。当乳糖与硫酸铵的添加量比为
3:2
时，
CLA
转化
率是最高的，从而选出较适宜产
CLA
的乳糖与硫酸铵添
加量比。
2.4
菌液接种量对
CLA
转化率的影响
1
2
3
4
5
6
7
0.5 1.5 2.5 3.5 4.5
/%
LAC
%/
图 4 菌液接种量对CLA转化率的影响
Fig.4 Effect of inoculum amount on the conversion efficiency of CLA
由图
4
可知，菌液接种量对
CLA
转化率的影响显著
(
P＜
0.05)
。转化
LA
为
CLA
重要是由亚油酸异构酶起作
用，增长接种量可以提高酶量，对产
CLA
有利。而接种
量过大，会影响到菌株生长，再加上培养基中营养成分的
减少，克制菌株的新陈代谢，导致亚油酸异构酶活性降
低。故当菌液接种量为
2.5%
时，
CLA
转化率是最高的。
2.5
培养时间对
CLA
转化率的影响
/h
LAC
%/
1
2
3
4
5
6
7
12 24 36 48 60
图 5 培养时间对CLA转化率的影响
Fig.5 Effect of culture time on the conversion efficiency of CLA
由图
5
可知，培养时间对
CLA
转化率的影响显著
(
P＜
0.05)
。随着培养时间的增长，
CLA
转化率增长，
而当培养时间为
36h
时，
CLA
转化率达成最高，继续
延长培养时间，
CLA
转化率下降，也许是菌株代谢物
及生长环境
pH
值的改变影响了亚油酸异构酶的酶反映
体系和酶活力。
2.6
底物亚油酸的添加量对
CLA
转化率的影响
由图
6
可知，亚油酸添加量对
CLA
转化率的影响显
著
(
P＜
0.05)
。共轭亚油酸的转化需要亚油酸的诱导，则
直接添加亚油酸比较好
[15]
。
Dawson
等
[16]
认为，细菌为了
减除
LA
对菌细胞生长的毒害，产生亚油酸异构酶来转化
LA
为
CLA
，但
LA
添加量加大，对亚油酸异构酶有克制作
用，减少酶活性，使得
CLA
转化率下降。当
LA
的添加量
为
1.50
‰时，
CLA
转化率是最高的。
2
3
4
5
6
7
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
LA /‰
LAC
%/
图 6 亚油酸添加量对CLA转化率的影响
Fig.6 Effect of LA concentration on the conversion efficiency of CLA
2.7
乳化剂吐温
-80
添加量对
CLA
转化率的影响
0
1
2
3
4
5
6
7
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
-80 /(g/L)
LAC
%/
图 7 吐温-80添加量对CLA转化率的影响
Fig.7 EffectofTween-80concentrationontheconversionefficiencyofCLA
由图
7
可知，吐温
-80
添加量对
CLA
转化率的影响不
显著
(
P＞
0.05)
。使用不同种类的乳化剂，可影响
CLA
的
转化率，吐温
-80
作为乳化剂对
CLA
转化率影响最大，则选
用了吐温
-80
作为乳化剂
[17]
。与未使用吐温
-80
相比，
CLA
转
化率有所增大。故拟定吐温
-80
的添加量为
2.0g/L
。
2.8
响应面实验结果
表 1 Box-Behnken设计方案及结果
Table 1 Box-Behnken design and results
实验
号
因素
CLA
转化率
/%
A接种量
/%
B培养时间
/h
C亚油酸添加量
/
‰ 实验值 预测值
1
－
1 (2
.
5)
－
1 (36) 0 (1.25) 4.82 4.77
2 0 (3.0) 0 (42) 0 6.93 6.88
3 1 (3.5) 0
－
1 (1.00) 5.37 5.42
4 1
－
1 0 5.04 4.95
5 0 0 0 6.78 6.88
6 0 0 0 6.88 6.88
7
－
1 0
－
1 4.86 4.86
8 0
－
1 1 (1.50) 5.13 5.22
9 0 1 (48) 1 5.60 5.56
10 0 1
－
1 5.43 5.34
11 1 1 0 5.89 5.94
12 0 0 0 7.01 6.88
13 0
－
1
－
1 4.37 4.41
14
－
1 1 0 4.96 5.05
15 0 0 0 6.82 6.88
16
－
1 0 1 5.44 5.40
17 1 0 1 5.91 5.91※生物工程 食品科学 2023, Vol.34, No.19 217
以
CLA
转化率为实验指标，将
3
个影响因素
(
接种
量、培养时间、亚油酸添加量
)
进行响应面设计。实验设
计与结果见表
1
，方差分析结果见表
2
。
表 2 CLA转化率响应值的方差分析
Table 2 Analysis of variance for the fitted regression model
变异来源 平方和 自由度
均方 F P＝
Prob
＞F
模型
11.85 9 1.32 118.98**
＜
0.0001
A
0.57 1 0.57 51.23** 0.0002
B
0.79 1 0.79 71.70**
＜
0.0001
C
0.53 1 0.53 47.45** 0.0002
AB
0.13 1 0.13 11.38** 0.0119
AC
4.00
×
10
-4
1 4.00
×
10
-4
0.036 0.8546
BC
0.087 1 0.087 7.86* 0.0264
A
2
2.19 1 2.19 198.26
＜
0.0001
B
2
4.08 1 4.08 368.63
＜
0.0001
C
2
2.48 1 2.48 223.74
＜
0.0001
一次项
1.89 3 0.63 56.79
交互项
0.217 3 0.0725 6.43
二次项
8.75 3 2.917 263.54
剩余
0.077 7 0.011
纯误差
0.033 4 8.23
×
10
-3
失拟项
0.045 3 0.015 1.81 0.2858
总和
11.93 16
注：F
0.01(1,9)
=10.56
，F
0.05(1,9)
=5.12
，F
0.01(3,7)
=8.45
；
**
.
P ＜
0.01
为极显著差
异 ；
*
.
P ＜
0.05
为显著差异。
由表
2
可知，该模型的F值为
118.98
，P＜
0.0001
说明该模型是极其显著的。而失拟项的F值为
1.81
，
P＝
0.2858
＞
0.05
，表白模型失拟不显著。且该模型的
R
2
=0.9795
，R
2
Adj
=0.9532
，R
2
Pred
=0.9359
，说明该模型预测
值与实验值拟合得很好，进一步证实
3
个因素水平设计合
理，拟合方程能较好地说明情况。
7.5
7.0
6.5
6.0
5.5
5.0
4.5
48
45
42
39
36 2.5
2.7
2.9
3.1
3.3
3.5
B
/
h A
/%
C
L
A
/
%
7.5
7.0
6.5
6.0
5.5
5.0
4.5
1.5
1.4
1.3
1.2
1.1
1.0 2.5
2.7
2.9
3.1
3.3
3.5
C
亚油酸添加量
/‰
A
/%
C
L
A
/
%
8
7
6
5
4
1.5
1.4
1.3
1.2
1.1
1.0 36
39
42
45
48
C
亚油酸
/‰
B
/h
C
L
A
/
%
图 8 各因素交互作用对CLA转化率影响的响应面曲线图
Fig.8 Response surface plots showing the interactive effects of
culturetime,inoculumamountandLAconcentrationontheconversion
efficiency of CLA
由
Design-Expert.V.8.0.5b
软件分析响应面实验设计
与表
1
结果得出响应面图，结果见图
8
，显示了接种量、
培养时间、
LA
添加量三因素之间的互相作用。由表
2
可
知，接种量与培养时间、培养时间与
LA
添加量之间的交
互作用显著
(
P＜
0.05)
，接种量与
LA
添加量交互作用不显
著
(
P＞
0.05)
。采用手动优化的方式优化回归模型，根据
方差分析表
2
，剔除差异不显著的因素交互项AC，得到
CLA
转化率关于接种量、培养时间、
LA
添加量的优化后
的回归模型：Y
=6.88＋0.27
A
＋0.32
B
＋0.26
C
＋0.18
AB－
0.15
BC－
0.72
A
2
－
0.98
B
2
－
0.77
C
2
。
进一步通过软件分析得出，
CLA
转化率预测值达
最高值
6.96%
时，菌液接种量
3.1%
、培养时间
43.0h
、
LA
添加量
1.29
‰。为方便实验操作，设定菌液接种量为
3.0%
、培养时间为
43.0h
、
LA
添加量为
1.30
‰，进行验证
实验，
CLA
转化率为
6.87%
，与理论预测值
6.96%
基本吻
合，实验值与理论预测值的相对误差为
1.29%
，表白该模
型是有效的。
3 结 论
本实验探讨了经
LA
诱导后的乳杆菌
PC-3
菌细胞发酵
产两种活性
CLA
异构体的优化条件，采用单因素实验和
响应面实验设计方法，表白发酵的重要影响因素是培养
时间、菌液接种量和
LA
添加量，确立了较佳发酵条件：
诱导培养基为
MRS
培养基、培养时间为
43.0h
、菌液接种
量为
3.0%
、
LA
添加量为
1.30
‰、乳化剂吐温
-80
添加量为
2.00g/L
、乳糖与硫酸铵添加量比为
3:2
，经
LA
诱导后的
乳杆菌
PC-3
菌细胞产c
9,
t
11-CLA
和t
10,
c
12-CLA
的转化率
可达
6.87%
。相对于菌株直接发酵和亚油酸异构酶转化方
法，该优化方法具有成本较低、发酵条件易实行、易实
现工业化等特点，值得开发运用。218 2023, Vol.34, No.19 食品科学 ※生物工程
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