1、思索题思索题 1.克隆动物是指？克隆动物是指？学学.科科.网网 zxxk.zxxk.组卷网组卷网 2.核移植普通操作过程？核移植普通操作过程？第1页2.2.22.2.2学学.科科.网网 zxxk.zxxk.组卷网组卷网 细胞融合与单克隆抗体细胞融合与单克隆抗体第2页1 1、概念：、概念：一、动物细胞融合一、动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞过程。合形成一个细胞过程。形成细胞称杂交细胞形成细胞称杂交细胞第3页2 2、诱导方法：、诱导方法：物理（离心、振动、电激）、物理（离心、振动、电激）、化学（聚乙二醇）、化学（聚乙二醇）、生物
2、（灭活仙台病毒）生物（灭活仙台病毒）灭活病毒诱导细胞融合原理是什么？灭活灭活病毒诱导细胞融合原理是什么？灭活含义是什么？含义是什么？（52页资料）页资料）学学.科科.网网 zxxk.zxxk.组卷网组卷网 细胞细胞A A细胞细胞B B杂交细胞杂交细胞灭活病毒灭活病毒物理法物理法化学法化学法第4页仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线丧失感染性丧失感染性（不感染细胞）（不感染细胞）保留融合活性保留融合活性（诱导细胞融合）（诱导细胞融合）第5页3 3、过程：、过程：动物细胞融合成功标动物细胞融合成功标志是什么？志是什么？为何要用灭活病毒？为何要用灭活病毒？此时细胞核型特点？此时细胞核型特点？学学.科科.网网
3、 zxxk.zxxk.组卷网组卷网 第6页4 4、植物体细胞杂交和动物细胞融合比较、植物体细胞杂交和动物细胞融合比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞融合方法诱导方法诱导方法融合成功标志用途用途第7页4 4、植物体细胞杂交和动物细胞融合比较、植物体细胞杂交和动物细胞融合比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞膜流动性学.科.网 zxxk.组卷网 细胞融合方法去除细胞壁后诱导原去除细胞壁后诱导原生质体融合生质体融合使细胞分散后诱导使细胞分散后诱导细胞融合细胞融合诱导方法诱导方
4、法物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活病毒融合成功标志生出新细胞壁生出新细胞壁核融合核融合用途用途取得杂种植株主要制备单克隆抗体主要制备单克隆抗体第8页5 5、细胞融合技术应用、细胞融合技术应用 细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育及制备单克隆抗体。新品种培育及制备单克隆抗体。第9页二、单克隆抗体二、单克隆抗体单个单个细胞细胞无性无性繁殖繁殖抗体抗体什么是抗体？抗体用在医学上有何作用？什么是抗体？抗体用在医学上有何作用？传统方法怎样得到抗体？传统方法怎样得到抗体？抗体存在于生物体什么部位
5、？抗体存在于生物体什么部位？抗体是机体受抗原刺激后产生、并能与该抗原抗体是机体受抗原刺激后产生、并能与该抗原发生特异性结合含有免疫功效球蛋白。发生特异性结合含有免疫功效球蛋白。血清、组织液及外分泌液中。血清、组织液及外分泌液中。重复向动物体内注射抗原，从血清中分离抗体。重复向动物体内注射抗原，从血清中分离抗体。血清血清第10页怎样产生大量单克隆抗体？怎样产生大量单克隆抗体？这么得到抗体在产量怎样？纯度高吗？特异性这么得到抗体在产量怎样？纯度高吗？特异性怎样？怎样？产量低、纯度低、特异性差。产量低、纯度低、特异性差。什么细胞能产生抗体？每一个这么细胞什么细胞能产生抗体？每一个这么细胞能产生几个抗
6、体？能产生几个抗体？第11页免疫小鼠免疫小鼠培养骨髓培养骨髓瘤细胞瘤细胞融融合合骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞B B淋巴淋巴细胞细胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白融合后可能什么融合后可能什么类型细胞？怎样类型细胞？怎样筛选？筛选？选择培养选择培养基上培养基上培养各种杂交细胞各种杂交细胞怎样筛选出能怎样筛选出能产生特定抗体产生特定抗体细胞？细胞？1.单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程第12页专一抗体专一抗体检验阳性检验阳性专一抗体检专一抗体检验阳性验阳性克隆杂交细胞克隆杂交细胞分开不一样杂交细胞，克分开不一样杂交细胞，克隆专一抗体检验阳性细胞隆专一抗体检验阳性细胞第13页有限稀释法有限稀释法计数103
7、/ml102/ml10/ml0.5-2/孔杂交瘤杂交瘤细胞细胞培养后取上培养后取上清液（含抗清液（含抗体）做抗原体）做抗原抗体检测抗体检测第14页挑选能产生特定抗体细胞后继续培养，以取挑选能产生特定抗体细胞后继续培养，以取得足够数量细胞后，怎样才能得到大量单克得足够数量细胞后，怎样才能得到大量单克隆抗体？隆抗体？第15页注射到小注射到小鼠体内鼠体内体外体外培养培养第16页第第1 1次筛选次筛选关关键键步步骤骤第第2 2次筛选次筛选第17页2 2、单克隆抗体特点、单克隆抗体特点特异性强，灵敏度高，化学性质单一。特异性强，灵敏度高，化学性质单一。3 3、应用：、应用：（1 1）临床诊疗）临床诊疗 准确、高效、简易、快速。准确、高效、简易、快速。（2 2）用于治疗疾病和运载药品）用于治疗疾病和运载药品 比如比如“生物导弹生物导弹”第18页能提升良种家畜繁殖能力细胞工程技术是能提升良种家畜繁殖能力细胞工程技术是组织培养细胞融合组织培养细胞融合胚胎移植细胞核移植胚胎移植细胞核移植 动物细胞融合和植物体细胞杂交比较中，正确动物细胞融合和植物体细胞杂交比较中，正确是是诱导融合方法完全相同诱导融合方法完全相同所用技术伎俩完全相同所用技术伎俩完全相同所采取原理完全相同所采取原理完全相同都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 第19页
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