植物细胞组织培养园艺专家讲座.pptx

3.不定芽发生型不定芽发生型外植体类型：各种外植体外植体类型：各种外植体新生芽起源：外植体细胞脱分化后再分新生芽起源：外植体细胞脱分化后再分化化植物细胞组织培养园艺专家讲座第1页4.胚状体发生型胚状体发生型外植体类型：各种外植体外植体类型：各种外植体胚状体起源：外植体细胞脱分化后再分胚状体起源：外植体细胞脱分化后再分化化新生苗起源：胚状体萌发新生苗起源：胚状体萌发植物细胞组织培养园艺专家讲座第2页5.原球茎发生型原球茎发生型兰科植物一个繁殖方式兰科植物一个繁殖方式外植体类型：茎尖或腋芽外植体类型：茎尖或腋芽新生苗起源：原球茎萌发新生苗起源：原球茎萌发植物细胞组织培养园艺专家讲座第3页5.2 植物离体快繁程序植物离体快繁程序阶段阶段 繁殖体增殖繁殖体增殖 阶段阶段 芽生根（取得再生植株）芽生根（取得再生植株）阶段阶段 再生植株驯化和移栽再生植株驯化和移栽再生植株判定再生植株判定阶段阶段 初代培养物建立（无菌培养物取得）初代培养物建立（无菌培养物取得）46周周（48周继代一次）周继代一次）植物细胞组织培养园艺专家讲座第4页5.2.1 初代培养物建立初代培养物建立任务：取得无菌外植体并使其在适宜培任务：取得无菌外植体并使其在适宜培养环境中以某种器官发生类型进行增殖。养环境中以某种器官发生类型进行增殖。植物细胞组织培养园艺专家讲座第5页5.2.1.1 5.2.1.1 母本植株和外植体选取母本植株和外植体选取母本植株选取：母本植株选取：性状稳定、生长健壮、无病虫害成年植性状稳定、生长健壮、无病虫害成年植株。株。田间污染严重母本植株处理：田间污染严重母本植株处理：修剪后进行室内栽培，喷洒杀虫剂和杀修剪后进行室内栽培，喷洒杀虫剂和杀菌剂，待长出新枝后进行取材。菌剂，待长出新枝后进行取材。植物细胞组织培养园艺专家讲座第6页外植体选取：外植体选取：木本植物和较大草本植物多采取带木本植物和较大草本植物多采取带节茎段、顶芽或腋芽；易繁殖、矮小或节茎段、顶芽或腋芽；易繁殖、矮小或具短缩茎草本则多采取叶片、叶柄、花具短缩茎草本则多采取叶片、叶柄、花茎、花瓣等。茎、花瓣等。植物细胞组织培养园艺专家讲座第7页5.2.1.2 无菌外植体取得无菌外植体取得外植体灭菌外植体灭菌每瓶接种一个外植体每瓶接种一个外植体基本培养基基本培养基培养并检测污染情况培养并检测污染情况无污染并成活外植体无污染并成活外植体10天以上天以上接种接种植物细胞组织培养园艺专家讲座第8页5.2.1.3 无菌外植体开启生长培养无菌外植体开启生长培养 外植体开启生长方式：外植体开启生长方式：腋芽被刺激后进行生长腋芽被刺激后进行生长外植体切口处产生不定芽外植体切口处产生不定芽外植体切口处产生愈伤组织外植体切口处产生愈伤组织植物细胞组织培养园艺专家讲座第9页 外植体开启生长培养基：外植体开启生长培养基：生长素和细胞分裂素浓度最主要；生长素和细胞分裂素浓度最主要；刺激腋芽萌发时，细胞分裂素适宜浓度为刺激腋芽萌发时，细胞分裂素适宜浓度为0.51.0mg/L，同时配合使用低浓度生长素（，同时配合使用低浓度生长素（0.010.1mg/L）效果更加好；）效果更加好；诱导不定芽形成时，需较高浓度细胞分裂素；诱导不定芽形成时，需较高浓度细胞分裂素；诱导愈伤组织形成，需增加生长素浓度并配合诱导愈伤组织形成，需增加生长素浓度并配合一定浓度细胞分裂素。一定浓度细胞分裂素。植物细胞组织培养园艺专家讲座第10页5.2.1.4 初代培养物建立技术关键初代培养物建立技术关键经过灭菌关经过灭菌关筛选出有利于初代培养物形成和生长培筛选出有利于初代培养物形成和生长培养基养基植物细胞组织培养园艺专家讲座第11页5.2.2 繁殖体增殖繁殖体增殖任务：对初代培养物进行增殖，使之不停分化产任务：对初代培养物进行增殖，使之不停分化产生新丛生芽、不定芽、原球茎或胚状体。生新丛生芽、不定芽、原球茎或胚状体。植物细胞组织培养园艺专家讲座第12页5.2.2.1 初代培养物继代培养大量增殖初代培养物继代培养大量增殖初代培养取得丛生芽分割成单芽或单芽初代培养取得丛生芽分割成单芽或单芽苗切割成带叶茎段后，转移到新鲜培养苗切割成带叶茎段后，转移到新鲜培养基中继代培养。基中继代培养。植物细胞组织培养园艺专家讲座第13页原球茎丛分割成单个原球茎或单个原球原球茎丛分割成单个原球茎或单个原球茎切割成小块后，转移到新鲜培养基中茎切割成小块后，转移到新鲜培养基中继代培养。继代培养。繁殖体增殖阶段，繁殖体增殖阶段，48周继代一次，依周继代一次，依据生产需要可进行屡次继代，但要预防据生产需要可进行屡次继代，但要预防芽苗衰退。芽苗衰退。植物细胞组织培养园艺专家讲座第14页5.2.2.2 5.2.2.2 增殖培养基增殖培养基用于继代增殖培养培养基，应能使培养用于继代增殖培养培养基，应能使培养物在每次继代培养中产生最大数量有效物在每次继代培养中产生最大数量有效繁殖体。繁殖体。通常，基本培养基与阶段通常，基本培养基与阶段相同，而细相同，而细胞分裂素水平则高于阶段胞分裂素水平则高于阶段。激素最正确浓度应经过试验进行确定。激素最正确浓度应经过试验进行确定。植物细胞组织培养园艺专家讲座第15页5.2.2.3 5.2.2.3 增殖体大小和切割方法增殖体大小和切割方法将初代培养物上取得带有将初代培养物上取得带有2 24 4个茎节芽苗切个茎节芽苗切割成单节茎段。割成单节茎段。茎段垂直插入培养基中，但茎节不能插入培茎段垂直插入培养基中，但茎节不能插入培养基内。也可将其平放于培养基表面。养基内。也可将其平放于培养基表面。切除芽苗初代培养物可进行切分后继续培养切除芽苗初代培养物可进行切分后继续培养诱导芽苗分化形成。诱导芽苗分化形成。如出现顶芽发育而抑制腋芽增殖现象，应将如出现顶芽发育而抑制腋芽增殖现象，应将顶芽切除，用其下部带节茎段增殖培养。顶芽切除，用其下部带节茎段增殖培养。植物细胞组织培养园艺专家讲座第16页5.2.2.4 5.2.2.4 不定芽增殖培养关键不定芽增殖培养关键提升增殖率和增殖系数，用最短时间获取最提升增殖率和增殖系数，用最短时间获取最大数量有效芽苗。大数量有效芽苗。预防玻璃化苗和变异苗产生预防玻璃化苗和变异苗产生5.2.2.5 5.2.2.5 不定芽增殖培养注意问题不定芽增殖培养注意问题驯化现象驯化现象-增殖芽内外源激素累积增殖芽内外源激素累积预防办法预防办法-在继代培养中一定阶段酌情降低在继代培养中一定阶段酌情降低激素浓度水平激素浓度水平植物细胞组织培养园艺专家讲座第17页5.3 不定芽生根不定芽生根此阶段任务：为移栽准备小植株。此阶段任务：为移栽准备小植株。诱导生根可在试管内进行，也可在试管外进诱导生根可在试管内进行，也可在试管外进行。行。植物细胞组织培养园艺专家讲座第18页5.3.1 诱导不定芽根分化和根系形成诱导不定芽根分化和根系形成将继代增殖取得无根芽苗以单芽形式转将继代增殖取得无根芽苗以单芽形式转移到生根培养基或适宜环境中，诱导根移到生根培养基或适宜环境中，诱导根分化和根系形成，最终取得完整小植株。分化和根系形成，最终取得完整小植株。植物细胞组织培养园艺专家讲座第19页5.3.2 试管内诱导根分化技术关键试管内诱导根分化技术关键 调整激素种类和浓度调整激素种类和浓度-在继代增殖在继代增殖培养基基础上培养基基础上多数植物根分化需要适当提升生长素浓多数植物根分化需要适当提升生长素浓度，降低细胞分裂素浓度；度，降低细胞分裂素浓度；有些植物转入仅有低浓度（有些植物转入仅有低浓度（0.10.5mg/L）生长素培养基中即可生根；）生长素培养基中即可生根；有些植物在无激素条件下即可生根。有些植物在无激素条件下即可生根。植物细胞组织培养园艺专家讲座第20页 调整基本培养基营养组成调整基本培养基营养组成普通基本培养基配方与继代增殖培养相同，普通基本培养基配方与继代增殖培养相同，但需降低无机盐浓度（通常只是降低大量元但需降低无机盐浓度（通常只是降低大量元素化合物用量），惯用素化合物用量），惯用1/21/4量；量；也可更换为其它低无机盐浓度培养基。也可更换为其它低无机盐浓度培养基。植物细胞组织培养园艺专家讲座第21页 调整渗透压调整渗透压根分化所需培养基渗透压要低于芽分化根分化所需培养基渗透压要低于芽分化培养基；培养基；降低蔗糖浓度可有效降低培养基渗透压降低蔗糖浓度可有效降低培养基渗透压生根培养基中蔗糖浓度普通为生根培养基中蔗糖浓度普通为1%2%。植物细胞组织培养园艺专家讲座第22页5.3.3 试管外诱导根分化技术关键试管外诱导根分化技术关键 生根基质准备和灭菌生根基质准备和灭菌通惯用珍珠岩：蛭石通惯用珍珠岩：蛭石=2：1配制成混合基质配制成混合基质加入一定量杀菌剂杀死有害微生物加入一定量杀菌剂杀死有害微生物 芽苗生根芽苗生根芽苗先在适宜浓度生长素溶液中快速浸蘸或芽苗先在适宜浓度生长素溶液中快速浸蘸或在含有高浓度生长素培养基中培养在含有高浓度生长素培养基中培养510天，天，然后在温室中插入生根基质中。然后在温室中插入生根基质中。芽苗生根过程管理芽苗生根过程管理经常喷雾，保持高湿度空气环境，同时要调经常喷雾，保持高湿度空气环境，同时要调控温度，适当遮阴，预防强光照射。控温度，适当遮阴，预防强光照射。植物细胞组织培养园艺专家讲座第23页5.4 再生植株驯化移栽再生植株驯化移栽此阶段是试管苗从异养到自养转变阶段，是此阶段是试管苗从异养到自养转变阶段，是一个逐步适应过程。一个逐步适应过程。5.4.1 驯化驯化 标准：标准：逐步过分，逐步适应。逐步过分，逐步适应。驯化步骤：驯化步骤：日光锻炼日光锻炼-晒苗晒苗 湿度锻炼湿度锻炼 驯化操作：驯化操作：出管前一周，在移栽温室中打开瓶口，逐步出管前一周，在移栽温室中打开瓶口，逐步提升光照强度和降低空气相对湿度，使试管提升光照强度和降低空气相对湿度，使试管苗逐步适应外界环境。苗逐步适应外界环境。植物细胞组织培养园艺专家讲座第24页植物细胞组织培养园艺专家讲座第25页5.4.2 移栽移栽用镊子取出试管苗，放入装有清水容器中；用镊子取出试管苗，放入装有清水容器中；洗净试管苗根部附着培养基；洗净试管苗根部附着培养基；将小苗载入预先配制好混合基质中。将小苗载入预先配制好混合基质中。5.4.3 移栽后驯化管理移栽后驯化管理湿度控制湿度控制光控制光控制温度控制温度控制防菌类滋生防菌类滋生植物细胞组织培养园艺专家讲座第26页思索题思索题何谓植物离体快速繁殖技术何谓植物离体快速繁殖技术?植物离体快繁程植物离体快繁程序序?无菌培养物取得无菌培养物取得?无菌无菌外植体开启生长方式外植体开启生长方式?最适合最适合离体快繁方离体快繁方式式?外植体开启生长培养基中最主要成份是外植体开启生长培养基中最主要成份是？刺激腋芽萌发时，细胞分裂素适宜浓度为刺激腋芽萌发时，细胞分裂素适宜浓度为？生长素浓度为？生长素浓度为？诱导不定芽形成时，需较高浓度诱导不定芽形成时，需较高浓度？诱导愈伤组织形成，需增加诱导愈伤组织形成，需增加？浓度并浓度并配合一定浓度配合一定浓度？。植物细胞组织培养园艺专家讲座第27页初代培养物建立技术关键？初代培养物建立技术关键？筛选有利于不定芽分化形成和生长培养基筛选有利于不定芽分化形成和生长培养基筛筛选重点？选重点？初代培养取得丛生芽怎样进行增殖？初代培养取得丛生芽怎样进行增殖？初代培养取得初代培养取得原球茎丛怎样进行增殖？原球茎丛怎样进行增殖？用于继代增殖培养培养基与用于继代增殖培养培养基与阶段阶段培养基有培养基有何异同？何异同？初代培养物上所取得可作为增殖体芽苗大小初代培养物上所取得可作为增殖体芽苗大小?怎样进行切割？如出现顶芽发育而抑制腋芽怎样进行切割？如出现顶芽发育而抑制腋芽增殖现象，应怎样处理？增殖现象，应怎样处理？植物细胞组织培养园艺专家讲座第28页不定芽增殖培养关键？不定芽增殖培养关键？不定芽增殖培养注意问题？不定芽增殖培养注意问题？试管内诱导根分化技术关键？试管内诱导根分化技术关键？试管苗移栽后怎样进行管理？试管苗移栽后怎样进行管理？植物细胞组织培养园艺专家讲座第29页