DB36∕T 1800-2023 灵芝菌种生产技术规程(江西省).pdf

ICS 65.020.20CCS B 30DB36江西省地方标准DB36/T 18002023灵芝菌种生产技术规程Technical regulations for spawn production of Ganoderma lingzhi2023-07-01 发布2024-01-01 实施江西省市场监督管理局发 布DB36/T 18002023I目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14场地环境.25设施设备.26生产技术.27菌种生产档案.4DB36/T 18002023II前言本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江西省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：江西省农业科学院农业应用微生物研究所。本文件主要起草人：胡佳、魏云辉、戴丹、彭新红、孙鹏。DB36/T 180020231灵芝菌种生产技术规程1范围本文件规定了灵芝菌种生产的场地环境、设施设备、生产技术、菌种生产档案。本文件适用于工厂化生产企业或专业合作社生产灵芝母种、原种和栽培种。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 5749生活饮用水卫生标准GB/T 8321（所有部分）农药合理使用准则GB/T 12728食用菌术语NY/T 528食用菌菌种生产技术规程NY/T 1276农药安全使用规范 总则3术语和定义GB/T 12728中确定的术语和定义适用于本文件。3.1灵芝 Ganoderma lingzhi灵芝俗称赤芝、红芝、灵芝草等，是我国传统的名贵中药材，隶属于担子菌门（Basidiomycota）、蘑菇纲（Agaricomycetes）、多孔菌目（Polyporales）、灵芝科（Ganodermataceae）、灵芝属（Ganoderma）。3.2菌种 spawn生长在适宜基质上具有结实性的菌丝纯培养物。包括母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）。3.3母种 stock culture经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，也称为一级种。3.4原种 mother spawnDB36/T 180020232由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称为二级种。3.5栽培种 planting spawn由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种，也称为三级种。4场地环境4.1生产场地选择选择地势平坦、排灌方便、土壤肥沃、通风良好的场所。要求周边环境清洁，无污染源。生产场地应符合NY/T 528的规定。4.2生产用水生产用水应符合GB 5749的规定。5设施设备5.1基本设施具备配料室、装袋室、灭菌室、接种室、培养室、贮藏室等设施。5.2基本设备粉碎机、磅秤、天平、高压灭菌锅或常压灭菌锅、操作台、超净工作台或接种箱、空调、除湿机、培养架、恒温培养箱、冰箱、显微镜等。生产量大的菌种厂还应配备搅拌机、装袋机。6生产技术6.1母种生产6.1.1PDA 培养基称取200g马铃薯切成小块加1000mL水煮沸20min30min，纱布过滤取滤液定容至1000mL，加入20g葡萄糖和15g20g琼脂粉，pH自然。6.1.2分装和灭菌将配制好的PDA培养基分装至18mm180mm或20mm200mm玻璃试管的1/3处。试管口应保持干净，分装后塞入棉塞或硅胶塞，并用牛皮纸包扎。包扎好的直立放在高压灭菌锅内高压蒸汽灭菌，121保持30min。6.1.3制作斜面灭菌后的试管冷却至60左右，将试管倾斜摆放在操作台桌面上，试管口比试管底部高1.0cm1.5cm，做成培养基斜面，斜面长度约为试管长度的2/3。DB36/T 1800202336.1.4无菌检测随机抽取3%5%的试管斜面（每批抽样量不得少于10支），在302下培养2d，检查有无微生物菌落，无菌落的为合格。6.1.5接种超净工作台或接种箱在接种前用紫外灭菌灯照射30min以上，接种人员要注意清洁卫生，严格按无菌操作要求，手部和菌种试管表面应用医用酒精消毒。接种用具使用前用酒精灯灼烧灭菌。开始接种时，左手握斜面试管，试管口置于酒精灯火焰上方3cm处的无菌区，用右手迅速拔开试管塞，并用接种钩或接种铲在母种试管中挑取3mm5mm直径的菌块迅速转接到待接斜面培养基上，接种位置为培养基斜面前端1cm处，迅速塞入试管。将接种好的斜面培养基用牛皮纸包扎试管口，并贴标有菌号和接种日期的标签。6.1.6培养接种后的试管置于25培养箱或培养室恒温避光培养。分别于接种后第3天和第7天分别进行逐个检验，挑出未活、污染和生长不良的不合格试管。6.1.7菌种质量标准母钟感官质量要求见表1。表 1母种感官要求项目要求容器完整、无损、洁净试管塞干燥、洁净、松紧适度，能透气和滤菌斜面长度斜面顶端距试管塞底部距离 40mm50mm接种块大小边长 3mm5mm，厚 2.5mm3mm菌种外观菌丝生长量菌丝刚长满斜面或占斜面 2/3 以上菌丝体特征整齐浓密、丝状或绒毛状，洁白菌落边缘均匀、整齐角变无拮抗现象无原基无脱壁无斜面背面外观培养基贴壁、不干缩，颜色均匀、无暗斑、无明显色素气味有灵芝菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味6.1.8母种保藏在14下避光保藏，保藏期不超过90d。DB36/T 1800202346.2原种、栽培种生产6.2.1培养料培养料应符合NY 5099的规定。配方一：木屑78%，麦麸20%，石膏1%，过磷酸钙1%。配方二：棉籽壳80%，麦麸18%，石膏1%，石灰 1%。配方三：棉籽壳50，木屑30，麦麸17，蔗糖1，石膏1，石灰1。6.2.2拌料按照培养料配方准确称取生产所需各种原材料。将原料加水混合后充分拌匀。培养料含水量控制在60%65%。6.2.3装袋拌料结束后应立即装袋。原种采用规格为（12cm17 cm）（22cm28cm）0.005cm的低压聚乙烯或高压聚丙烯塑料袋，栽培种采用规格为（15cm17 cm）（35cm38cm）0.005cm的低压聚乙烯或高压聚丙烯塑料袋。装料要求松紧适中，用线绳打活结或套环加海绵盖体等方式封口，料袋装好后应及时装锅灭菌。6.2.4灭菌采用常压蒸汽灭菌升温要快，要在4h内升温至100，料袋中心温度达到100后保持18h22h；若采用高压蒸汽灭菌，灭菌时要求关闭排气阀后高压灭菌锅内温度达到121126后保持2.5h3.0h，根据灭菌条件和灭菌料袋的数量可以适当延长灭菌时间。6.2.5冷却灭菌结束后，待灭菌锅内温度降至6070，趁热将料袋搬运到洁净的接种室内自然冷却。6.2.6接种接种在接种室或者接种箱内进行。接种室和接种箱在使用前应使用消毒剂熏蒸等方式进行消毒。料袋搬入接种室或者接种箱后，连同接种工具进行二次消毒。待料袋中心温度冷却至28以下接种。接种前，用75%酒精或其他卫生消毒剂对栽培种瓶（袋）外壁进行擦拭消毒。接种时要严格按照无菌操作要求进行操作。接种后重新用线绳扎好袋口或者在套环上迅速盖好海绵盖体。接种室和接种箱在每次使用后，及时做好清理和清洁工作，排除废气和清理废物。6.2.7培养接种后的菌袋放在培养室内进行培养。培养室要求环境干净卫生，且通风、避光、保温条件良好，温度控制在2328。培养室在菌袋移入前应进行彻底打扫和喷洒杀虫剂，关闭门窗后用消毒剂熏蒸消毒，使用的杀虫剂和消毒剂应符合NY/T 1276和GB/T 8321的规定。6.2.8培养期检查培养3d后开始不定期检查，及时清理污染杂菌、生长不良等不合格菌袋。6.2.9菌种质量标准原种和栽培种感官质量要求见表2。DB36/T 180020235表2原种和栽培种感官要求项目要求容器完整、无损、洁净棉塞或无棉塑料盖干燥、洁净、松紧适度，能透气和滤菌培养基表面距瓶（袋）口的距离50mm5mm菌种外观菌丝生长量长满容器菌丝体特征菌丝体洁白、浓密、粗壮，生长均匀，无高温抑制线菌落边缘均匀、整齐角变无拮抗现象无原基无脱壁无培养物表面分泌物无，允许局部少量淡褐色水珠气味有灵芝菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味6.2.10原种、栽培种保藏在14下避光保藏，保藏期不超过50d。7菌种生产档案生产档案应载明生产地点、时间、数量、培养基配方、培养条件、菌种来源、操作人、技术负责人、检验记录、菌种流向等内容。生产档案应当保存至菌种售出后2年。_