病毒的鸡胚培养法专家讲座.pptx

病毒鸡胚培养病毒鸡胚培养（一）试验目标（一）试验目标（二）试验原理（二）试验原理（三）试验器材（三）试验器材（四）试验方法（四）试验方法（五）试验作业（五）试验作业病毒的鸡胚培养法专家讲座第1页（一）试验目标（一）试验目标1.1.了解鸡胚培养有哪几个惯用接种方法。了解鸡胚培养有哪几个惯用接种方法。2.2.掌握鸡胚尿囊腔接种培养鸡新城疫病毒掌握鸡胚尿囊腔接种培养鸡新城疫病毒操作技术。操作技术。病毒的鸡胚培养法专家讲座第2页（二）试验原理（二）试验原理试验室培养病毒常使用动物接种和鸡胚培试验室培养病毒常使用动物接种和鸡胚培养两种方法，而鸡胚培养更为常见。普通养两种方法，而鸡胚培养更为常见。普通而言，禽病毒病大部分可经鸡胚分离病毒，而言，禽病毒病大部分可经鸡胚分离病毒，其它动物病如犬瘟热也可经鸡胚分离病毒。其它动物病如犬瘟热也可经鸡胚分离病毒。病毒的鸡胚培养法专家讲座第3页鸡胚接种技术是养禽业中一个相对新疫苗鸡胚接种技术是养禽业中一个相对新疫苗接种方法。这种方法就是对孵化后期鸡胚接种方法。这种方法就是对孵化后期鸡胚接种一些活病毒疫苗。这些病毒疫苗不会接种一些活病毒疫苗。这些病毒疫苗不会对孵化率产生不利影响，经过这种方式接对孵化率产生不利影响，经过这种方式接种疫苗后孵出雏鸡含有免疫保护力。种疫苗后孵出雏鸡含有免疫保护力。病毒的鸡胚培养法专家讲座第4页（三）试验器材（三）试验器材1.1.鸡胚鸡胚：要选择要选择SPFSPF鸡胚或低母源抗体鸡胚。从鸡胚或低母源抗体鸡胚。从实践看，法氏囊炎病毒反抗体相当敏感，所以要实践看，法氏囊炎病毒反抗体相当敏感，所以要用无母源抗体鸡胚；而新城疫病毒、禽流感病毒用无母源抗体鸡胚；而新城疫病毒、禽流感病毒等可抵抗母源抗体作用而得以繁殖致死鸡胚。等可抵抗母源抗体作用而得以繁殖致死鸡胚。孵化前鸡胚应注意消毒，置孵化前鸡胚应注意消毒，置37-3837-38、相对湿度相对湿度45-60%45-60%孵卵器中孵育，每日翻蛋数次，孵蛋第孵卵器中孵育，每日翻蛋数次，孵蛋第4 4天天开始照蛋，弃去无精蛋和死胚。多采取开始照蛋，弃去无精蛋和死胚。多采取9-119-11日龄日龄活胚接种。活胚接种。病毒的鸡胚培养法专家讲座第5页（四）试验方法（四）试验方法1.1.接种前准备：接种前准备：a.a.鸡胚准备：鸡胚准备：选择选择9-119-11日龄鸡胚，在照蛋时以日龄鸡胚，在照蛋时以记号笔勾出气室，于气室稍下方胚胎活跃而血管记号笔勾出气室，于气室稍下方胚胎活跃而血管显著区域中，在血管之间间隙划上记号，作为接显著区域中，在血管之间间隙划上记号，作为接种部位。用种部位。用3%3%碘酊对接种部位进行消毒，再用碘酊对接种部位进行消毒，再用75%75%酒精棉球擦一遍，在接种定位处打孔，气室向上酒精棉球擦一遍，在接种定位处打孔，气室向上竖放于蛋托上。竖放于蛋托上。病毒的鸡胚培养法专家讲座第6页鸡胚模式结构鸡胚模式结构1.1.卵壳卵壳 2.2.绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜 3.3.尿囊腔尿囊腔4.4.羊水腔羊水腔 5.5.卵黄囊卵黄囊 6.6.鸡胚胎鸡胚胎 7.7.卵白卵白病毒的鸡胚培养法专家讲座第7页b.b.病毒材料准备：病毒材料准备：要分离培养病毒材料应是无要分离培养病毒材料应是无菌，所以在处理材料过程中，应严格按照无菌操菌，所以在处理材料过程中，应严格按照无菌操作进行，将新城疫弱毒活疫苗按照每作进行，将新城疫弱毒活疫苗按照每10001000羽份配羽份配成成250ml,250ml,为到达无菌目标，可在每毫升接种物中为到达无菌目标，可在每毫升接种物中加入青霉素和链霉素各加入青霉素和链霉素各100-5000IU100-5000IU，置室温中，置室温中1h1h处理。处理。病毒的鸡胚培养法专家讲座第8页法氏囊病毒分离取疑似感染病毒法氏囊，称重，按1:5（w/v）加入生理盐水，研磨，-20，重复冻融2次；每次冷冻时间以研磨物结冰为准；将冻融物转入离心管中，3000转/分，离心5分钟，将上清取出，使用无菌滤器过滤病毒的鸡胚培养法专家讲座第9页2.2.接种接种鸡胚接种方法有几个：鸡胚接种方法有几个：绒毛尿囊腔内接种绒毛尿囊腔内接种 绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种羊膜腔接种羊膜腔接种卵黄囊内接种卵黄囊内接种病毒的鸡胚培养法专家讲座第10页取取10-1210-12日龄鸡胚，照蛋日龄鸡胚，照蛋选择血管较少部位做一记选择血管较少部位做一记号，用磨蛋器磨一于纵轴号，用磨蛋器磨一于纵轴平行裂痕，小心挑开蛋壳，平行裂痕，小心挑开蛋壳，将白色壳膜用针尖小心挑将白色壳膜用针尖小心挑破，不要伤及血管丰富而破，不要伤及血管丰富而透明绒毛尿囊膜，在气室透明绒毛尿囊膜，在气室顶端钻一小孔，用滴管贴顶端钻一小孔，用滴管贴近小孔，轻轻一吸，绒毛近小孔，轻轻一吸，绒毛尿囊膜便下陷成一小凹。尿囊膜便下陷成一小凹。绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种1.1.鸡胚胎鸡胚胎2.2.羊膜腔羊膜腔3.3.绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜病毒的鸡胚培养法专家讲座第11页 取取10-1210-12日龄鸡胚，消毒日龄鸡胚，消毒气室顶上蛋壳，并将气气室顶上蛋壳，并将气室顶端蛋壳锉一三角形室顶端蛋壳锉一三角形裂痕，用灭菌镊子揭去裂痕，用灭菌镊子揭去裂痕部位蛋壳和壳膜，裂痕部位蛋壳和壳膜，用灭菌平头镊子刺破尿用灭菌平头镊子刺破尿囊膜，并轻轻夹去羊膜，囊膜，并轻轻夹去羊膜，用小号针头刺进羊膜腔用小号针头刺进羊膜腔内，注入内，注入0.05-0.1ml0.05-0.1ml病病毒接种液，以氧化锌胶毒接种液，以氧化锌胶布封口，滴上溶化固体布封口，滴上溶化固体石蜡。放回孵化器，使石蜡。放回孵化器，使蛋直立孵化。蛋直立孵化。羊膜腔接种羊膜腔接种羊膜腔接种羊膜腔接种1.1.鸡胚胎鸡胚胎2.2.羊膜腔羊膜腔3.3.绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜4.4.羊膜羊膜病毒的鸡胚培养法专家讲座第12页 选择选择6-8日龄鸡胚，日龄鸡胚，照蛋检验，划出气室照蛋检验，划出气室和胎位，并以气室向和胎位，并以气室向上竖立在蛋托上，气上竖立在蛋托上，气室端蛋壳经消毒后以室端蛋壳经消毒后以打孔器钻一小孔，将打孔器钻一小孔，将注射针头刺过小孔，注射针头刺过小孔，沿着卵纵轴刺入约沿着卵纵轴刺入约3cm，然后注入，然后注入0.2ml病毒接种液，病毒接种液，用氧化锌胶布及石蜡用氧化锌胶布及石蜡封口后放回孵化器中封口后放回孵化器中培养。培养。卵黄囊内接种卵黄囊内接种卵黄囊接种卵黄囊接种病毒的鸡胚培养法专家讲座第13页鸡胚各种接种路径1.绒毛尿囊膜接种 2.尿囊腔接种3.羊水腔接种 4.卵黄囊接种病毒的鸡胚培养法专家讲座第14页绒毛尿囊腔内接种绒毛尿囊腔内接种 绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种羊膜腔接种羊膜腔接种卵黄囊内接种卵黄囊内接种3.3.收毒：收毒：病毒收毒依据接种路径而定。病毒收毒依据接种路径而定。尿尿 囊囊 液液绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜羊羊 水水卵黄液和卵黄膜卵黄液和卵黄膜病毒的鸡胚培养法专家讲座第15页4.4.废料处理废料处理操作完成，将全部用具煮沸消毒，擦净后操作完成，将全部用具煮沸消毒，擦净后再以消毒水浸洗，卵壳、壳膜和胚胎等残再以消毒水浸洗，卵壳、壳膜和胚胎等残物煮沸消毒后弃去。物煮沸消毒后弃去。病毒的鸡胚培养法专家讲座第16页