甲型HN流感病毒实验活动管理工作规范.doc

甲型H1N1流感病毒实验活动管理工作规范

为做好我省甲型H1N1流感防控工作，保证我省甲型H1N1流感病毒实验室检测质量与生物安全，特制定本规范。本规范是从事甲型H1N1流感检测实验室的最低规定，是对申请开展甲型H1N1病毒实验活动的实验室进行审批的技术依据。
一、工作原则
㈠甲型H1N1流感病毒的生物学特性和变异趋势尚不完全明确，且传染性较强，甲型H1N1流感病毒目前暂时按照病原微生物危害限度分类中的二类进行管理。必要时，将依据甲型H1N1流感疫情的发展和病毒毒力变异情况，以及动态风险评估结果，适时调整其危害分类等级。
㈡从事甲型H1N1流感检测实验室必须通过省卫生厅组织的生物安全论证，合格后方可开展甲型H1N1流感病毒检测工作。
㈢从事甲型H1N1流感检测实验室所在单位要加强实验室生物安全组织领导，建立健全实验室生物安全管理体系，明确生物安全管理责任。
㈣未经培养的临床样本检测在生物安全二级实验室进行。
㈤需要开展甲型H1N1流感病毒分离工作的单位，必须在带负压的生物安全二级以上实验室进行，通过省卫生厅组织的生物安全论证后方可开展。
㈥临床检测样本检测结果为甲型H1N1阳性的，实验室要按照有关规定，及时告知患者就诊医院，由患者就诊医院进行疫情报告。其阳性样本及时送本地疾病防止控制中心国家级流感监测网络实验室进行病原分离工作。
二、管理制度
㈠根据各实验室具体情况和特点，建立甲型H1N1流感病毒实验室生物安全风险评估制度。
㈡建立并健全甲型H1N1流感病毒相关的体系文献，涉及程序文献、标准操作程序（SOP）和记录等文献。
㈢建立并健全甲型H1N1流感病毒及样本使用审批制度。
㈣建立并健全甲型H1N1流感实验室意外事故的应急解决预案。
㈤实验室所在的机构应设立生物安全委员会，负责征询、指导、评估、监督实验室的生物安全相关事宜。实验室负责人必须是所在机构生物安全委员会成员。
㈥建立并健全严格的实验室准入制度，实验室入口处应标明所从事的生物因子、负责人和紧急联系电话。
㈦实验室指定专人负责工作人员的健康及感染监测工作，开展工作人员岗前及定期健康体检、保存本底血清并规定进行防止接种，建立个人健康档案。
㈧建立实验室设施、设备的定期维护制度，并设专人负责管理。
㈨建立对的的生物安全标示使用制度。
㈩建立严格的毒种及样本的保存和销毁制度。
（十一）建立严格的实验室废物解决管理制度。
三、人员规定
㈠实验室应具有保证工作正常运营的相应数量的管理、技术、安保、设施维护等工作人员。
㈡工作人员应具有较强的责任心，健康状况良好，接受必要的健康监测。
㈢从事甲型H1N1流感病毒实验室活动人员须经实验室生物安全管理和专业知识培训，培训合格后，持证上岗。工作人员须具有全面的实验室生物安全管理知识和流感专业知识，具有一定流感病毒实验工作经验，熟悉流感实验活动的各项制度和流程。
㈣工作人员应通过严格审批和登记后方可进入实验室。当实验活动进行时，要限制该实验室工作人员的出入。
㈤实验室管理层应按工作的复杂限度定期评价员工的表现，至少每12个月一次。
㈥实验室工作人员必须在身体状况良好的情况下，才干进入实验室进行工作。出现下列情况，不应进入上述区域。
1、身体出现开放性损伤；
2、患发热性疾病；
3、感冒、上呼吸道感染或其他导致抵抗力下降的情况；
4、妊娠期间；
5、已经在实验室连续工作4小时以上或其他因素导致的疲劳状态。
6、16岁以下儿童不应被授权进入实验室工作区。
四、甲型H1N1流感实验室布局及操作
㈠疑似或确诊甲型H1N1流感病例的未经培养的感染性材料的操作实验室布局
1、实验室入口处应标明所从事的生物因子、负责人、紧急联系电话。
2、实验室主入口的门、放置生物安全柜实验室的门应可自动关闭。
3、大量的备用物品应存储在实验室工作区域外。
4、实验室工作区域外应具有存放个人衣物的条件。
5、至少应在实验室工作区配备简易洗眼装置。
6、实验室所在的建筑内应配备高压蒸汽灭菌器或其它适当的消毒设备。
7、实验室工作区应配备生物安全柜。
8、生物安全柜的排风应通过独立于建筑物公共通风系统的管道排出。
9、在风险评估和保证 HEPA 功能正常的基础上，生物安全柜的排风可以在室内循环；但实验室应具有通风换气的条件。
10、有可靠的电力供应和应急照明。
㈡核酸检测操作
1、除满足四㈠所规定的条件外，从事甲型H1N1流感RT-PCR核酸检测应具有四个独立物理分区，分别为试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区，每个区均具有独立的缓冲间，并保证风向从外到内的定向气流。
2、从事Real-Time RT-PCR核酸检测应具有三个独立物理分区，分别为试剂准备区、标本制备区和扩增、产物分析区，每个区均具有独立的缓冲间，并保证风向从缓冲间往实验区定向气流。
㈢甲型H1N1流感病毒分离培养的操作
甲型H1N1流感病毒分离培养的操作除满足四㈠所规定的条件外，实验室应有可控的通风系统，保证实验室由外向内的定向气流。实验室排风不可再循环至建筑物其他区域。当实验室内的气体要排放到室外时，必须能快速从排气管道及所在建筑物派出，气体可通过HEPA过滤排放。
㈣实验室生物安全
1、工作人员应穿戴个人防护设备，涉及一次性手套、反穿衣、隔离衣、连体衣、帽子、鞋套或专用鞋子，眼部保护装备。其中工作人员须佩戴生物防护型N95（1860）口罩，应通过培训且每个人须通过密合度测试。
2、对标本进行核酸检测时，标本接受分装、核酸操作、PCR反映体系配制、电泳操作应当在不同房间进行。不同房间的移液器和枪头不应混用，标本分装和PCR反映体系配制的区域不应接触到核酸，并有单独的实验防护用品。
3、所有感染性或潜在感染性材料的操作应在年检合格的生物安全柜中进行。
4、应使用带有密封离心杯或转子的离心机，并且在生物安全柜中打开离心杯或转子。
五、甲型H1N1流感实验室仪器设备配置
1、核酸检测
甲型H1N1流感实验室须配置以下仪器才干开展甲型H1N1流感核酸检测工作：Ⅱ级生物安全柜、PCR仪、Real-time PCR仪、台式高速低温离心机、凝胶成像仪、混匀器、高压锅、电泳仪及-30℃冰箱各一台，同时需配置不同刻度的100～1000ml、20～200ml和2～20ml移液器各二。假如只进行Real-time PCR检测，可不需要PCR仪、凝胶成像仪、电泳仪。
2、病毒培养
甲型H1N1流感实验室须配置以下仪器才干开展甲型H1N1流感病毒分离工作：Ⅱ级生物安全柜、CO2培养箱、－70℃冰箱、离心机（高速）、倒置显微镜、高压锅和普通冰箱各一台，同时需配置不同刻度的100～1000ml、20～200ml和2～20ml移液器各两个。
六、消毒及废物解决
㈠储备有效灭活甲型H1N1流感病毒消毒剂，如含氯消毒剂、酒精、过氧化物、四价的氨化合物。
㈡保证使用合格的消毒剂。
㈢实验室产生的废物应按照《医疗废物管理条例》、《医疗卫生机构医疗废物管理办法》的规定进行解决。
七、运送
严格按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运送管理规定》的规定，开展甲型H1N1流感病毒及样本运送工作。
㈠甲型H1N1流感样本可按照B类感染性物质
（UN3733）包装运送；甲型H1N1流感病毒培养物须按照A类感染性物质（UN2814）包装运送。
㈡标本运送须通过省卫生厅批准并备案。
㈢实验室应储备充足的符合上述规定的包装材料。
㈣运送工作人员须通过相关生物安全知识培训。
㈤陆路运送应有专车，护送人员不少于两人，同时应具有有必要的个人防护装备及消毒用品。