规模牛场牛病毒性腹泻-黏膜病流行病学调查.pdf

养殖与饲料2 0 2 4 年第2 期规模牛场牛病毒性腹泻-黏膜病流行病学调查邓毅民1,蔺文龙，林为民2*，黄新3,史文军21.新疆生产建设兵团第八师1 4 3 团农业发展服务中心，新疆石河子8 3 2 0 0 0；2.新疆生产建设兵团第八师畜牧兽医工作站，新疆石河子8 3 2 0 0 0；3.新疆农垦科学院，新疆石河子8 3 2 0 0 0摘要目的 掌握病毒性腹泻-黏膜病（BVD-MD)在规模牛场3 个品系牛间的感染状况，了解不同品系间BVDV感染是否存在差异。方法 选择新疆师市范围内的1 9 个规模牛场，分别饲喂中国荷斯坦奶牛（以下简称荷牛），弗莱维赫乳肉兼用牛荷斯坦奶牛杂交代乳肉兼用牛(以下简称弗荷牛),挪威红牛荷斯坦奶牛杂交代乳肉兼用牛(以下简称挪荷牛);共计采集血清样品7 9 6 5 份，分别使用牛病毒性腹泻(BVD)实时荧光RT-PCR检测和牛病毒性腹泻ELISA方法检测抗原和抗体阳性率。结果 实时荧光RT-PCR阳性总检出率为1.7 2%，荷牛阳性检出率为1.7 3%，弗荷牛阳性检出率为1.3 5%，挪荷牛阳性检出率为2.0 5%；场群阳性检出率为6 8.4 2%；3 个品系的牛、青年牛、后备牛、成母牛均检测到BVDV,3个品系牛之间抗原阳性率差异不显著；牛病毒性腹泻ELISA方法检测阳性总检出率为3 6.6 9%，荷牛阳性检出率为3 7.1 1%，弗荷牛阳性检出率为3 6.7 4%，挪荷牛阳性检出率为34.02%，场群抗体阳性率为1 0 0%,3 个品系牛之间抗体阳性率差异不显著。结论 师市规模牛场3 个品系牛均存在BVDV感染，且不同品系间BVDV感染率差异不显著。关键词规模牛场；品系；牛病毒性腹泻病毒；血清学；流行病学；抗原检测；抗体检测Serological and epidemiological investigation of bovine viraldiarrhea-mucosal disease in large-scale cattle farmsDENG Yimin,LIN Wenlong,LIN Weimin?,HUANG Xin,SHI Wenjun?1.Agricultural Development Service Center of the 143rd Regiment of the Eighth Division of XinjiangProduction and Construction Corps,Shihezi 832000,China;2.Animal Husbandry and Veterinary Work-station of the Eighth Division of Xinjiang Production and Construction Corps,Shihezi 832000,China;3.Xinjiang Academy of Agricultural Reclamation Sciences,Shihezi 832000,ChinaAbstract Objectives The infection of viral diarrhea/mucosal disease(BVD-MD)in three strains收稿日期：2 0 2 3-0 9-2 6基金项目：新疆生产建设兵团重大科技项目（2 0 2 1 AA004）作者简介：邓毅民，男，1 9 7 0 年生，兽医师。*通信作者：林为民，男，1 9 6 7 年生，高级兽医师。.6of cattle in large-scale cattle farms was investigated to study whether there were differences in infec-tion among strains.Methods 19 large-scale cattle farms in Shihezi City were selected and fed withChinese Holstein cows(hereinafter referred to as Holstein cows),Fleckvieh milk-meat dual-purposecattle Holstein cows hybrid milk-meat dual-purpose cattle(hereinafter referred to as Fleckviehcattle),and Norwegian red cattle Holstein cows hybrid milk-meat dual-purpose cattle(hereinafter re-ferred to as Norwegian red cattle).A total of 7 965 serum samples were collected.The real-time fluo-rescence RT-PCR and ELISA of bovine viral diarrhea(BVD)was used to detect the positive rate ofantigen and antibody.Results The total positive rate detected by real-time fluorescence RT-PCR was1.72%.The positive rate of Holstein cattle,Fleckvieh cattle,Norwegian red cattle,and field was1.73%,1.35%,2.05%,and 68.42%,respectively.BVDV was detected in calves,young cattle,reservecattle,and adult cows of the three strains.There was no significant difference in the positive rate ofantigen among the three strains of cattle.The total positive rate detected by ELISA was 36.69%.Therate of Holstein cattle,Fleckvieh cattle,Norwegian red cattle,and field was 37.11%,36.74%,34.02%,and 100%.There was no significant difference in the positive rate of antibody among the threestrains of cattle.Conclusions BVDV infection existed in all three strains of cattle in large-scale cattlefarms in Shihezi City.There was no significant difference in BVDV infection rates among differentstrains of cattle.Keywords large-scale cattle farms;strains;BVDV;serology;epidemiology;antigen detection;anti-body detection养殖与饲料2 0 2 4 年第2 期新疆师市养殖奶牛的历史可追溯至上世纪6 0年代，直至2 0 0 9 年未见关于牛病毒性腹泻(BVD)的相关报道；2 0 0 2 年，师市分6 个批次从澳大利亚进口1 6 6 7 3 头荷斯坦黑白花奶牛，均由北京市进出口检疫检验局检疫合格（牛病毒性腹泻病毒等7 种病毒检测均为阴性）,指定隔离场隔离4 5 d后运回师市。截至目前，师市发展到1 7 0 0 头以上的奶牛场19个；2 0 1 6 年之后，有1 个牛场使用挪威红牛冻精荷斯坦奶牛，培育出挪荷牛1 2 7 3 头；有2 个牛场使用弗莱维赫乳肉兼用牛冻精荷斯坦奶牛,培育出弗荷牛1 4 5 2 头；分别与本场荷斯坦奶牛分群饲养。目前，师市饲养有荷斯坦奶牛、挪荷乳肉兼用牛和弗荷乳肉兼用牛等3 个品系的产奶牛。李佑民等于1 9 8 3 年首次在我国吉林省发现了输入性牛病毒性腹泻病例,并成功分离鉴定牛病毒性腹泻病毒(BVDV)毒株;2 0 0 9 年,李娜等 2 首次在师市分离到BVDV。近几年，笔者在工作中也经常接到部分规模牛场3 个品系的牛均发现“早产、流产、死胎和牛腹泻”等临床症状的报告,严重腹泻还能引起特牛死亡 3-5 ,给师市奶牛养殖造成重大危害。为掌握牛病毒性腹泻/黏膜病在师市的感染状况，以及不同品系间BVDV感染是否存在差异，笔者所在课题组对师市范围的1 9 个未免疫BVDV疫苗的牛场,采集不同生长阶段牛的血样，进行牛病毒性腹泻/黏膜病毒(BVD-MD)病原和抗体的检测，以期掌握BVDV在师市牛场中的感染状况，为师市防控BVD提供技术支撑1材料与方法1.1样品来源以预期流行率抽样原则，3 个品系的犊牛、青年牛、后备牛和成母牛分别采用分阶段抽样原则。第一阶段，采取普查的方法，1 9 个规模牛场全部作为抽样单元；第二阶段，抽样场内按照9 5%置信水平(CI)、1 0%可接受误差、5 0%预期流行率进行抽样。共采集血清样品7 9 6 5 份，其中：荷牛血清5 9 5 2 份，养殖与饲料2 0 2 4 年第2 期.7弗荷牛1 0 3 7 份，挪荷牛9 7 6 份，血清一2 0 保存备用，详见表1。样品的免疫情况：1 7 个牛场免疫疫苗，2 个牛场未免疫疫苗。表1 3 个品系牛血清样品采集情况项目荷牛血清样弗荷牛血清样挪荷牛血清样特牛1634青年牛2.009后备牛1120成母牛1189注：特牛（0 2 月龄）青年牛（3 1 7 月龄）后备牛（1 8 月龄至产）。1.2检测试剂牛病毒性腹泻(BVD)实时荧光RT-PCR检测试剂盒（批号：BVDV20220802P），购于哈尔滨元亨生物药业有限公司；牛病毒性腹泻ELISA检测试剂盒（批号：2 1 0 9 0 0 1），购于青岛瑞尔生物技术有限公司。1.3检测方法试验由新疆农垦科学院兽医研究所进行BVDV抗原、抗体的检测，BVDV抗原、抗体检测均按照检测试剂盒说明书的操作方法和判断标准执行。1.4数据处理对试验数据采用Excel软件进行整理和制图，并将其按照不同年龄段、不同品系等进行统计，利用?检验法进行差异性比较。2丝结果与分析2.1BVDV抗原检测情况由表2 可知：共检测血清样品7 9 6 5 头份，阳性样品检出1 3 7 头份，BVDV阳性总检出率为1.7 2%。其中：荷成母牛血清样品检出率最高，为3.7 0%，弗荷特牛血清样品检出率最低，为0.4 9%；3 个品系间牛血清样品总检出率差异不显著，说明不同品系牛之间不影响BVDV的流行；3 个品系青年牛、后备牛和成母牛BVDV阳性率显著高于特牛，这可能由于犊牛单独饲喂、与其他牛只接触机会少和生长时间短的原因,或者是成年牛在怀孕期间感染BVDV,导致该病毒在幼牛体内建立免疫耐受或者持续感染有关。表2 3 个品系牛血清样品BVDV抗原检测结果统计荷牛血清样弗荷牛血清样挪荷牛血清样项目阳性阳性阳性阳性阳性阳性数/份率/%数/份率/%数/份率/%份特牛青年牛232062211922342752363642859后备牛27成母牛44合计1032.2BVDV抗体检测情况由表3 可知：共检测血清样品7 9 6 5 头份，抗体阳性样品检出5 2 7 2 头份，抗体阳性总检出率为66.19%。其中：荷成母牛血清样品抗体检出率最高，为8 9.6 6%，挪荷犊牛血清样品抗体检出率最低，为3 9.3 7%；3 个品系牛间血清样品抗体平均检出率差异不显著，也表明抗体阳性率高低不因品系不同而存在差异；3 个品系青年牛、后备牛和成母牛BVDV抗体阳性率显著高于犊牛,这可能与特牛单独饲喂、与其他牛只接触机会少和生活时间短有关。表3 3 个品系牛血清样品BVDV抗体检测结果统计荷牛血清样挪荷牛血清样项目阳性阳性阳性阳性阳性阳性数/份率/%数/份率/%数/份率/%特牛852青年牛1281后备牛910成母牛1 0662.3日BVDV抗原/抗体场群阳性统计情况检测1 9 个牛场的血清样品，1 3 个牛场BVDV抗原显示阳性，场群抗原阳性率为6 8.4 2%；BVDV抗原阳性最高的牛场检出率为2.4 4%,BVDV抗原阳性最低的牛场检出率为0.3 7%。1 9 个牛场BVDV抗体显示阳性，场群抗体阳性率为1 0 0%;BVDV抗体阳性最高的牛场检出率为5 3.7 3%，BVDV抗体阳性最低的牛场检出率为2 3.2 9%。3 讨 论Ran等调查发现，全世界牛血清流行率为0.551.142.413.701.7352.1463.7681.2589.66124714弗荷牛血清样8641.7511358.8517764.3624567.310.491.041.451.921.35245920871291591670.901.712.123.162.0539.3755.1367.3758.60811.1%100%;李娜等 2 对新疆石河子地区BVDV的分子流行病学调查结果显示,BVDV抗原阳性率为39.06%；王晨豫等 7 调查结果显示，BVDV抗原阳性率为1.6 3%；王龙等 8 调查结果显示，BVDV抗原阳性率为3.7 1%；张宇名等 9 调查结果显示,BVDV抗原阳性率为1.9 4%。本试验数据结果显示，师市BVDV的血清抗原阳性率为1.7 2%,其中：荷牛抗原阳性率为1.7 3%，弗荷牛抗原阳性率为1.3 5%，挪荷牛抗原阳性率为2.0 5%；相较于新疆境内其他地区和山东部分地区，师市BVDV的抗原阳性率暂处于较低水平，这与近3 年师市加强BVD“检疫清除检疫清除”等净化措施的落实密切相关，需要在后面的工作中继续强化。参考文献1李佑民,刘振润，武银莲，等.牛病毒性腹泻-黏膜病病毒株(长春1 8 4)的分离与鉴定 J.兽医大学学报，1 9 8 3(2)：1 1 3-1 2 0.2李娜,韩猛立，黄新,等,新疆石河子地区牛病毒性腹泻病毒的分子流行病学调查 J.石河子大学学报（自然科学版），2 0 0 9,2 7养殖与饲料2 0 2 4 年第2 期(6):706-711.3王传锋.伊犁地区牛病毒性腹泻黏膜病的血清学调查 J.黑龙江畜牧兽医2 0 1 8,(1 8)：1 2 2-1 2 3.4杨德新，沈菩秀，于井成，等.河南省规模化奶牛场牛病毒性腹泻流行病学调查 J.中国兽医杂志，2 0 2 2(2)：9 5-9 8.5努尔赛力克努素甫，阿斯哈提哈山，王海军，等.牛病毒性腹泻病毒在新疆褐牛不同饲养阶段的感染情况调查 .新疆农垦科技,2 0 2 2,4 5(2):4 9-5 0.6RAN X,CHEN X,MA L,et al.A systematic review and meta-analysis of the epidemiology of bovine viral diarrhea virus(BVDV)infection in dairy cattle in ChinaJJ.Acta Trop,2019,190:296-303.7王晨豫，宋洁，曹梦园，等.新疆部分规模奶牛场牛病毒性腹泻病的流行情况调查与防控措施 J.中国乳业，2 0 2 1(8)：9 6-1 0 0.8王龙，梁霄勇，季新成，等.新疆部分地区牛病毒性腹泻病毒的分离、鉴定及分子流行病学调查 J.新疆农业科学，2 0 1 5(2)：334-338.9】张宇名，王君娜，迟丽丽，等.2 0 1 8 2 0 1 9 年山东部分地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病毒感染血清学调查 J.中国兽医杂志,2 0 2 1,5 7(5):1 0-1 4.【责任编辑：胡敏】