水痘-带状疱疹病毒微生物学检验.doc

水痘-带状疱疹病毒微生物学检验
关键词：细胞库 菌株培养中心 atcc 北纳细胞网
(一)检验程序
水痘-带状疱疹病毒检验程序同图29-1。

(二)标本的采集
VZV感染者几乎均出现皮肤水痘或疱疹。水疱内液体含有高浓度的无细胞病毒，且采集方法简单易行，故水疱液体是确诊VZV感染的最主要标本。PCR检测可以拭子采集水疱液，置病毒运输培养基或生理盐水。VZV DNA很稳定，PCR法检测可采集血清、血浆、全血和外周血单核细胞(peripheral blood mononuelear，PBMC)保存于-20℃。然而，VZV极不稳定，-20℃冰冻后病毒活性极大地降低。故病毒培养时，应尽早接种，否则标本应加冷冻保护剂保存于-80℃。
(三)标本直接检查
1.显微镜检查最原始且最简单易行的是Tzanck试验，方法是取水疱基底部含有细胞的标本涂片，用瑞特-吉姆萨(Wright-Giemsa)染色。镜检可见多核巨细胞、多个嗜酸性核内包涵体。由于HSV、VZV感染均可以观察到此形态的病变细胞，故此方法不能用于VZV的特异性诊断。
2.抗原检测VZV抗原检测是住院病人VZV，感染的首选实验诊断方法。采用无菌皮肤刮勺用力刮取疱疹基底部含细胞的标本，涂片，用低温丙酮固定，室温干燥，加荧光标记的VZV特异性单克隆抗体在37℃潮湿的培养箱中染色培养半小时，洗去未结合抗体，加盖玻片后在荧光显微镜下观察。也可采用间接荧光抗体法检测VZV抗原。

3．核酸检测PCR技术彻底改变了VZV，相关中枢神经系统和散播性感染的诊断，是诊断VZV感染的重要方法。由于皮肤损伤部位标本易采集，且疱疹液VZV浓度高，PCR检测阳性率高，成为VZV诊断及基因分型的理想标本。VZV相关面瘫等患者皮肤表面无明显疱疹，可采集痂结或皮肤刮取物进行PCR检测。血清、血浆、全血、PBMC、CSF标本均可用于PCR检测。此外，PCR技术可快速鉴别VZV与其他病毒，特别是HSV-1和HSV-2引起的疱疹。荧光定量PCR方法因其高敏感性，更适合csF标本的检测。
(四)分离培养和鉴定
病毒分离培养除用于VZV诊断外，还可用于VZV毒株基因分型、获取血清学试验所需的VZV感染性细胞以及VZV耐药性分析等。一般采用人包皮成纤维细胞，其他敏感性细胞包括二倍体人细胞系如胎儿肾细胞、胎儿肺细胞、A549细胞和人黑色素瘤细胞，以及原代猴肾细胞等非人细胞系。市售CV-1和MRC-5混合细胞可用于包括VZV的疱疹病毒分离培养。接种后4～14天出现CPE，表现为局灶性细胞圆缩和肿胀。采用PCR方法或VZV特异性抗体染色法对CPE培养物进行鉴定。遗传学鉴定主要用于临床研究，如鉴别野生型和疫苗所致VZV感染，分析疫苗接种后出疹病因、疫苗与带状疱疹相关性，评估疫苗株传染性等。
(五)血清学检测
VZV只有一个血清型。VZV抗体水平是临床诊断、鉴别诊断VZV感染的重要依据。抗VZV IgM可用于诊断VZV原发感染，抗VZV IgG用于检测机体对VZV的免疫力。WHO建立了抗VZV IgG国际标准参考血清。

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