五模块生物检测技术市公开课一等奖百校联赛特等奖课件.pptx

第五模块第五模块 生物检测技术生物检测技术第九章第九章 药品生物检定法药品生物检定法第1页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题知识目标知识目标 了解热原检验法、细菌内毒素检验法含义；掌握无菌检验法、微生物程度检验主要方法；了解药品异常毒性检验方法技能目标技能目标能检验药品制剂热原、细菌内毒素；能进行药品无菌检验；能测定药品微生物程度；能检验药品异常毒性学习目标学习目标第2页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题复习提问复习提问 1什么是管碟法？管碟法操作主要流程？2双碟制备方法？第3页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题新课纲领新课纲领本节主要内容：本节主要内容：热原检验热原检验:1.简述简述 2.详细操作方法详细操作方法内毒素检验内毒素检验:1.简述简述 2.详细操作步骤详细操作步骤 第4页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题一、概一、概 述述 用整体动物体内试验或离休器用整体动物体内试验或离休器官、组织、细胞等体外试验来测定药品官、组织、细胞等体外试验来测定药品生物活性，以反应其临床功效及效价一生物活性，以反应其临床功效及效价一个方法。个方法。1.1.生物检定法生物检定法生物检定法生物检定法第5页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题常见药品常见药品生物检定生物检定法法肝素肝素绒促性素绒促性素缩宫素缩宫素胰岛素胰岛素洋地黄洋地黄第6页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题二、热原检验法二、热原检验法第7页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题含热原注射液注入家兔体内，引发体温升高40度以上，甚至出现昏迷、休克、死亡现象。2.什么是热原反应？第8页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题3.热原基本性质？热原基本性质？水溶性、不挥发性、耐热性、滤过性第9页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题4.污染路径污染路径溶剂带入原料带入容器用具带入制备过程污染灭菌 不完全使用带入第10页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题5.除去方法吸附法、离子交换法、吸附法、离子交换法、反渗透法、超滤、高温、反渗透法、超滤、高温、酸碱酸碱第11页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题6.检验方法检验方法家兔致热试验法第12页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题7.详细详细步骤步骤静脉注入药品，观察家兔体温升高情况，超出程度认为有热原反应供试用家兔供试用家兔试验前准备试验前准备检验法检验法结果判断结果判断第13页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题3只兔：1小时测1次，共3次，最高-最低升高温度结果：均升高在0.6度以下且升高总数在1.4以下认为符合要求第14页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题智能热原仪智能热原仪第15页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题第16页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题温度探头温度探头第17页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题本法是利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生细菌内毒素（单位以EU表示），以判断供试品中细菌内毒素限量是否符合要求一个方法。细菌内毒素检验包含两种方法，即凝胶法和光度测定法。三、细菌内毒素检验法第18页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题系经过鲎试剂与内毒素产生凝集反应原理来检测或 半定量内毒素方法。分为浊度法和显色基质法。浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中浊度改变而测定内毒素含量方法。可分为终点浊度法和动态浊度法。显色基质法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生凝固酶使特定底物释放出呈色团多少而测定内毒素含量方法。可分为终点显色法和动态显色法。凝胶法凝胶法光度测定法光度测定法第19页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题内毒素与鲎试剂起反应产生凝胶，观察到浑浊。什么是鲎试什么是鲎试剂剂？什么是细菌内毒素？1.凝胶法原理第20页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题起源：G-细胞壁外膜上细胞壁外膜上脂多糖脂多糖（LPS）成份，所以内毒素是化学成份不是简单生命体，所以灭内毒素时应与其它成份区分。什么是细菌内毒素？什么是细菌内毒素？第21页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题 化学结构：a b ca(o特异性多糖链)类似于抗原，亲水性 b 关键多糖 c类脂类脂A，疏水性，是生理活性中心，疏水性，是生理活性中心，试验证实，将a 和 b 切下来组合后与 c部分产生效果相当，所以认为c是生理活性部位。第22页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题特点：根据其特殊结构，疏水基团易粘合在容器器壁，而在水中浓度就变低，其次疏水端相连结后，亲水端再与别疏水端相连而成大集团，使其在水中分布不均匀，所以药典规定在使用时要经过振荡及混旋15分钟，并立即做下一步操作，但这种现象只限于人工提纯品。第23页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题与热原关系：广义热原包含内毒素、生物酶、蛋白质、化学物质（后三种成份也有致热作用，但不引发器质性病变），而狭义热原就等于内毒素狭义热原就等于内毒素（引发器质性病变）。所以药品检测时普通认为没有内毒素，合格时，热原检测也合格。第24页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题分类：分国家标准品：（简写RSE或NSE）效价：9000，单位Eu,由中检所生产，代号981就是指98年1月生产。和工作标准品：（CSE和WSE）效价：100200，也有50或70，单位Eu，到中检所购置，是法定试剂。第25页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题拉丁文TAL（东方鲎）、LAL（美洲鲎），血液是蓝色（还有蝉）。被称为是活化石，大约生活在4亿年前至今，体态基本没有改变，品种有10各种，但能作为鲎试剂（血液变形细胞溶解鲎试剂（血液变形细胞溶解物无菌冷冻干燥品）物无菌冷冻干燥品）用只有35个，主要生活在日本沿海、中国沿海、北美沿海，在中国是二级保护动物，在日本是特级保护动物。不能人工养殖。第26页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题发觉：1962年，美国一个研究员Bang在海滩散步，发觉很多鲎（也叫大王蟹）死了，他拿针管吸了海水，注入一个活鲎体内，发觉其很快死亡，1963年写了一篇“鲎一个致死疾病”文章，向研究所反应，争取一些经费以此为主要研究方向，他助手年轻人levin和他一起研究，发觉G-细胞壁外膜上脂多糖（LPS）成份引发鲎致死，共同发表文章“鲎酶反应机理”。第27页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题 反应机理：鲎试剂中含有C、B因子，在脂多糖存在时成为激活因子，使凝血酶原变为凝血酶，又使凝固蛋白原变为凝固蛋白（成凝胶状），发生这样生化反应。而口服与输入血液剂量相比100万倍，所以人口服内毒素不会发生发烧反应，其次口服时人体也有一种屏障作用。日本认为血中0.1Eu/ml,就会有发烧反应。第28页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题检测方法区分：第29页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题内毒素小于0.03 Eu/ml无菌注射用水，鲎试剂反应PH：68，而工业生产要求为PH：57，所以不能以企业生不能以企业生产灭菌产灭菌 注射用水来作为检注射用水来作为检验用水验用水，必须是中检所指定生产。药典要求凝胶法小于0.03 Eu/ml，定量法小于0.005 Eu/ml，买时要配套，与鲎试剂买一个厂家生产。关于检验用水关于检验用水第30页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题内毒素检查法内毒素鲎试剂检查用水第31页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题 2.定量分析方法定量分析方法预设限值法：预设限值法：OD为为0.02什么是OD?第32页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题OD：就是就是吸光度吸光度，仪器采取透仪器采取透光率下降到光率下降到95%点作为反点作为反应时间临界点，将应时间临界点，将95%取取负对数恰好是负对数恰好是0.02第33页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题3.试验前期工作试验前期工作器材准备器材准备所需试剂所需试剂 用具处理用具处理第34页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题稀释内毒素标准品稀释内毒素标准品制备鲎试剂制备鲎试剂制备标准曲线制备标准曲线生成标准曲线生成标准曲线4.详细操作示例 头孢曲松钠注射液内毒素测定头孢曲松钠注射液内毒素测定第35页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题稀释内毒素标准品稀释内毒素标准品 0.2ml 0.2 0.2 0.2 1.8ml水水 1.8 1.8 1.8100Eu/ml 10 1 0.1 0.01第36页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题 制备鲎试剂制备鲎试剂 制备标准曲线制备标准曲线10支小管分加0.1ml鲎试剂鲎试剂2个个管阴管阴性加性加水水8个管加内个管加内毒素标准品毒素标准品第37页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题生成标准曲线生成标准曲线待最终一个浓度点反应曲线超待最终一个浓度点反应曲线超出出0.02限值后，用鼠标点中限值后，用鼠标点中“手动停顿检测手动停顿检测”点击点击“生成标准曲线生成标准曲线”第38页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题样品稀释与加样样品四个浓度稀释样品四个浓度稀释8个阳性管个阳性管（如：（如：40.80.160.320）平行平行2个，共个，共8个管个管每个管加每个管加0.1鲎试剂鲎试剂第39页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题阳性对照阳性对照：找出最正确稀释倍数：找出最正确稀释倍数算出头孢曲松钠内毒素浓度算出头孢曲松钠内毒素浓度 为为 0.065Eu/mg,小于限值小于限值0.2Eu/mg。结结果果分分析析阴性对照：阴性对照：反应时间远小于标准曲线0.01所用反应时间，阴性合格 第40页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题本课小结本课小结第41页学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题课后习题课后习题 家兔热原检验法怎样操作？第42页第43页