实验三、孕马血清促性腺激素效价的生物学测定.doc

. 实验三、孕马血清促性腺激素效价的生物学测定（PMSG或FSH的生物测定法）一、实验目的测定PMSG（或FSH）的活性，掌握该激素的简易效价测定方法。二、实验原理FSH为垂体促性腺激素，作用于即将达到性成熟年龄的雌性小白鼠，可促进卵巢上的卵泡发育，分泌雌激素。在雌激素的作用下，又可促进子宫、卵巢及整个生殖器官的发育、增大。PMSG因为也含有FSH，因此具有与FSH相同的生物学作用，也能促进性成熟前的小白鼠子宫发育增大。PMSG在机体内的作用期比FSH长，因此在测试效价过程中，PMSG可作一次注射，而FSH需经多次注射。三、实验材料1、实验动物 健康无伤残的18-23日龄（即将达到性成熟日龄）、体重9-13g的同源雌性小白鼠。各测试组实验鼠出生日龄相差不得越过三天，体重相差不得超过2g。2、测定样品 PMSG（或FSH）、生理盐水。3、测定器具 1ml注射器、4号针头、0.1ml微量注射器、1ml和2ml吸管、吸耳球、酒精棉球、剪刀、镊子、搪瓷盘、解剖板、鼠罐和青霉素瓶（稀释瓶）。四、测试方法1、测试组的确定为了测得精确效价，应先将各测试样品浓度组距加大进行粗测，从而确定样品的大致效价范围，再将测试样品浓度组距减少，以测得样品较为精确的效价，可按下表选择确定测试组。PMSG测试组的确定每0.1mlPMSG，按下表加入不同量的生理盐水，稀释成不同浓度作为各测试组。PMSG稀释浓度换算小白鼠单位每mlPMSG中加入生理盐水量稀释液中PMSG浓度PMSG小白鼠单位（Mu/ml）111/1260151/1680191/20100231/24120271/28140311/32160351/36180391/40200431/44220471/48240FSH测试组的确定FSH是瓶装粉剂，故在配制不同浓度的测试组之前，需用一定量的生理盐水稀释成溶液，测出每ml溶液中的效价值后，即可换算出该瓶装内FSH的效价值。每只鼠注入总剂量需分作五次注射，每天注射两次。在常温条件下，稀释后的FSH容易失活，效价降低。因此在注射期间的FSH溶液应在低温下保存。在测试中，每瓶FSH准确取5ml生理盐水稀释作为母液，于0-5下存放。用FSH母液为小白鼠作五次注射，故每次注射剂量应是总剂量的五分之一。因此取配制好的母液0.2ml加生理盐水0.8ml，经一次稀释成工作液，再取0.1ml工作液，按下表所示加入不同量的生理盐水，即可配制成不同浓度的测试组。加生理盐水（ml）溶液量（ml）溶液浓度注射鼠数（只）母液/只鼠（ml）Mu/ml1.11.51.92.32.73.13.53.94.34.71.21.62.02.42.83.23.63.64.44.81/121/161/201/241/281/361/361/401/441/4855555555551/601/801/1001/1201/1401/1601/1801/2001/2201/2406080100120140160180200200240一瓶装的FSH经1ml生理盐水稀释成母液，可配制成10个测试组，为50只小白鼠注射。2、小白鼠称重分组各测试组小白鼠组内体重的差异不得超过2g，将小白鼠分为5组，每组5只，分别编号，其中一组为对照组，注射同样剂量的生理盐水。其余四组为测试不同浓度样品的测试组。3、注射将稀释好的药剂分别给各组的小白鼠腹部皮下注射0.2ml，对照组注射生理盐水，注意注射量力求准确，不得使药液注射胸腔或腹腔或逸出体外。4、剖检于注射药液后7276小时，先用颈椎脱臼法或撞击头部法处死小白鼠，用图钉将小白鼠固定于解剖板上，用剪刀剪开腹腔，将子宫卵巢剥离取出，观察子宫增大情况。5、效价确定将各组子宫与对照组比较，每组5只小白鼠中有3只或3只以上子宫增大一倍以上，则定为阳性反应。根据各测试组中呈阳性反应的最低浓度组效价值，换算出被测样品中PMSG（或FSH）的小白鼠单位。假设稀释液中PMSG浓度为1/x，若稀释后浓度在1/x以上各组均呈阳性反应，则1/x浓度的测试组为呈阳性反应的最低浓度。实际注入鼠体内的供试品药液量为1/x1/5ml=1/5x ml，则1ml供试品药液中含有的生物效价为5x小白鼠单位（Mu）。3 / 3