妊娠期糖尿病孕妇血清miR-16-5p、胎盘组织FGF21 mRNA的表达及意义.pdf

论著妊娠期糖尿病孕妇血清m i R p、胎盘组织F G F mRNA的表达及意义宋小玉姜清英(新乡医学院第三附属医院妇产科,河南新乡 ;封丘县妇幼保健院妇产科,河南封丘 )摘要【目的】探讨妊娠期糖尿病(G DM)孕妇血清m i R p、胎盘组织成纤维细胞生长因子(F G F )mR NA的表达及意义.【方法】选取 年月至 年月新乡医学院第三附属医院收治的 例G DM患者(观察组),另 选 取 在 新 乡 医 学 院 第 三 附 属 医 院 定 期 产 检 的 例 健 康 孕 妇(对 照 组).比 较 两 组 外 周 血m i R p、胎盘组织F G F 表达水平,分析G DM发病的影响因素、G DM患者m i R p与F G F 表达的相关性及m i R p对G DM发病的预测价值.【结果】观察组m i R p相对表达量、F G F mR NA相对表达量高于对照组(P).L o g i s t i c多因素回归分析显示:年龄、孕前体重指数、m i R p相对表达量、F G F mR NA相对表达量是G DM发病的影响因素(P).P e a r s o n相关性分析显示:G DM患者m i R p相对表达量与胎盘组织F G F mR NA相对表达量呈正相关(P).受试者工作特征(R O C)曲线分析结果显示:外周血m i R p相对表达量预测G DM发生的灵敏度为 ,特异度为 ,AU C为 .【结论】m i R p、F G F mR NA表达与G DM发病有关,G DM患者外周血m i R p与胎盘组织F G F mR NA表达呈正相关,m i R p预测G DM发病的效能良好.关键词糖尿病,妊娠;微R NA s/血液;成纤维细胞生长因子E x p r e s s i o na n dS i g n i f i c a n c eo fm i R pa n dF G F m R N Ai nP a t i e n t sw i t hG e s t a t i o n a lD i a b e t e sM e l l i t u sS ONG X i a o y u,J I ANG Q i n g y i n g(D e p a r t m e n t o f O b s t e t r i c s a n d G y n e c o l o g y,T h e T h i r dA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fX i n x i a n gM e d i c a lC o l l e g e,X i n x i a n gH e n a n )A b s t r a c t【O b j e c t i v e】T oi n v e s t i g a t et h ee x p r e s s i o na n ds i g n i f i c a n c eo fs e r u m m i R pa n dp l a c e n t a l f i b r o b l a s tg r o w t h f a c t o r (F G F )m R N Ai np r e g n a n tw o m e nw i t hg e s t a t i o n a l d i a b e t e sm e l l i t u s(G DM)【M e t h o d s】At o t a l o f G DMp a t i e n t sa d m i t t e dt ot h eT h i r dA f f i l i a t e dH o s p i t a lo fX i n x i a n gM e d i c a lC o l l e g ef r o mJ u l y t oF e b r u a r y w e r e s e l e c t e d a s t h e o b s e r v a t i o ng r o u p,a n d h e a l t h yp r e g n a n tw o m e n a d m i t t e d t o t h eT h i r dA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fX i n x i a n gM e d i c a lC o l l e g ed u r i n g t h e s a m ep e r i o dw e r e s e l e c t e da s t h e c o n t r o l g r o u p T h e c l i n i c a l d a t a s u c ha s t h e e x p r e s s i o no fm i R p i np e r i p h e r a l b l o o da n dt h e e x p r e s s i o no fF G F i np l a c e n t a l t i s s u e o f t h e t w og r o u p sw e r e c o l l e c t e d T h e f a c t o r s a f f e c t i n g t h e i n c i d e n c e o fG DMw e r e a n a l y z e d T h e c o r r e l a t i o nb e t w e e nm i R p a n dF G F e x p r e s s i o n i nG DMp a t i e n t s i nt h e s t u d yg r o u pw a s a n a l y z e d T h ev a l u eo fm i R p i np r e d i c t i n g t h eo c c u r r e n c eo fG DM w a s a n a l y z e d【R e s u l t s】T h e r e l a t i v e e x p r e s s i o no fm i R p a n dF G F m R N Ai n t h e o b s e r v a t i o ng r o u pw e r e h i g h e r t h a n t h o s e i n t h e c o n t r o l g r o u p(P )L o g i s t i cm u l t i v a r i a t e r e g r e s s i o n a n a l y s i s s h o w e d t h a t a g e,p r e p r e g n a n c yb o d ym a s s i n d e x,r e l a t i v ee x p r e s s i o no fm i R pa n dt h e r e l a t i v e e x p r e s s i o no fF G F m R N Aw e r e i n d e p e n d e n t f a c t o r s a f f e c t i n g t h e i n c i d e n c eo fG DM(P )P e a r s o nc o r r e l a t i o na n a l y s i ss h o w e dt h a t t h er e l a t i v ee x p r e s s i o no fm i R pi nG DMp a t i e n t sw a sp o s i t i v e l yc o r r e l a t e dw i t ht h er e l a t i v ee x p r e s s i o no fF G F m R N Ai np l a c e n t a l t i s s u e(P )T h er e s u l t so fR O Cc u r v ea n a l y s i s s h o w e d t h a t t h e s e n s i t i v i t y o f t h e r e l a t i v e e x p r e s s i o no fm i R p i np e r i p h e r a l b l o o d t op r e d i c t t h e o n s e t o fG DM w a s ,t h e s p e c i f i c i t yw a s ,a n d t h eA U Cw a s 【C o n c l u s i o n】T h e e x p r e s s i o n s o fm i R p a n dF G F m R N Aa r e r e l a t e d t o t h e p a t h o g e n e s i s o fG DM T h e e x p r e s s i o no fm i R p i np e r i p h e r a l b l o o do fG DMp a t i e n t si sp o s i t i v e l y c o r r e l a t e dw i t h t h e e x p r e s s i o no fF G F i np l a c e n t a l t i s s u e T h e e x p r e s s i o no fm i R ph a s a g o o d e f f e c t o np r e d i c t i n gt h ep a t h o g e n e s i so fG DMK e yw o r d sD i a b e t e s,G e s t a t i o n a l;M i c r o R NA s/B L;F i b r o b l a s tG r o w t hF a c t o r s 中图分类号R 文献标识码Ad o i:/j i s s n 文章编号 ()医学临床研究 年月第 卷第期JC l i nR e s,M a r ,V o l ,N o 妊娠期糖尿病(g e s t a t i o n a ld i a b e t e sm e l l i t u s,G DM)是一种常见的妊娠并发症,临床多表现为妊娠期间不同程度的糖耐量紊乱 ,其可导致巨大儿、流产、早产等多种不良妊娠结局.有研究显示,G DM发病机制复杂,可能与胰岛细胞功能缺陷、遗传、环境等多因素有关 .已有研究指出,具有重要功能的基因表观遗传学机制可能参与包括代谢紊乱在内的各种疾病的发生、发展.微小R NA(m i c r o R NA,m i R NA)是主要的表观遗传调节因子,通过转录后基因调控,调节各种生理过程.有研究显示,G DM患者血液中的m i R p异常上调.成纤维细胞生长因子(f i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o r,F G F )作为代谢性激素,与G DM的发生密切相关,但关于F G F 在胎盘组织中的表达情况尚未有明确定 论 .本研 究 分 析m i R p、F G F 在G DM患者中的表达及其意义,为临床诊治G DM提供新的思路.资料与方法一般资料选取 年月至 年月新乡医学院第三附属医院收治的 例G DM患者(观察组),另选取在新乡医学院第三附属医院定期产检的 例健康孕妇(对照组).纳入标准:观察组符合 妊娠合并糖尿病诊治指南()中的G DM诊断标准;单胎;自然受孕;孕周 周.排除标准:合并甲亢、恶性肿瘤、胎盘早剥、胎盘前置、胎盘植入等;合并免疫缺陷、传染性疾病、血液系统疾病及重要脏器功能障碍者;伴有精神疾病、认知功能障碍、糖尿病病史等;胎儿畸形或先天性染色体异常;生殖器官畸形;伴有高渗昏迷、酮症酸中毒、严重贫血、妊娠期高血压者;既往有吸毒史、药物滥用史者.本研究已获得医院医学伦理委员会审批通过,且所有入选对象对研究过程均知情同意.方法收集基本资料收集两组基本资料,包括年龄、孕前体重指数、直系亲属糖尿病史、甲状腺病史、避孕药服用史、日运动时间、喜食甜食情况、甘油三酯(T G)、总 胆 固 醇(T C)、高 密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇(HD L C)、低密度脂蛋白胆固醇(L D L C)、丙氨酸氨基转氨酶(A L T)、天门冬氨酸氨基转氨酶(A S T)、外周血m i R p相对表达量,孕期增重及胎盘组织中F G F mR NA相对表达量.外周血m i R p相对表达量检测分娩前采集两组空腹静脉血 m L,离心收集血清,采用Q I A C E N R N e a s y M i n i试 剂 盒 法 提 取 血 清 中 总R NA,采用R NA i s o f o rS m a l lR NA试剂(宝生物工程大连有限公司)分离m i R NA,反转录成c D NA,采用实时荧光定量P C R(美国A B I F a s tR e a l T i m e P C R S y s t e m P C R仪)检 测 外 周 血 中m i R p相对表达量,反应体系 L,反应条件:预变性 m i n,s,s,s,共 个循环.内参选用U,扩增结束后绘制溶解曲线,以C T值为基础,计算外周血m i R p相对表达量,P C R引物序列见表.表P C R引物序列表名称引物序列()U 正向:G C T C C C C G G C T T C G G C C T G C G G反向:G G C G T C C G G C G C C G C G G C T G G C Cm i R p正向:G C G G C T G C C G TAT G C G G G C C G C反向:G G G C G G C G GA T T C G C T C G G T T G C胎盘组织中F G F mR NA相对表达量测定无菌条件下取距分娩胎盘母体面边缘约c m的胎盘组织,剪成约c mc mc m组织块,无菌生理盐水洗涤,于 条件下保存.T R I z o l试剂提取细胞总R NA,使用m i c r o R NAI s o l a t i o nK i t试剂盒(美国B i o R a d公司)分离R NA,采用S u p e r s c r i p tR TK i t试剂盒(上海远慕生物科技有限公司)反转录成c D NA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(q R T P C R)检测胎盘组织中F G F mR NA相对表达量.以U 为内参对照,计算胎盘组织中F G F mR NA相对表达量,引物序列见表.表q R T P C R引物序列名称引物序列()F G F mRNA正向:G T G C G G C C T C G T T C G G C C G G T C G反向:G C C G G C C T T G C G C G G G G G G G C G CU 正向:G C G G C T G T C G G C G G G C C G C G C G C C G反向:G T G C G G T G C T T G G C T G C C C G C G G G G C统计学分析采用S P S S 统计学软件处理所有数据,计量资料以均数标准差(xs)表示,采用t检验;计数资料以构成比或率()表示,采用检验;用P e a r s o n分析相关性;L o g i s t i c多因素分析G DM发 病 的 影 响 因 素;采 用 受 试 者 工 作 特 征(R O C)曲线分析外周血m i R p的相对表达量对G DM发生的预测价值.P 为差异有统计学意义.医学临床研究 年月第 卷第期JC l i nR e s,M a r ,V o l ,N o 结果两组基本资料比较两组直系亲属糖尿病史、甲状腺病史、避孕药服用史、日运动时间、喜食甜食占比、HD L C、L D L C、A L T、A S T比较,差异均无统计学意义(P);观察组患者年龄、孕前体重指数、T G、T C、m i R p相对表达量、F G F mR NA相对表达量、孕期增重高于对照组(P),具体见表.表两组基本资料比较基本资料观察组(n )对照组(n)t/P年龄(岁)孕前体重指数 k g/m(例,)()()直系亲属糖尿病史(例,)()()甲状腺病史(例,)()()避孕药服用史(例,)()()日运动时间(m i n)喜食甜食(例,)()()T G(mm o l/L)T C(mm o l/L)HD L C(mm o l/L)L D L C(mm o l/L)A L T(U/L)A S T(U/L)m i R p相对表达量 孕期增重(k g)F G F mR NA相对表达量 L o g i s t i c多因素分析G DM发病的影响因素以是否发生G DM为因变量(否,是),年龄、孕前体重指数、T G、T C、m i R p相对表达量、孕期增重、F G F mR NA相对表达量为自变量进行L o g i s t i c回归分析,结果显示:年龄、孕前体重指数、m i R p相对表达量、F G F mR NA相对表达量是G DM发病的影响因素(P),见表.表L o g i s t i c多因素分析G DM发病的影响因素因素bS bW a l dPO R C I年龄 孕前体重指数 m i R p相对表达量 F G F mRNA相对表达量 G DM患者m i R p与F G F 表达的相关性分 析P e a r s o n相 关 性 分 析 显 示:G DM患 者m i R p相对表达量与胎盘组织F G F mR NA相对表达量呈正相关(r ,P ),具体见图.外周血m i R p相对表达量 对G DM发生的预测 价 值R O C曲 线 分 析 结 果 显 示:外 周 血m i R p相对表达量预测G DM发生的灵敏度为 (C I:),特 异 度 为 (C I:),AU C为 (C I:),见图.图G DM患者m i R p与F G F mR NA表达的相关性散点图图m i R p相对表达量预测G DM发生的R O C曲线图讨论女性在妊娠过程中会产生大量抵抗胰岛素活性的激素,如孕酮、雌激素、胰岛素酶等,其与靶组织结合后可降低胰岛素敏感性,从而导致患者出现胰岛素抵抗状态,机体通过增加胰岛素分泌和释放来缓解胰岛素水平的相对不足,从而形成高胰岛素血症,当代偿性分泌的胰岛素无法调控血糖水平时,则会出现糖耐量异常,进而发展为G DM.G DM通常在孕 周使用口服葡萄糖耐量试验进行检查,但临床仍需要寻求与G DM发病有关的生物学诊断标志物,对G DM进行早期诊治,进而改善G DM孕妇妊娠结局.本研究结果显示:m i R p相 对表达量、年龄、孕前体重指数、F G F mR NA相 对表达量是G DM发 病 的 影 响 因 素,提 示m i R p、F G F mR NA表达与G DM发病有关.m i R NA在细胞内稳定存在,可通过完全和不完全碱基配对与靶基因结合,转录后可调节多个基因的表达使靶基因降解或抑制靶基因翻译,从而发挥调控功能,m i R NA可通过识别目标mR NA的 非翻译区末端的非必要互补序列来与许多基因结合,控制基因表达并影响细胞代谢、增殖、D NA修复和细胞凋亡等过程.由医学临床研究 年月第 卷第期JC l i nR e s,M a r ,V o l ,N o 于F G F 在调节体内糖代谢中的重要作用,其在G DM中的潜在作用近年来逐渐受到关注,G DM患者妊娠 周后F G F 可异常增加,与G DM发病密切相关.在型糖尿病患者中,F G F 可降低血糖并调节血脂,提高胰岛素敏感性并改善胰岛细胞分泌和增殖,且不会引起低血糖.m i R p是胰岛素信号通路中有效的相关调节分子之一,m i R p的靶基因编码胰岛素受体底物蛋白、及胰岛素受体本身,这些蛋白质是胰岛素信号通路中的关键因素,其水平异常变化可导致胰岛素抵抗和代谢紊乱,从而引起G DM.靶向m i R p的基因参与胰腺细胞增殖和凋亡,F G F 可通过促进葡萄糖转运蛋白表达影响葡萄糖的摄取,其又与胰岛素敏感性、胰岛细胞分泌和增殖有关,笔者认为m i R p可能通过调控F G F 表达介导G DM发病.本研究P e a r s o n相关性分析显示:G DM患者m i R p相对表达量与胎盘组织F G F mR NA相对表达量呈正相关,提示G DM患者m i R p与F G F 表 达 有 关,m i R p可 能 通 过 调 控F G F 表达参与G DM的发病机制.R O C曲线分析结果显示:外 周 血m i R p相 对 表 达 量 预 测G DM发生的灵敏度为 ,特异度为 ,AU C为 ,说明外周血m i R p预测G DM发病的效能良好.参考文献H I L L I E RTA,P E D U L AKL,O GA S AWA R AKK,e ta lAp r a g m a t i c,r a n d o m i z e dc l i n i c a l t r i a lo fg e s t a t i o n a ld i a b e t e ss c r e e n i n gJNE n g lJM e d,():YOU HX,HUJ,L I UY,e t a l R i s ko f t y p e d i a b e t e sm e l l i t u sa f t e rg e s t a t i o n a ld i a b e t e sm e l l i t u s:as y s t e m a t i cr e v i e w&m e t a a n a l y s i sJI n d i a nJ M e dR e s,():H I L LM,P AR Z E K A,I M J KP,e ta l S t e r o i d s,s t e r o i da s s o c i a t e ds u b s t a n c e sa n dg e s t a t i o n a ld i a b e t e s m e l l i t u sJP h y s i o lR e s,(S u p p l):OUYANG H,A L MUR E I S H A,WU N R e s e a r c hp r o g r e s so fm e t f o r m i n i ng e s t a t i o n a ld i a b e t e sm e l l i t u s:an a r r a t i v er e v i e wJA n nP a l l i a tM e d,():T R I V E T T C,L E E SZJ,F R E EMAN DJ A d i p o s et i s s u ef u n c t i o ni nh e a l t h yp r e g n a n c y,g e s t a t i o n a ld i a b e t e sm e l l i t u sa n dp r e e c l a m p s i aJE u rJC l i nN u t r,():王停停,苏萍,孙晓茹,等 D NA甲基化介导BM I对胰岛素妊娠期糖尿病的中介效应J中华疾病控制杂志,():J U C HN I C KAI,KU ZM I C K IM I n f l u e n c e o fm i RNA s i ng e s t a t i o n a ld i a b e t e s m e l l i t u s d e v e l o p m e n tJG i n e k o l P o l,():S R E N S E NAE,VANP O P P E L M N M,D E S OY EG,e ta l T h ep r e d i c t i v ev a l u eo fm i R ,aa n d f o r e a r l y i d e n t i f i c a t i o no fg e s t a t i o n a lD i a b e t e s:an e s t e da n a l y s i so ft h eD A L I c o h o r tJC e l l s,():J I AJ,WE IWP,YUF,e t a l C i r c u l a t i n g l e v e l s o f f i b r o b l a s tg r o w t h f a c t o r i ng e s t a t i o n a l d i a b e t e sm e l l i t u s:am e t a a n a l y s i s tJE n d o c rJ,():L IYY,L ID M,C HE N GXB T h ea s s o c i a t i o nb e t w e e ne x p r e s s i o no fl n c R NA si n p a t i e n t s w i t h G DMJE n d o c rC o n n e c t,():中华医学会妇产科学分会产科学组,中华医学会围产医学分会妊娠合并糖尿病协作组妊娠合并糖尿病诊治指南()J中国实用乡村医生杂志,():MOX,GA IT O B ER,T AKAHA S H IY,e t a l E c o n o m i c e v a l u a t i o n so fg e s t a t i o n a ld i a b e t e sm e l l i t u ss c r e e n i n g:as y s t e m a t i c r e v i e wJJE p i d e m i o l,():邓芬,朱贝贝,黄锟,等不同妊娠期糖尿病诊断标准对不良妊娠结局的预测能力比较J现代预防医学,():张瑞,周翔海,蔡晓凌,等不同病程型糖尿病患者血清成纤维细胞生长因子 与代谢指标的相关性研究J中国糖尿病杂志,():(本文编辑:邓丽萍)收稿日期 (上接第 页)Z HAN GXJ,C HE NL,S HE N GJP,e ta l T h ea s s o c i a t i o no f a u t o a n t i b o d i e s i nh y p e r t h y r o i dh e a r t d i s e a s e c o m b i n e dw i t hp u l m o n a r yh y p e r t e n s i o nJI n tJE n d o c r i n o l,():WANG Q,L IC,D IS,e ta l C l i n i c a le f f i c a c ya n ds a f e t yo ft r a d i t i o n a lC h i n e s ep a t e n t m e d i c i n ef o rh y p e r t h y r o i d h e a r td i s e a s e:s t u d yp r o t o c o l f o ras y s t e m a t i cr e v i e wa n dm e t a a n a l y s i sJM e d i c i n e,():K I M H,P A R KJT,L E EJ,e ta l T h ed i f f e r e n c eb e t w e e nc y s t a t i nC a n dc r e a t i n i n e b a s e de G F Ri sa s s o c i a t e dw i t ha d v e r s ec a r d i o v a s c u l a ro u t c o m e i np a t i e n t sw i t hc h r o n i ck i d n e yd i s e a s eJA t h e r o s c l e r o s i s,():S C HE I D T MJ,HOHE NWA L T E REJ,P I N C HO TJW,e ta l F Ta p p r o p r i a t e n e s sc r i t e r i ar a d i o l o g i cm a e m e n to fu r i n a r yt r a c to b s t r u c t i o nJJAmC o l lR a d i o l,(S):S S WON G YOU C HE ON GJ J,N I KO L A I D I SP,KHA T R IG,e ta l F Ta p p r o p r i a t e n e s sc r i t e r i ar e n a l f a i l u r eJJAmC o l lR a d i o l,():S S (本文编辑:邓丽萍)收稿日期 医学临床研究 年月第 卷第期JC l i nR e s,M a r ,V o l ,N o