60_g_L乙基多杀菌素悬浮剂的高效液相色谱分析方法_张小雪.pdf

农 药AGROCHEMICALS张小雪,常海龙,林威,等.60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂的高效液相色谱分析方法J.农药,2023,62(7):496-498.doi:10.16820/j.nyzz.2023.2085收稿日期：2023-03-01，修返日期：2023-03-18基金项目：江西省现代水稻产业技术体系绿色防控岗位计划项目(9021108852)作者简介：张小雪(2000)，女，陕西商洛人，硕士，主要从事农药残留分析研究。E-mail：。通信作者：李保同(1966)，男，江西崇仁人，教授，博士生导师，主要从事农药学研究。E-mail：。60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂的高效液相色谱分析方法张小雪1，常海龙1，林 威1，肖 健1，李保同1，葛洪滨2(1.江西农业大学 国土资源与环境学院，南昌 330045；2.南昌市农业科学院，南昌 330200)摘要：目的采用HPLC法测定60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂中有效成分含量。方法使用Poroshell 120 EC-C18色谱柱，检测波长245 nm；乙腈-0.05乙酸铵水溶液(体积比为982)为流动相；流速1 mL/min；40 的柱温；10 L样本检测容量的条件下对待测样品中乙基多杀菌素有效成分的含量进行检测。结果方法的线性相关系数为0.9998，标准偏差为0.03，变异系数为0.01，平均回收率为98.61%。结论该方法操作简便，具有较高的准确度和精密度，适用于分析60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂含量。关键词：乙基多杀菌素；悬浮剂；高效液相色谱；分析方法中图分类号：TQ450.7文献标志码：A文章编号：1006-0413(2023)07-0496-03Analysis of spinetoram 60 g/L SC by HPLCZHANG Xiaoxue1,CHANG Hailong1,LIN Wei1,XIAO Jian1,LI Baotong1,GE Hongbin2(1.College of Land Resources and Environment,Jiangxi Agricultural University,Nanchang 330045,China;2.Nanchang Academy of Agricultural Sciences,Nanchang 330200,China)Abstract:Aims To determine the content of active ingredient in spinetoram 60 g/L suspension concentrate by HPLC.Methods The determination of spinetoram active ingredient in the sample was performed on a Poroshell 120 EC-C18column at 245 nm with a mobile phase of acetonitrile-0.05%ammonium acetate aqueous solution(982,by vol),a flowrate of 1 mL/min,a column temperature of 40,and a sample volume of 10 L.Results The linear correlationcoefficient of the method was 0.9998,the standard deviation was 0.03%,the coefficient of variation was 0.01%,and themean recovery was 98.61%.Conclusions The method is easy to operate,has high accuracy and precision,and issuitable for the analysis of spinetoram 60 g/L suspension content determination.Key words:spinetoram;SC;HPLC;analysis method乙基多杀菌素(spinetoram)是美国陶氏益农公司研制的一种具有广谱性、高效性、低毒、低残留的新型生物农药1。乙基多杀菌素包含2种成分：乙基多杀菌素-L和乙基多杀菌素-J，具有胃毒及触杀作用，通过对昆虫的神经系统产生干扰，导致其对信息的传导反应迟钝，从而影响其正常神经活动，最终导致死亡，但对靶标作物中大部分的益虫没有毒害作用2-5。在小剂量下，对一些农业有害生物如鳞翅目幼虫(Lepidoptera)、蓟马(Thripsvulgatissimus Haliday)、菜蛾(Plutella maculipennis)等均有良好的控制效果。目前，关于其制剂分析方法在国内外鲜有报道。本文以乙基多杀菌素为研究对象，参考残留分析的检测方法6-10，采用高效液相色谱分析方法检测60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂中有效成分含量，该方法具有操作简便、精密度高、准确度高、适用范围广等优点，可以应用于乙基多杀菌素的定量测定。1实验部分1.1仪器与试剂1.1.1仪器安捷伦1260型代高效液相色谱仪；Poroshell120EC-C18(150 mm4.6 mm，4-Micron)色谱柱；有机针式过滤器(过滤膜孔径为0.22 m)。1.1.2试剂乙基多杀菌素标准品(德国Dr.Ehrensorfer公司)；60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂(美国Dow AgroSciences公司)；甲醇、乙腈、0.05%乙酸铵均为色谱纯。1.2高效液相色谱条件检测波长245 nm；乙腈-0.05乙酸铵水溶液(体积比为982)作为流动相；流速1 mL/min；40 的柱温；样本检测容量为10 L。第62卷第7期2023年7月Vol.62,No.7Jul.2023第7期1.3测定步骤1.3.1标样溶液配制称取0.0100 g(精确至0.0001 g)乙基多杀菌素标准品，置于100 mL容量瓶内。加入20 mL乙腈溶解，利用超声波传感器水浴加热法助溶，当溶液在常温下变得澄清后，再用乙腈溶液将其定容至刻度，混合均匀，得到100 mg/L的标准溶液，放入4 冰箱中保存。1.3.2试样溶液配制称取0.1667 g(精确至0.0001 g)乙基多杀菌素悬浮剂，置于100 mL的容量瓶内。加入20 mL乙腈溶解，利用超声波传感器水浴加热法助溶，当溶液在常温下变得清澄后，再用乙腈溶液将其定容至刻度，混合均匀，得到100 mg/L的试样溶液，放入4 冰箱中保存。1.3.3仪器检测用一次性注射器吸取配制好的标准溶液0.5 mL，通过有机针式过滤器过滤，注入进样瓶中，在1.2的高效液相色谱条件下，上机进行检测，待仪器数值平稳后再进样，对标样溶液测定数针，结果表明当2次相邻进样的峰面积变化小于1.2%后，按照标样、试样、试样、标样溶液的顺序进样测定，测定结果见图1。1.4计算记录测得的乙基多杀菌素标样溶液的峰面积和试样溶液的峰面积，并分别求得平均值，按照下式计算试样中乙基多杀菌素质量分数(W2，%)。W2=A2M1W1A1M2式中：A1为乙基多杀菌素标样峰面积，A2为试样中乙基多杀菌素峰面积，M1为乙基多杀菌素标样称样量(g)，M2为试样中乙基多杀菌素称样量(g)，W1为乙基多杀菌素标样的质量分数(%)。2结果与讨论2.1检测波长的选择以100 mg/L的乙基多杀菌素样品为研究对象，用一次性注射器吸取一定量的标样溶液，通过有机滤头注入进样瓶中，采用UV光谱仪对200400 nm波段进行UV分析，获得UV吸收光谱。在此波长范围内，对乙基多杀菌素进行了扫描测量，乙基多杀菌素在220250 nm之间有最大波长吸收，并且主峰和杂峰各个成分可以被充分的分离，并且具有最好的峰形和最大的峰面积。故选择245 nm为其检测波长。2.2流动相的确定为了获得最优的峰形及运行时间，以100 mg/L乙基多杀菌素溶液为研究对象，采用甲醇-0.05%乙酸铵溶液、乙腈-0.05%乙酸铵溶液及甲醇-乙腈-0.05%乙酸铵溶液体系，测定乙基多杀菌素标准品的出峰时间及峰面积。甲醇-0.05%乙酸铵溶液与乙腈-0.05%乙酸铵溶液相比，其峰的保留时间较大，且峰面积偏小；与乙腈-0.05%乙酸铵溶液相比，甲醇-乙腈-0.05%乙酸铵溶液的出峰时间较长，峰面积较小，峰形对称性较差，容易检测出很多干扰峰，从而影响了结果的准确性。选择乙腈-0.05%乙酸铵溶液作为流动相其峰形较好，分布均匀，峰面积较大。在此基础上，选择体积比为982的乙腈-0.05%乙酸铵溶液的体系作为流动相。为了使杂质峰与主峰更好的分离，减少对结果的影响，峰形更佳，接着又调整了乙腈和0.05%乙酸铵溶液的体积比。结果见表1。由表1可以看出：当乙腈与0.05%乙酸铵溶液体积比为982时，峰形最好，有最大的峰面积和最短的出峰时间。对方法体系中的流速进行了再调整，将1 mL/min与注：A为60g/L乙基多杀菌素悬浮剂；B为乙基多杀菌素标样。图1乙基多杀菌素色谱图乙腈与0.05%乙酸铵溶液体积比保留时间/min峰面积8559.6407839.2490107.6207822.769557.7727880.899825.7518316.35表1乙腈-0.05%乙酸铵溶液体积比对保留时间及峰面积的影响张小雪，等：60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂的高效液相色谱分析方法497农 药 AGROCHEMICALS第卷620.8 mL/min的流速进行对比，2者比较而言，在前者流速条件下色谱图的峰度更好，且在多次测试后色谱结果较稳定，因此，选择流速1 mL/min作为色谱条件。2.3线性相关性的测定将乙基多杀菌素标样溶液质量浓度设为0.1、1、5、10、50、100 mg/L 6个梯度，用上述同种高效液相色谱条件，上机检测，采用标准样校正法进行定量分析。将横轴x设为乙基多杀菌素标样溶液的质量浓度，将纵轴y设为乙基多杀菌素标准溶液的色谱峰面积，并将得到的结果绘制成标准曲线图。通 过 对 数 据 进 行 拟 合，得 到 线 性 回 归 公 式y 76.509x+9.0646，R20.9998，在0.1100 mg/L质量浓度范围内，质量浓度与峰面积线性关系较好，可以用来分析和检测60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂。2.4分析方法的精密度测定根据以上HPLC条件，取5份相同质量浓度60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂作为样品，待仪器数值平稳，上机检测，得到测定结果，通过计算得到乙基多杀菌素悬浮剂的标准偏差和变异系数，数据结果见表2。由表2可以看出：60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂的标准偏差是0.03，变异系数是0.01%，变异系数符合CIPAC的要求(1.71%)，表明本试验的精密度较高。2.5分析方法的准确度测定称取5份等量的乙基多杀菌素悬浮剂试样分别放入不同的标准容量瓶中，然后按顺序添加相应量的乙基多杀菌素标准品，经搅拌摇匀后定容，待四元泵压力及基线趋于稳定后，再使用高效液相色谱仪进行测定，结果见表3。由表3可以看出：在此高效液相色谱条件下，乙基多杀菌素的回收率在95.87%101.58%之间，其中平均回收率是98.61%。3结论建立了一种通过HPLC技术测定60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂中有效成分的定量分析方法。在波长245 nm进行检测；以乙腈和0.05乙酸铵溶液(体积比为982)作为流动相；流速1 mL/min；40 的柱温；样本检测容量为10 L。该方法具有高精度、高准确度、可操作性强等优点，拟合良好，是定量检测分析60 g/L乙基多杀菌素悬浮剂中有效成分的理想方法。参考文献：1马丽,董现义,刘刚.乙基多杀菌素在我国蔬菜作物上的登记、应用及发展建议J.浙江农业科学,2020,61(10):2085-2087.2王天玉,林媚,平新亮,等.果园土壤中乙基多杀菌素的高效液相色谱分析方法J.农药,2019,58(3):196-198.3张晓燕,邓树华,黄卫,等.乙基多杀菌素的高效液相色谱测定J.粮食科技与经济,2013,38(1):37-39.4杨宝萍,韦红慧,韦元杰,等.乙基多杀菌素的液相色谱分析J.世界农药,2021,43(11):40-44.5吴琼,李建国,吕岱竹,等.超高效液相色谱法测定土壤中多杀菌素和乙基多杀菌素的残留J.农药学学报,2015,17(1):111-114.6王龙,卞传飞,刘浪,等.1%谷维菌素可溶液剂的高效液相色谱分析方法J.应用化工,2021,50(9):2619-2621.7高美珠,刘浪，李卫,等.5%三氟嘧磺草胺SC的高效液相色谱-串联质谱分析J.农药,2020,59(7):496-498.8常海龙,王龙,卞传飞,等.45%苯并烯氟菌唑 嘧菌酯WG的高效液相色谱分析方法J.应用化工,2023,52(1):300-302,308.9卞传飞,刘浪,高美珠,等.20%氟唑菌酰羟胺SC的高效液相色谱-质谱分析J.农药,2021,60(3):189-191.10 肖健,卞传飞,高美珠,等.0.02%二氢卟吩铁可溶粉剂的HPLC分析J.农药,2022,61(5):341-343,346.责任编辑：李新序号质量分数/%平均值/%标准偏差变异系数/%15.375.390.030.0125.3935.4445.3655.37表260 g/L乙基多杀菌素悬浮剂精密度测定序号添加量/mg实测值/mg回收率/%平均回收率/%10.010.009695.8798.6120.010.0102101.5830.010.009898.8340.010.009898.0550.010.009998.72表360 g/L乙基多杀菌素悬浮剂准确度测定498