SN∕T 1781-2023 （代替 SN∕T 1781-2006）进出口化妆品中咖@啡因的测定.pdf

I C S7 1.1 0 0.7 0C C SY4 2中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T1 7 8 12 0 2 3代替S N/T 1 7 8 12 0 0 6 进出口化妆品中咖啡因的测定D e t e r m i n a t i o n o f c a f f e i n e i n c o s m e t i c s f o r i m p o r t a n d e x p o r t 2 0 2 3-0 5-0 5发布2 0 2 3-1 2-0 1实施中华人民共和国海关总署发 布前 言本文件按照G B/T 1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。本文件代替了S N/T 1 7 8 12 0 0 6 进出口化妆品中咖啡因的测定 液相色谱法,与S N/T 1 7 8 12 0 0 6相比,除编辑性修改以外,主要技术内容变化如下:优化了液相色谱法的前处理方法,增加了样品的净化步骤;增加了液相色谱-质谱/质谱法。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国广州海关。本文件主要起草人:吴映璇、董洁、陈思敏、邵琳智、邹游、蓝草。本文件于2 0 0 6年首次发布,本次为第一次修订。S N/T1 7 8 12 0 2 进出口化妆品中咖啡因的测定1 范围本文件规定了进出口化妆品中咖啡因的液相色谱和液相色谱-质谱/质谱测定方法。本文件第一法适用于液态水基类、膏霜类、乳液类、香波类、固态散粉类、唇膏类等进出口化妆品中咖啡因的液相色谱法测定;第二法适用于液态水基类、膏霜类、乳液类、香波类、固态散粉类、唇膏类等进出口化妆品中咖啡因的液相色谱-质谱/质谱法测定和确证。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。第一法 高效液相色谱法(H P L C法)4 方法提要试样采用甲醇-水-正己烷超声提取净化后,经高效液相色谱仪测定,外标法定量。5 试剂和材料除特殊注明外,所有试剂均为分析纯,水为G B/T 6 6 8 2规定的一级水。5.1 甲醇,色谱级。5.2 正己烷,分析纯。5.3 甲醇-水溶液:量取5 0 mL 甲醇和 5 0 mL水置于具塞三角瓶中,摇匀备用。5.4 咖啡因标准溶液(C o f f e i n):C A S:5 8-0 8-2;纯度大于9 5%。5.5 咖啡因标准储备液(5 0 0 m g/L):准确吸取适量咖啡因标准溶液(5.4),置于1 0 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,混匀。该溶液于0 4 保存。5.6 咖啡因标准中间液(1 0 m g/L):准确吸取适量咖啡因标准溶液(5.5),置于1 0 0 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,混匀。该溶液于0 4 保存。5.7 咖啡因标准工作液:准确移取咖啡因中间液(1 0 m g/L)(5.6)0.2 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、5 m L、1 0 m L至1 0 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得0.2 m g/L、0.5 m g/L、1.0 m g/L、1S N/T1 7 8 12 0 2 2.0 m g/L、5.0 m g/L、1 0 m g/L的系列标准工作溶液;于0 4 保存。5.8 滤膜:0.2 m,聚四氟乙烯滤膜。5.9 比色管:具塞,1 0 mL。5.1 0 离心管:具塞,1 5 mL,5 0 mL。6 仪器和设备6.1 高效液相色谱仪配紫外或二极管阵列检测器。6.2 超声波清洗仪。6.3 漩涡振荡器。6.4 高速离心机。7 测定步骤7.1 试样的处理7.1.1 液态水基类、膏霜类、乳液类和香波类化妆品称取试样约0.5 g(精确到0.0 0 1 g),置于1 0 mL具塞比色管中,加入8 mL甲醇(5.1),超声提取2 0 m i n,冷却至室温,用甲醇定容至刻度,混匀。准确吸取1 mL样品提取液至1 5 mL离心管中,加入1 m L水,涡旋振荡0.5 m i n。加入5 mL正己烷(5.2),涡旋振荡0.5 m i n,3 5 0 0 r/m i n 离心5 m i n。弃去上层正己烷,下层清液经滤膜过滤后,供液相色谱仪测定。7.1.2 固态散粉和唇膏等彩妆类化妆品称取试样约0.5 g(精确到0.0 0 1 g),置于5 0 mL 离心管中,加入2 0 mL正己烷,涡旋分散均匀后,准确加入2 0 mL甲醇水溶液(5.3),超声提取2 0 m i n,3 5 0 0 r/m i n 离心5 m i n。弃去上层正己烷,下层清液经滤膜过滤后,供液相色谱仪测定。7.2 测定7.2.1 液相色谱测定条件液相色谱参考条件如下:a)色谱柱:C1 8柱,5 m,4.6 mm(内径)2 5 0 mm,或相当者;b)流动相:甲醇+水,梯度洗脱,见表1;c)流速:1.0 mL/m i n;d)柱温:4 0;e)进样量:1 0 L;f)检测波长:2 7 5 n m;2S N/T1 7 8 12 0 2 表1 流动相梯度洗脱程序梯度时间/m i n甲醇/%水/%05 05 025 05 031 09 051 09 05.15 05 01 55 05 07.2.2 定量测定将标准工作溶液(5.7)与试样溶液按色谱条件(7.2.1)进行测定,以标准溶液浓度为横坐标,对应的峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线,根据峰面积对应标准工作曲线上的溶液浓度定量。试样溶液中待测物的响应值应在标准工作曲线的线性范围内,超出线性范围则应稀释后再进行分析。必要时,阳性样品需经液相色谱-质谱/质谱法进行确证试验。咖啡因的标准物质液相色谱图参见附录A.1。7.2.3 空白试验除不称取试样外,均按上述步骤进行。8 结果计算和表述用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中咖啡因的含量,计算结果须扣除空白值:Xi=(c-c0)Vm1 0 0 01 0 0 0(1)式中:Xi 试样中被测组分含量,单位为毫克每千克(m g/k g);c 由标准曲线得到的样液中被测组分的浓度,单位为微克每毫升(g/mL);c0 由标准曲线得到的空白试验中被测组分的浓度,单位为微克每毫升(g/mL);V 样液最终定容体积,单位为毫升(mL);m 最终样液所代表的试样质量,单位为克(g)。计算结果保留三位有效数字。9 定量限本方法的定量限为1 0 m g/k g。1 0 回收率化妆品中咖啡因的添加浓度及回收率数据见附录B.1。3S N/T1 7 8 12 0 2 第二法 液相色谱-质谱/质谱法(L C-M S/M S法)1 1 方法提要试样采用甲醇-水-正己烷提取净化后,离心,取清液稀释后供液相色谱-质谱/质谱仪测定,外标法定量。1 2 试剂和材料除特殊注明外,所有试剂均为分析纯,水为G B/T 6 6 8 2规定的一级水。无特别说明,其他试剂和材料的要求与5 一致。1 2.1 乙腈,色谱级。1 2.2 甲酸,色谱级。1 2.3 5 mm o l/L甲酸溶液:吸取9 6 L甲酸(1 2.2)至 5 0 0 mL水中,摇匀备用。1 2.4 咖啡因标准使用液(5 0 0 g/L):准确移取咖啡因标准中间液(5.6)2.5 mL至5 0 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。该溶液于0 4 保存。1 2.5 咖啡因标准工作液:分别准确移取咖啡因标准使用液(5 0 0 g/L)(1 2.4)0.2 mL、0.5 mL、1.0 m L、2.0 mL和5.0 mL至5 0 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得2.0 g/L、5.0 g/L、1 0 g/L、2 0 g/L和5 0 g/L的系列标准工作溶液,现配现用。1 3 仪器和设备除检测仪器按照1 3.1规定外,其他仪器和设备的要求与6一致。1 3.1 液相色谱-质谱/质谱仪:三重四级杆串联质谱仪,配电喷雾离子源(E S I)。1 4 测定步骤1 4.1 试样的处理1 4.1.1 液态水基类、膏霜类、乳液类和香波类化妆品称取试样约0.5 g(精确到0.0 0 1 g),置于1 0 mL具塞比色管中,加入8 mL甲醇(5.1),超声提取2 0 m i n,冷却至室温,用甲醇定容刻度,摇匀。准确吸取1 mL样品提取液至1 5 mL离心管中,加入1 m L水,涡旋振荡0.5 m i n。加入5 mL正己烷(5.2),涡旋振荡0.5 m i n,3 5 0 0 r/m i n 离心5 m i n。弃去上层正己烷,准确吸取1 mL下层清液至1 0 mL容量瓶中,用甲醇水溶液(5.3)稀释至刻度,摇匀。经滤膜过滤后,供液相色谱-质谱/质谱仪测定。1 4.1.2 固态散粉类和唇膏类等彩妆类化妆品称取试样约0.5 g(精确到0.0 0 1 g),置于5 0 mL 离心管中,加入2 0 mL正己烷(5.2),涡旋分散均匀后,准确加入2 0 mL甲醇水溶液(5.3),超声提取2 0 m i n,3 5 0 0 r/m i n 离心5 m i n。弃去上层正己烷,准确吸取1 m L下层清液至1 0 mL容量瓶中,用甲醇水溶液(5.3)稀释至刻度,摇匀。经滤膜过滤后,供液相色谱-质谱/质谱仪测定。4S N/T1 7 8 12 0 2 1 4.2 测定1 4.2.1 液相色谱-质谱/质谱条件由于不同设备存在差异,不能给出液相色谱-质谱/质谱仪的统一条件,以下条件经验证是适宜的:a)色谱柱:C1 8柱,2.1 mm(内径)1 0 0 mm,3 m,或相当者;b)流动相:乙腈-5 mm o l/L甲酸溶液,梯度洗脱,见表2;c)流速:0.2 5 mL/m i n;d)柱温:4 0;e)进样量:5 L;f)离子源:电喷雾离子源;g)扫描方式:正离子;h)检测方式:多反应监测(MRM);i)质谱/质谱参考条件:气帘气压力(C UR):1 7 2 k P a;电喷雾电压:5 5 0 0 V;离子源温度(T EM):6 5 0;雾化器压力(GA S 1):3 7 9 k P a;辅助气压力(G a s 2):3 7 9 k P a;多反应监测条件见表3。表2 流动相梯度洗脱程序梯度时间/m i n乙腈/%5 mm o l/L甲酸溶液/%01 09 00.51 09 049 555.59 555.5 11 09 01 01 09 0表3 咖啡因的多反应监测(MRM)条件化合物离子对m/z去簇电压D P/V碰撞室入口电压E P/V碰撞室出口电压C X P/V碰撞能量C E/V咖啡因1 9 5/1 3 8*4 981 02 51 9 5/1 1 04 981 02 3 注:“*”为定量离子。1 4.2.2 液相色谱-质谱/质谱测定和确证将标准工作溶液(1 2.5)按液相色谱-质谱/质谱条件(1 4.2.1)进行测定,以标准溶液浓度为横坐标,对应的峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线,根据峰面积对应标准工作曲线上的溶液浓度定量。试样溶液中待测物含量应在标准曲线的线性范围之内,超出线性范围则应稀释后再进行分析。在该条件下,咖啡因的多反应监测总离子流图见附录A.2。按照液相色谱-质谱/质谱条件测定试样处理溶液,如果试样中待测物质的色谱峰保留时间与标准溶液的一致(偏差在2.5%之内),定性离子对的相对丰度,是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示,应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致,相对丰度允许偏差不超过表 4规定的范围,则可判5S N/T1 7 8 12 0 2 断试样中存在对应的待测物。表4 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度5 0%2 0%5 0%1 0%2 0%1 0%允许的相对偏差2 0%2 5%3 0%5 0%1 4.2.3 空白试验除不加试样外,均按上述步骤进行。1 5 结果计算和表述用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中咖啡因的含量,计算结果须扣除空白值:Xi=(c-c0)Vm1 0 0 01 0 0 0(1)式中:Xi 试样中被测组分含量,单位为微克每千克(m g/k g);c 由标准曲线得到的样液中被测组分的浓度,单位为纳克每毫升(g/mL);c0 由标准曲线得到的空白试验中被测组分的浓度,单位为纳克每毫升(g/mL);V 样液最终定容体积,单位为毫升(mL);m 最终样液所代表的试样质量,单位为克(g)。计算结果保留三位有效数字。1 6 方法的定量限本方法的定量限为2.0 m g/k g。1 7 回收率咖啡因的添加浓度及回收率数据见附录B.2。6S N/T1 7 8 12 0 2 附 录 A(资料性)咖啡因标准溶液的液相色谱图和液相色谱-质谱/质谱多反应监测总离子流图图 A.1 咖啡因标准溶液的液相色谱图图 A.2 咖啡因标准溶液的液相色谱-质谱/质谱多反应监测总离子流图7S N/T1 7 8 12 0 2 附 录 B(资料性)化妆品中咖啡因的添加回收试验数据表B.1 化妆品中咖啡因的液相色谱法添加回收试验数据(n=6)基质添加水平(m g/k g)回收率范围(%)C V(%)爽肤水1 09 5.31 0 8.04.54 0 0 09 4.51 0 3.53.21 0 0 0 01 0 1.01 0 5.01.7乳液1 01 0 2.01 0 8.02.14 0 0 09 9.01 0 8.53.11 0 0 0 01 0 3.01 0 7.01.7眼霜1 09 8.51 0 9.03.44 0 0 01 0 0.31 0 5.51.91 0 0 0 01 0 8.01 1 0.00.7洗发水1 09 9.31 0 9.03.94 0 0 01 0 2.31 0 7.52.21 0 0 0 09 6.31 0 3.02.5眼影1 08 9.69 9.03.94 0 0 01 0 1.01 0 6.01.61 0 0 0 09 5.71 0 3.02.7粉饼1 09 3.59 6.41.24 0 0 01 0 3.31 0 6.01.11 0 0 0 01 0 5.01 1 4.03.1口红1 01 0 5.01 0 8.01.14 0 0 09 8.01 0 4.32.11 0 0 0 09 8.21 0 1.00.98S N/T1 7 8 12 0 2 表B.2 化妆品中咖啡因的液相色谱-质谱/质谱法添加回收试验数据(n=6)基质添加水平(m g/k g)回收率范围(%)C V(%)爽肤水21 0 0.01 0 4.51.7 91 01 0 0.01 0 9.03.44 0 0 09 9.31 0 4.32.41 0 0 0 01 0 5.01 0 9.01.4乳液21 0 0.01 0 7.52.5 51 01 0 5.01 0 9.01.54 0 0 09 4.51 0 4.83.81 0 0 0 01 0 5.01 0 8.01.0眼霜29 5.51 0 3.53.0 31 09 2.91 0 1.03.14 0 0 09 9.31 0 5.02.11 0 0 0 01 0 4.01 0 9.01.8洗发水29 5.51 0 2.52.7 31 01 0 1.01 0 6.01.74 0 0 09 8.01 0 5.02.91 0 0 0 01 0 5.01 0 9.01.4眼影28 9.09 6.03.0 21 09 2.39 7.51.94 0 0 01 0 2.51 0 6.81.41 0 0 0 09 9.61 0 1.00.6 7粉饼29 7.51 0 3.01.9 71 09 6.71 0 2.01.94 0 0 01 0 1.31 0 7.02.31 0 0 0 01 0 1.01 0 7.02.1口红29 3.01 0 1.02.8 71 09 2.81 0 5.04.54 0 0 09 1.2 59 4.51.51 0 0 0 09 4.11 0 8.05.89S N/T1 7 8 12 0 2 32021871 T/NS中华人民共和国出入境检验检疫行 业 标 准进出口化妆品中咖啡因的测定S N/T 1 7 8 12 0 2 3*中国海关出版社有限公司出版发行北京市朝阳区东四环南路甲1号(1 0 0 0 2 3)编辑部:(0 1 0)6 5 1 9 4 2 4 2-7 5 3 0中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本8 8 01 2 3 0 1/1 6 印张1 字数2 4千字2 0 2 3年1 1月第一版 2 0 2 3年1 1月第一次印刷印数 15 0 0*书号:1 5 5 1 7 59 8 9 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