组织化学染色省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

特殊染色在临床病理学中应用特殊染色在临床病理学中应用第1页染色意义和目标染色意义和目标 用染料对组织切片进行处理，使组织中不一样用染料对组织切片进行处理，使组织中不一样成份被染上对应颜色，产生不一样折射率，以利成份被染上对应颜色，产生不一样折射率，以利于光镜观察和分析。病理染色属于生物性染色范于光镜观察和分析。病理染色属于生物性染色范围。围。第2页 应用一些能与组织细胞化学成份特异性结合显色应用一些能与组织细胞化学成份特异性结合显色剂，显示组织或细胞正常结构或病理过程中出现异常剂，显示组织或细胞正常结构或病理过程中出现异常物质、病变及病原体等，称特殊染色（物质、病变及病原体等，称特殊染色（Special staining）。特殊染色（特殊染色（special staining）第3页染料和染色原理染料和染色原理一一、染料特点：、染料特点：组织病理学染料是生物学染色剂组织病理学染料是生物学染色剂对所染组织成份含有亲和力对所染组织成份含有亲和力染色剂中同时具备发色团和助色团才含有染色功染色剂中同时具备发色团和助色团才含有染色功效效发色团是使染料显色化学团（色原），一个染料发色团是使染料显色化学团（色原），一个染料由一个或多个发色团，染料颜色取决于发色团多由一个或多个发色团，染料颜色取决于发色团多少和强弱。少和强弱。助色团指使色原产生电离成为盐类，对被染物产助色团指使色原产生电离成为盐类，对被染物产生亲和力原子团生亲和力原子团第4页染料和染色原理染料和染色原理二二、染料分类、染料分类染料起源分类：天然和合成染料染料起源分类：天然和合成染料化学反应分类：碱性染料、酸性染料、中性染料化学反应分类：碱性染料、酸性染料、中性染料用途分类：用途分类：细胞核染料：苏木素，核固红，结晶紫等细胞核染料：苏木素，核固红，结晶紫等 细胞质染料：伊红，酸性复红，苦味酸等细胞质染料：伊红，酸性复红，苦味酸等 脂肪染料：油红脂肪染料：油红O，苏丹，苏丹III，苏丹，苏丹IV 纤维结缔组织染料：苦味酸，亮绿等纤维结缔组织染料：苦味酸，亮绿等第5页染料和染色原理染料和染色原理三三、染料原理、染料原理物理机制：物理机制：毛细管渗透作用：染色剂沿组织间微孔渗透到组织中。毛细管渗透作用：染色剂沿组织间微孔渗透到组织中。吸收或溶解作用：组织吸收或溶解染料而着色，如脂肪染吸收或溶解作用：组织吸收或溶解染料而着色，如脂肪染色色吸附作用：染料色素粒子浸润组织中，因分子引力，色素吸附作用：染料色素粒子浸润组织中，因分子引力，色素粒子被吸附而染色粒子被吸附而染色第6页比如脂肪染色比如脂肪染色:苏丹类染色剂在脂质中溶解度酒精中溶解度 溶解于酒精苏丹类染色剂与组织中脂质接触时，染色剂就从溶液中“转移”到脂质中，从而使脂质着色。第7页染料和染色原理染料和染色原理三三、染料原理、染料原理化学机制：化学机制：组织和细胞中含有碱性和酸性物质，分别与染料中阳离组织和细胞中含有碱性和酸性物质，分别与染料中阳离子和阴离子结合。子和阴离子结合。如如HE染色：细胞核主要由核酸组成，与碱性染料染色：细胞核主要由核酸组成，与碱性染料-苏木素苏木素结合，而胞浆主要由碱性物质组成，与酸性染料结合，而胞浆主要由碱性物质组成，与酸性染料-伊红结伊红结合。合。第8页l普通染色：又称常规染色，即指普通染色：又称常规染色，即指HE染色（染色（haematoxylin and eosin HE）l特殊染色：除特殊染色：除HE以外全部染色，显示特定组织结构和成以外全部染色，显示特定组织结构和成份。份。l单一染色：用一个染料进行染色，如甲苯胺蓝染幽门螺杆单一染色：用一个染料进行染色，如甲苯胺蓝染幽门螺杆菌菌l多色染色：用两种以上染液染色方法，如三色染色多色染色：用两种以上染液染色方法，如三色染色l对比染色：又称复染或衬染，先将某一成份或结构染色后，对比染色：又称复染或衬染，先将某一成份或结构染色后，再用另一个染料染其它成份，如苏木素衬染细胞核再用另一个染料染其它成份，如苏木素衬染细胞核染色惯用术语染色惯用术语第9页l进行性染色：渐进性染色，采取低浓度染液，使组进行性染色：渐进性染色，采取低浓度染液，使组织成份着色自浅入深，直到抵达适当强度，织成份着色自浅入深，直到抵达适当强度，l退行性染色：又称后退性染色，先使组织着色过分，退行性染色：又称后退性染色，先使组织着色过分，再用一些溶液脱去多出染液，抵达适当染色强度再用一些溶液脱去多出染液，抵达适当染色强度l媒染剂：含有促进染色能力，对染料和组织都有亲媒染剂：含有促进染色能力，对染料和组织都有亲和力并与染料和组织结合在一起试剂。如硫酸铝钾和力并与染料和组织结合在一起试剂。如硫酸铝钾等等染色惯用术语染色惯用术语第10页l促染剂：促使染料着色，增强染色能力，但本身不促染剂：促使染料着色，增强染色能力，但本身不参加染色反应，如乙酸参加染色反应，如乙酸l异染性染色：组织经过盐基性染料染色后，出现与异染性染色：组织经过盐基性染料染色后，出现与染料不一样颜色染料不一样颜色l分化：指用某种溶液选择性脱去过深着色，并使不分化：指用某种溶液选择性脱去过深着色，并使不应着色组织细胞成份脱色过程，应着色组织细胞成份脱色过程，HE染色时盐酸酒精染色时盐酸酒精分化分化l蓝化作用（返蓝）：苏木素在酸性条件下呈红色，蓝化作用（返蓝）：苏木素在酸性条件下呈红色，碱性条件下呈蓝色，碱性条件下呈蓝色，HE染色时在酸分化后，再用碱染色时在酸分化后，再用碱性水使核变蓝，称蓝化性水使核变蓝，称蓝化染色惯用术语染色惯用术语第11页按照染色方法分类按照染色方法分类l普通方法分类：常规染色，特殊染色等普通方法分类：常规染色，特殊染色等l按主要组织和细胞成份分类：结缔组织染色，按主要组织和细胞成份分类：结缔组织染色，肌组织染色，神经组织染色肌组织染色，神经组织染色l按染色对象种类分类：切片染色法，组织块按染色对象种类分类：切片染色法，组织块染色法，大致标本染色法染色法，大致标本染色法染色方法分类染色方法分类第12页l按创造者姓名命名：如按创造者姓名命名：如Van.Gieson（VG）染色染色l按全部染料分类：如苏丹按全部染料分类：如苏丹IV染色，锇酸染色染色，锇酸染色l按所染组织分类：如网状纤维染色按所染组织分类：如网状纤维染色l其它分类：其它分类：染色方法命名染色方法命名第13页l选择适当组织处理方法：包含固定液和切片选择适当组织处理方法：包含固定液和切片选择，如脂肪和酶类染色需冰冻切片选择，如脂肪和酶类染色需冰冻切片l染色液使用期和保留方式染色液使用期和保留方式l染色液浓度和染色液浓度和pH值值l染色时间控制染色时间控制l染色前切片预处理：如脱甲醛色素，脱汞盐染色前切片预处理：如脱甲醛色素，脱汞盐固定液汞结晶等固定液汞结晶等染色中易出现问题和对策染色中易出现问题和对策第14页注意特染应用范围，如某种病变应用什么方法染色才能到注意特染应用范围，如某种病变应用什么方法染色才能到达目标，普通依据达目标，普通依据HE切片所见，选择适当特染方法。切片所见，选择适当特染方法。必须掌握各种特殊染色结果，防止造成错误结论或严重误必须掌握各种特殊染色结果，防止造成错误结论或严重误诊，如在网染时把胶元纤维误认为网状纤维。诊，如在网染时把胶元纤维误认为网状纤维。应做阳性切片作对照，确保染色结果可靠性。应做阳性切片作对照，确保染色结果可靠性。染色所用器皿都必须清洗。染色所用器皿都必须清洗。染色中易出现问题和对策染色中易出现问题和对策第15页惯用染色方法和应用惯用染色方法和应用第16页 结缔组织由细胞和细胞间骨架成份组成，分结缔组织由细胞和细胞间骨架成份组成，分为无定形间质（如硫酸盐和非硫酸盐黏多糖）为无定形间质（如硫酸盐和非硫酸盐黏多糖）和定形或纤维型间质（如胶原纤维，弹力纤维。和定形或纤维型间质（如胶原纤维，弹力纤维。网状纤维）。各种纤维成份识别有利于病理学网状纤维）。各种纤维成份识别有利于病理学诊疗和判别诊疗。诊疗和判别诊疗。结缔组织染色结缔组织染色第17页网状纤维特征网状纤维特征 网状纤维是组成组织网状支架网状纤维是组成组织网状支架 广泛分布于实质器官内，其中最丰富区域是肝脏、脾脏、淋广泛分布于实质器官内，其中最丰富区域是肝脏、脾脏、淋巴结、骨髓、基膜、血管等巴结、骨髓、基膜、血管等形态学上为交织成网纤细纤维形态学上为交织成网纤细纤维化学成份为网状蛋白，一个特殊胶原蛋白，抗酸化学成份为网状蛋白，一个特殊胶原蛋白，抗酸病理状态下可转化为胶原纤维病理状态下可转化为胶原纤维含有嗜银性，又称嗜银纤维含有嗜银性，又称嗜银纤维HE染色着色淡，特殊染色可显示染色着色淡，特殊染色可显示 结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色第18页网状纤维染色原理网状纤维染色原理 网状纤维染色方法很多，但基本原理相同，即经过网状纤维染色方法很多，但基本原理相同，即经过氧化剂氧化使网状纤维对银离子含有选择性亲和能力氧化剂氧化使网状纤维对银离子含有选择性亲和能力（嗜银性），并在媒染剂作用下网状纤维吸附二氨合（嗜银性），并在媒染剂作用下网状纤维吸附二氨合银离子，在经甲醛将其还原为黑色金属银而显示出网银离子，在经甲醛将其还原为黑色金属银而显示出网状纤维。状纤维。结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色第19页惯用网状纤维染色方法惯用网状纤维染色方法 Gomori染色法染色法 结果：网状纤维呈黑色，胶原纤维呈黄色或黄结果：网状纤维呈黑色，胶原纤维呈黄色或黄褐色，细胞核呈灰黑色褐色，细胞核呈灰黑色。特点：此法简单可靠，染色时间短，惯用于活特点：此法简单可靠，染色时间短，惯用于活检病理组织检验。检病理组织检验。结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色第20页网状纤维染色应用网状纤维染色应用肿瘤诊疗和判别诊疗：肿瘤诊疗和判别诊疗：癌和肉瘤判别：癌巢周围存在网状纤维；肉癌和肉瘤判别：癌巢周围存在网状纤维；肉瘤中网状纤维围绕每个细胞瘤中网状纤维围绕每个细胞 尤文氏瘤和淋巴瘤：尤文氏瘤无网状纤维，尤文氏瘤和淋巴瘤：尤文氏瘤无网状纤维，淋巴瘤内存在大量网状纤维淋巴瘤内存在大量网状纤维 脑膜瘤和胶质瘤：脑膜瘤有网状纤维。胶质脑膜瘤和胶质瘤：脑膜瘤有网状纤维。胶质瘤少瘤少结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色第21页网状纤维染色应用网状纤维染色应用一些梭形细胞肿瘤诊疗：已被免疫组化取代，极少用一些梭形细胞肿瘤诊疗：已被免疫组化取代，极少用 平滑肌瘤瘤细胞间可见大量平行分布网状纤维；平滑肌瘤瘤细胞间可见大量平行分布网状纤维；纤维肉瘤则见大量网状纤维密集包绕细胞；纤维肉瘤则见大量网状纤维密集包绕细胞；滑膜肉瘤梭形细胞产生网状纤维少。滑膜肉瘤梭形细胞产生网状纤维少。结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色第22页网状纤维染色应用网状纤维染色应用判断组织坏死性质和预测坏死后结局：判断组织坏死性质和预测坏死后结局：、凝固性坏死：用网染能够观察到早期凝固、凝固性坏死：用网染能够观察到早期凝固性坏死处网状纤维支架还保留特点。性坏死处网状纤维支架还保留特点。、肝炎坏死范围和程度：如网状支架塌陷，、肝炎坏死范围和程度：如网状支架塌陷，则演变成肝硬化。则演变成肝硬化。结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色第23页网状纤维染色应用网状纤维染色应用骨髓网状纤维染色：骨髓网状纤维染色：结缔组织染色结缔组织染色网状纤维染色网状纤维染色第24页580例骨髓病变网状纤维染色结果例骨髓病变网状纤维染色结果第25页l胶原纤维是结缔组织中含量最多胶原纤维是结缔组织中含量最多一个，皮肤，肌腱，硬膜等处丰一个，皮肤，肌腱，硬膜等处丰富富l纤维母细胞合成，化学成份为胶纤维母细胞合成，化学成份为胶原蛋白原蛋白l不溶于水，在酸性溶液中膨胀不溶于水，在酸性溶液中膨胀lHE染色呈红色，易识别染色呈红色，易识别l出现质和量改变时，与疾病状态出现质和量改变时，与疾病状态相关相关 结缔组织染色结缔组织染色胶原纤维染色胶原纤维染色第26页染色原理：染色原理：胶原纤维含碱性氨基酸，能够与酸性染料结合，酸胶原纤维含碱性氨基酸，能够与酸性染料结合，酸性染料含有不一样程度扩散性，扩散性高小分子轻易性染料含有不一样程度扩散性，扩散性高小分子轻易进入结构致密组织（肌纤维）间隙，扩散性低大分子进入结构致密组织（肌纤维）间隙，扩散性低大分子只可能进入结构疏松组织（胶原纤维）间隙，从而产只可能进入结构疏松组织（胶原纤维）间隙，从而产生不一样染色。生不一样染色。结缔组织染色结缔组织染色胶原纤维染色胶原纤维染色第27页Van Gieson（V.G）染色：）染色：结果：胶原纤维鲜红色；肌纤维：黄色；细胞核：蓝黑结果：胶原纤维鲜红色；肌纤维：黄色；细胞核：蓝黑色或灰色色或灰色Masson三色染色：三色染色：结果：胶原纤维绿色或蓝色；肌纤维：红色；细胞核：结果：胶原纤维绿色或蓝色；肌纤维：红色；细胞核：灰蓝色或灰黑色灰蓝色或灰黑色结缔组织染色结缔组织染色胶原纤维染色胶原纤维染色第28页应用：应用：l显示组织，器官损伤或炎症修复与纤维化程度，如早显示组织，器官损伤或炎症修复与纤维化程度，如早期肝硬化期肝硬化l显示与判断心肌坏死后被纤维组织取代区域和病变新显示与判断心肌坏死后被纤维组织取代区域和病变新旧程度：旧程度：HE染色心肌与胶原呈红色，胶原染色则颜色染色心肌与胶原呈红色，胶原染色则颜色不一样；胶原染色新形成胶原多呈细丝状，成熟后则不一样；胶原染色新形成胶原多呈细丝状，成熟后则粗大，不规则波浪状粗大，不规则波浪状l区分透明变性和淀粉样变性区分透明变性和淀粉样变性l判别心肌纤维化和心内膜弹力纤维增生症判别心肌纤维化和心内膜弹力纤维增生症l肿瘤判别诊疗：纤维源性肿瘤诊疗肿瘤判别诊疗：纤维源性肿瘤诊疗结缔组织染色结缔组织染色胶原纤维染色胶原纤维染色第29页第30页第31页染色方法和结果：染色方法和结果：Verhoeff铁苏木素染色铁苏木素染色结果：弹力纤维呈黑色，细胞核蓝色，胶原结果：弹力纤维呈黑色，细胞核蓝色，胶原纤维呈红色纤维呈红色结缔组织染色结缔组织染色弹力纤维染色弹力纤维染色第32页应用：应用：（1）显示皮肤组织中弹刀纤维改变）显示皮肤组织中弹刀纤维改变：如硬皮病，皮肤松解如硬皮病，皮肤松解症等症等（2）显示与判断心血管疾病：）显示与判断心血管疾病：判别心内膜弹力纤维症与心内膜心肌纤维化判别心内膜弹力纤维症与心内膜心肌纤维化 动脉粥样硬化时粥样斑块低部弹力板情况动脉粥样硬化时粥样斑块低部弹力板情况 高血压小动脉改变高血压小动脉改变 老年性动脉病变，动脉弹力板变性，增厚老年性动脉病变，动脉弹力板变性，增厚 （3）观察疾病时弹力板是否破坏）观察疾病时弹力板是否破坏结缔组织染色结缔组织染色弹力纤维染色弹力纤维染色第33页第34页 糖类物质除参加细胞代谢外，现已证实还参加各种细糖类物质除参加细胞代谢外，现已证实还参加各种细胞功效活动，包含蛋白折叠，细胞粘附，酶活动及免疫胞功效活动，包含蛋白折叠，细胞粘附，酶活动及免疫识别等，糖生物学已成为一门复杂学科。识别等，糖生物学已成为一门复杂学科。糖类可分为单糖，双糖，粘多糖，粘蛋白，粘脂等，糖类可分为单糖，双糖，粘多糖，粘蛋白，粘脂等，病理学中最有意义是糖原和黏多糖。病理学中最有意义是糖原和黏多糖。因糖原极不稳定，易自溶，所以做糖原分析组织应在因糖原极不稳定，易自溶，所以做糖原分析组织应在取材后立刻固定。糖原是水溶性，提议最好使用酒精福取材后立刻固定。糖原是水溶性，提议最好使用酒精福尔马林。尔马林。糖类物质（碳水化合物）染色糖类物质（碳水化合物）染色第35页染色原理：染色原理：过碘酸是一个氧化剂，它能氧化糖类及相关物过碘酸是一个氧化剂，它能氧化糖类及相关物质中质中1,2-乙二醇基使之变为二醛，醛与乙二醇基使之变为二醛，醛与Schiff试试剂结合形成亮红色终产物剂结合形成亮红色终产物-碱性品红。形成颜色碱性品红。形成颜色深浅取决于组织内反应乙二醇浓度。深浅取决于组织内反应乙二醇浓度。结果：结果：糖原和其它糖原和其它PAS阳性物质呈红色，细胞核呈蓝阳性物质呈红色，细胞核呈蓝色色糖类物质染色糖类物质染色1、PAS染色染色（Periodic Periodic Acid Schiff PASAcid Schiff PAS）第36页应用：应用：肿瘤诊疗和判别诊疗肿瘤诊疗和判别诊疗基底膜厚度判断（肾病诊疗）基底膜厚度判断（肾病诊疗）基底膜完整性基底膜完整性病原菌感染诊疗病原菌感染诊疗 糖类物质染色糖类物质染色1、PAS染色染色第37页糖类物质染色糖类物质染色1、PAS染色染色PAS反应阳性物质反应阳性物质第38页染色原理：染色原理：染色机制不清，可能是阿辛蓝中异硫脲基经过染色机制不清，可能是阿辛蓝中异硫脲基经过静电与组织内多聚阴离子相连。静电与组织内多聚阴离子相连。结果：结果：酸性粘蛋白（硫粘蛋白和唾液酸蛋白）：酸性粘蛋白（硫粘蛋白和唾液酸蛋白）：蓝色蓝色 蛋白多糖和透明质酸：蛋白多糖和透明质酸：蓝色蓝色 细胞核：红色细胞核：红色糖类物质染色糖类物质染色2、AB染色染色第39页应用应用用于普通黏液性病变观察。用于普通黏液性病变观察。在肿瘤诊疗与研究中：在肿瘤诊疗与研究中：用于肿瘤类型判别，如黏液腺癌与未分化癌判别，黏用于肿瘤类型判别，如黏液腺癌与未分化癌判别，黏液表皮样癌与鳞癌判别；液表皮样癌与鳞癌判别；黏液染色还能够证实癌细胞是否浸润间质；黏液染色还能够证实癌细胞是否浸润间质；观察胃黏膜腺体肠上皮化生等观察胃黏膜腺体肠上皮化生等糖类物质染色糖类物质染色2、AB染色染色第40页组织中粘液物质分类组织中粘液物质分类糖类物质染色糖类物质染色2、AB染色染色第41页中性黏多糖：主要存在于胃黏膜表面上皮、幽门腺、十中性黏多糖：主要存在于胃黏膜表面上皮、幽门腺、十二指肠腺等处；二指肠腺等处；酸性黏多糖：其基质成份可分为硫酸性（酸性黏多糖：其基质成份可分为硫酸性（HID染色呈棕黑染色呈棕黑色）和非硫酸性（色）和非硫酸性（AB染色呈蓝绿色）两种形式存在，主染色呈蓝绿色）两种形式存在，主要分布于消化道、呼吸道及其它部位黏液腺分泌物中；要分布于消化道、呼吸道及其它部位黏液腺分泌物中；黏蛋白：是由糖和蛋白质结合而组成，故又称糖蛋白，黏蛋白：是由糖和蛋白质结合而组成，故又称糖蛋白，见于各种组织上皮和腺体导管分泌物中。见于各种组织上皮和腺体导管分泌物中。糖类物质染色糖类物质染色第42页 AB与与PAS共同染色，亦称套染，对于显示和区分酸性共同染色，亦称套染，对于显示和区分酸性黏液物质与中性黏液物质都有很好效果。黏液物质与中性黏液物质都有很好效果。结果：结果：酸性黏液物质呈蓝色，中性黏液物质呈红色，混合性黏液酸性黏液物质呈蓝色，中性黏液物质呈红色，混合性黏液物质呈紫红色；细胞核呈浅蓝色。物质呈紫红色；细胞核呈浅蓝色。糖类物质染色糖类物质染色2、AB-PAS染色染色第43页 脂类物质染色脂类物质染色染色方法和结果：染色方法和结果：染色方法和结果：染色方法和结果：l l苏丹苏丹染色法：脂肪染橙红色，细胞核淡蓝色（切片染染色法：脂肪染橙红色，细胞核淡蓝色（切片染色后不能长久保留色后不能长久保留)。l lLillieLillie油红油红OO染色法：脂类物质呈鲜红色或橘红色，细染色法：脂类物质呈鲜红色或橘红色，细胞核呈淡蓝色。胞核呈淡蓝色。以上两种染色原理：以上两种染色原理：以上两种染色原理：以上两种染色原理：是染料在脂质中溶解度大于所用溶是染料在脂质中溶解度大于所用溶液溶解度，染料被移入脂质中。均需要冰冻切片，甘油液溶解度，染料被移入脂质中。均需要冰冻切片，甘油或甘油明胶封固。或甘油明胶封固。l l锇酸染色：锇酸与脂肪形成不溶于有机质氢氧化锇；黑锇酸染色：锇酸与脂肪形成不溶于有机质氢氧化锇；黑色脂肪呈黑色，类脂质颗粒呈褐色。应用组织块浸染。色脂肪呈黑色，类脂质颗粒呈褐色。应用组织块浸染。第44页 脂类物质染色脂类物质染色应用：应用：应用：应用：l l证实和区分脂肪变性。证实和区分脂肪变性。证实和区分脂肪变性。证实和区分脂肪变性。l l显示病变脂质从容，如动脉粥样硬化斑块内胆显示病变脂质从容，如动脉粥样硬化斑块内胆显示病变脂质从容，如动脉粥样硬化斑块内胆显示病变脂质从容，如动脉粥样硬化斑块内胆固醇沉积；显示脂肪栓塞；显示先天性类脂质沉固醇沉积；显示脂肪栓塞；显示先天性类脂质沉固醇沉积；显示脂肪栓塞；显示先天性类脂质沉固醇沉积；显示脂肪栓塞；显示先天性类脂质沉积病，如戈谢病（积病，如戈谢病（积病，如戈谢病（积病，如戈谢病（GaucherGaucher diseasedisease），尼曼），尼曼），尼曼），尼曼皮克病（皮克病（皮克病（皮克病（Niemann-Pick disease Niemann-Pick disease）等。）等。）等。）等。l l脂肪源性肿瘤诊疗和判别脂肪源性肿瘤诊疗和判别脂肪源性肿瘤诊疗和判别脂肪源性肿瘤诊疗和判别第45页淀粉样物染色淀粉样物染色 淀淀粉粉样样物物质质（Amyloid）是是一一个个细细胞胞外外无无定定形形，嗜嗜酸酸性性物物质质，刚刚果果红红染染色色后后在在偏偏正正光光镜镜下下呈呈“苹苹果果绿绿”双双折折射射，含含有有独特原纤维超微结构，大多数由独特原纤维超微结构，大多数由B-折叠层构象蛋白质组成。折叠层构象蛋白质组成。淀淀粉粉样样物物沉沉积积与与很很多多疾疾病病相相关关，不不一一样样疾疾病病所所组组成成淀淀粉粉样样物物蛋蛋白白质质不不一一样样。如如骨骨髓髓瘤瘤相相关关淀淀粉粉样样变变为为免免疫疫球球蛋蛋白白轻轻链链；Alzheimer病为淀粉样蛋白病为淀粉样蛋白B前体。前体。第46页染色方法和结果：染色方法和结果：刚刚果果红红染染色色：淀淀粉粉样样物物，弹弹力力纤纤维维呈呈红红色色，核核呈呈蓝色蓝色甲甲基基紫紫染染色色：淀淀粉粉样样物物呈呈紫紫红红色色，细细胞胞核核和和基基质质呈蓝色呈蓝色染色原理：染色原理：机制不清楚机制不清楚淀粉样物染色淀粉样物染色第47页应用：应用：肿瘤诊疗与判别：如甲状腺髓样癌、胰岛细胞瘤、肺小细肿瘤诊疗与判别：如甲状腺髓样癌、胰岛细胞瘤、肺小细胞癌可胞癌可 出现淀粉样物质，染色阳性对诊疗提供可靠依据。出现淀粉样物质，染色阳性对诊疗提供可靠依据。识别器官淀粉样变性：如舌、喉、肝脾、肠道及皮肤等识别器官淀粉样变性：如舌、喉、肝脾、肠道及皮肤等淀粉样物染色淀粉样物染色第48页微生物染色微生物染色微生物主要包含：微生物主要包含：病毒病毒细菌细菌真菌真菌原虫原虫寄生虫寄生虫第49页微生物染色微生物染色细菌染色细菌染色Gram碱性复红结晶紫染色：碱性复红结晶紫染色：应用：识别应用：识别Gram菌感染菌感染结果：结果：Gram阳性菌呈蓝色，阴性菌和细胞核阳性菌呈蓝色，阴性菌和细胞核呈红色呈红色原理：原理：Gram阳性菌含核糖核酸镁盐阳性菌含核糖核酸镁盐-蛋白质蛋白质复合物多，摄取结晶紫多且较牢靠，呈蓝复合物多，摄取结晶紫多且较牢靠，呈蓝色或紫色，而色或紫色，而Gram阴性菌则较少，易与碱阴性菌则较少，易与碱性复红结合呈红色性复红结合呈红色第50页微生物染色微生物染色细菌染色细菌染色抗酸染色（抗酸染色（Ziehl-Neelsen染色）：染色）：应用：识别分枝杆菌，如结核杆菌和其它分枝杆菌应用：识别分枝杆菌，如结核杆菌和其它分枝杆菌结果：分枝杆菌呈红色，背景淡蓝色结果：分枝杆菌呈红色，背景淡蓝色原理：分枝杆菌细胞壁含大量脂质，主要成份是分枝菌酸，原理：分枝杆菌细胞壁含大量脂质，主要成份是分枝菌酸，它含有抗酸性，可与染料中石碳酸复红结合，抵抗盐酸乙它含有抗酸性，可与染料中石碳酸复红结合，抵抗盐酸乙醇脱色。醇脱色。第51页微生物染色微生物染色细菌染色细菌染色其它细菌染色其它细菌染色Wathin-Starry染色染色显示螺旋体，菌体呈黑色，背景呈金黄色显示螺旋体，菌体呈黑色，背景呈金黄色改良改良Steiner染色：染色：螺旋体，猫爪病病原体，非放线菌呈深棕黑色，背螺旋体，猫爪病病原体，非放线菌呈深棕黑色，背景呈亮黄色至金黄色景呈亮黄色至金黄色第52页微生物染色微生物染色真菌染色真菌染色l真菌（真菌（fungus）种类较多，常见致病菌如毛霉菌、）种类较多，常见致病菌如毛霉菌、曲菌、隐球菌、放线菌和白色念珠菌等。曲菌、隐球菌、放线菌和白色念珠菌等。l真菌基本结组成份是含较多黏多糖和蛋白质。真菌基本结组成份是含较多黏多糖和蛋白质。l常形成肉芽肿和坏死常形成肉芽肿和坏死l培养是最好方法培养是最好方法第53页微生物染色微生物染色真菌染色真菌染色Grocott六胺银染色法 结果：真菌孢子和菌丝呈黑褐色，细胞核呈红色，结果：真菌孢子和菌丝呈黑褐色，细胞核呈红色，背景呈淡绿色。背景呈淡绿色。原理：铬酸氧化真菌内多糖化合物，醛基暴露，醛原理：铬酸氧化真菌内多糖化合物，醛基暴露，醛基将六胺银中银还有呈黑色金属银基将六胺银中银还有呈黑色金属银过碘酸过碘酸-Schiff（PAS）反应法：）反应法：结果：真菌呈紫红色，红细胞呈淡黄色结果：真菌呈紫红色，红细胞呈淡黄色。原理：原理：第54页色素和矿物质色素和矿物质生物体内色素可分为：生物体内色素可分为：1）内源性色素：）内源性色素：血源性色素：含铁血黄素，血红素，卟啉等血源性色素：含铁血黄素，血红素，卟啉等 非血源性色素非血源性色素 内源性矿物质内源性矿物质2）人工色素：组织成份和一些化学物质之间相互作）人工色素：组织成份和一些化学物质之间相互作用后产生物质沉积，如福尔马林色素用后产生物质沉积，如福尔马林色素3）外源性色素和矿物质：外源性物质进入人体）外源性色素和矿物质：外源性物质进入人体第55页色素和矿物质染色色素和矿物质染色铁染色：铁染色：组织内沉积铁质主要以含铁血黄素方式存在，组织内沉积铁质主要以含铁血黄素方式存在，HE染色下染色下呈黄色至褐色颗粒，以氢氧化铁形式存在于蛋白质结构中，呈黄色至褐色颗粒，以氢氧化铁形式存在于蛋白质结构中，含铁血黄素中铁可分为三价和二价铁，可用不一样方式显含铁血黄素中铁可分为三价和二价铁，可用不一样方式显示。示。第56页色素和矿物质染色色素和矿物质染色Perls blue（普鲁士蓝）染色：（普鲁士蓝）染色：Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁 原理：盐酸与含铁血黄素中三价铁反应形成三氯化铁，三氯化铁与亚铁氰化钾反应生成一个稳定化合物蓝色亚铁氰化铁（普鲁士蓝）。结果：含铁血黄素呈蓝色，其它组织浅红色。第57页色素和矿物质染色色素和矿物质染色Turnbull-Sehmaltzer铁染色：铁染色：显示二价铁和三价铁显示二价铁和三价铁 原理：组织中同时含有二价和三价铁，经硫化氨处理后三价原理：组织中同时含有二价和三价铁，经硫化氨处理后三价铁转变为二价铁，原来存在二价铁不变，与铁转变为二价铁，原来存在二价铁不变，与Turnbull反应反应呈蓝色，若不经硫化氨处理，直接与呈蓝色，若不经硫化氨处理，直接与turnbull反应，则只反应，则只显示二价铁显示二价铁结果：含铁血黄素呈蓝色，其它组织浅红色。结果：含铁血黄素呈蓝色，其它组织浅红色。第58页色素和矿物质染色色素和矿物质染色 黑色素（Melanin）在黑色素母细胞内合成，黑色素母细胞起源干神经脊，在胚胎发育过程中，由神经脊移行到皮肤、眼和中枢神经系统。皮肤表皮、毛囊、眼虹膜、睫状体、脉络膜，脑软脑膜、黑质、蓝斑、迷走背核，以及交感神经节和脊神经节节细胞内均可有黑色素从容。第59页Masson-Fontana银染色法原理：黑色素含有还原性，嗜银，将染液中银还原后使黑色素着色 结果：黑色素及嗜银细胞颗粒呈黑色。色素和矿物质染色色素和矿物质染色第60页应用应用:黑色素瘤诊疗和判别含铁血黄素、脂褐素及非色素性黑色素瘤和假性黑变瘤色素相判别。色素和矿物质染色色素和矿物质染色第61页脱黑色素染色：脱黑色素染色：氯化钾乙醇盐酸法：氯化钾乙醇盐酸法：高锰酸钾草酸法：高锰酸钾草酸法：通常制作通常制作3张连续石蜡切片，一张染张连续石蜡切片，一张染HE，一张作，一张作黑色素染色，一张作脱色素。黑色素染色，一张作脱色素。结果：细胞内黑色素完全消失。结果：细胞内黑色素完全消失。应用：判别组织内颗粒是否为黑色素颗粒。应用：判别组织内颗粒是否为黑色素颗粒。色素和矿物质染色色素和矿物质染色第62页色素与矿物质色素与矿物质其它色素和矿物质染色其它色素和矿物质染色：三氯醋酸染色法显示胆色素（绿色）Von Kossa法显示钙盐（黑色）红氨酸铜染色（绿色或黄绿色）PAS，Gomori等显示脂褐素第63页DNA染色法染色法 DNA惯用酸水解惯用酸水解-无色品红染法（无色品红染法（Feulgen染色染色法）显示，经过酸水解，打开法）显示，经过酸水解，打开DNA嘌呤基嘌呤基-糖苷，糖苷，释放出反应型醛基，游离醛基与释放出反应型醛基，游离醛基与Schiff试剂结合，试剂结合，形成紫红色复合物，从而显示形成紫红色复合物，从而显示DNA。第64页DNA染色染色应用：应用：用于肿瘤诊疗和研究，测定用于肿瘤诊疗和研究，测定DNA含量，有利于判含量，有利于判断肿瘤良恶性及分化程度，并预计肿瘤患者预后。断肿瘤良恶性及分化程度，并预计肿瘤患者预后。第65页骨组织技术骨组织技术l骨组织主要由矿物质，细胞和细胞外基质组成骨组织主要由矿物质，细胞和细胞外基质组成l骨矿物质主要是钙和磷，与氢氧根离子结合骨矿物质主要是钙和磷，与氢氧根离子结合形成羟基磷灰石结晶形成羟基磷灰石结晶l矿物质是维持骨硬度主要原因矿物质是维持骨硬度主要原因第66页骨脱钙骨脱钙l利用化学制剂将骨组织中钙盐除去过程称脱钙利用化学制剂将骨组织中钙盐除去过程称脱钙l脱钙剂主要有两种：酸性脱钙剂和螯合剂脱钙剂主要有两种：酸性脱钙剂和螯合剂l酸性脱钙剂包含强酸：盐酸，硝酸；弱酸：甲酸，乙酸，酸性脱钙剂包含强酸：盐酸，硝酸；弱酸：甲酸，乙酸，苦味酸苦味酸l螯合剂螯合剂EDTA，在，在pH77.4时能够与钙结合时能够与钙结合l酸性脱钙剂脱钙快速，但不利于抗原保留酸性脱钙剂脱钙快速，但不利于抗原保留l螯合剂脱钙慢，可保留抗原螯合剂脱钙慢，可保留抗原l应注意观察脱钙是否理想，过分脱钙可造成组织破坏应注意观察脱钙是否理想，过分脱钙可造成组织破坏l脱钙结束后应流水冲洗，以除去组织表明酸性物质脱钙结束后应流水冲洗，以除去组织表明酸性物质第67页其它染色其它染色l神经病理特殊染色l酶组织化学l神经内分泌颗粒，细胞内颗粒染色第68页