车前草中多糖的提取与含量的测定论文--学位论文.doc

学 士 学 位 论 文
BACHELOR ’S THESIS
分类号 密级
U D C 编号

学士学位论文

车前草中多糖的提取与含量的测定

目 录
摘要 1
关键词： 1
引言 2
1.仪器和材料 4
1.1仪器： 4
1.2试剂： 4
1.3材料： 4
2.实验方法和步聚 4
2.1糖类的定性分析 4
2.1.1制备车前草的样品溶液 4
2.1.2糖类的鉴定方法 4
2.2车前草中多糖的提取 5
2.3标准曲线的绘制 5
2.3.1标准溶液的准备 5
2.3.2标准曲线的绘制 5
2.4样品内多糖含量的测定 6
2.5回收率的测定 7
3.结果与讨论 8
参考文献 9
致谢 10
摘要
目的是对车前草不同部位中多糖进行提取和含量分析。方法是首先利用显色反应鉴定了车前草中的多糖。然后利用索氏提取法提取了车前草中多糖。采用苯酚-硫酸法，以葡萄糖作为标准品，光密度于490nm波长处测定吸光度。结果：回归方程为A=20.928X,相关系数为R2 =0.9918。通过试验结果表明：车前草中多糖含量分别为，叶含量可达5.3mg/g，根含量为4.3mg/g，种子含量为2.4mg/g。RSD分别为3.5％，6.8％，1.7％。：
关键词：车前草，多糖，苯酚-硫酸法

引言
多糖类物质是生命代谢不可缺少的重要物质，是由多个单糖或其衍生物聚合而成的大分子活性化合物，在20世纪60年代，人们就发现多糖复杂的生物活性和功能。多糖具有许多生物活性，与生物机能的维持密切相关，与蛋白质，脂类生成的糖蛋白，脂多糖在细胞识别，分泌以及在蛋白质的加工，转移方面起着不要忽视的作用。它可以调节免疫功能，促进蛋白质和和核酸的生物合成，调节细胞的生长，提高生物体的免疫力，具有抗肿瘤，抗病毒和各种感染，抗辐射，抗癌，延迟衰老等功效，又因多糖毒性极小，所以对多糖类物质的研究将成为继蛋白和核酸之后的探索生命奥妙的第三理程碑[6]。
车前草的学名：plantago asiatica,别名：车前菜，牛甜菜，甜菠菜。车前草属于车前草科，车前属，它是多年生草本植物。植株高约为10—50cm叶片从基部生长，叶柄较长。根丛生，须壮。叶片皱缩，展平后呈卵状椭圆形或宽卵形，表面灰绿色或污绿色，具明显弧形脉5—7条，先端钝或短尖，基部宽楔形，全缘或不规则波状浅齿。穗状花序数条，花茎长。蒴果盖裂，萼宿存，气微香，味微苦。[5]
车前草是常用的维药草和中药草，用于车前草治疗腹泻，痢疾，牙疼，耳朵疼，女性月经多等疾病，它有能解毒，解热。出了这些以外，车前草清热利尿，可治湿热所致的小便不利尿多原因，如湿热所致的车前草可以用，如菲湿热。它又有利于高血压，发胖等疾病[1，2]。
因此，车前草中多糖含量的测定具有重要的药用价值。

1.仪器和材料
1.1仪器：S22PC型—分光光度计，离心机，索氏提取器，浓缩器，分析天平，分液漏斗，容量瓶等。
1.2试剂：葡萄糖，6%苯酚，浓硫酸，95%乙醇，乙醚，盐酸，斐林试剂，本尼迪克特试剂，莫氏试剂，赛氏试剂。
1.3材料：车前草的根，种子，叶（采集于上阿图什乡）
2.实验方法和步聚
2.1糖类的定性分析
2.1.1制备车前草的样品溶液
称取5g样品的干叶置于研钵中研磨细，将研碎的干叶样品中加入100毫升蒸馏水浸泡，保持2天。然后过滤。同样的方法分别制备车前草种子，根的样品溶液。
2.1.2糖类的鉴定方法
取1支试管加入1ml车前草样品溶液，再向试管中分别加入莫氏试剂，斐林试剂，本尼迪克特试剂，赛氏试剂。观察颜色变化[10，11]。结果见表1

表1 糖类的定性分析

试剂
样品溶液
莫氏试剂
赛氏试剂
斐林试剂

本尼迪克特试剂
结果
叶
紫红色环
红色
红色沉淀
黄色沉淀
有糖类
种子
紫红色环
红色
红色沉淀
黄色沉淀
有糖类
根
紫红色环
红色
红色沉淀
黄色沉淀
有糖类
2.2车前草中多糖的提取
精密称取5克样品，置索氏提取器中，到圆底烧瓶的1/2加入石油醚，约800C 回流5个小时脱脂，脱叶绿素。残渣挥干溶剂后，置锥形瓶中，用85%的乙醇浸泡24小时后进行分离提取。然后这个残渣中的乙醇通过蒸馏放弃。加水浸泡12个小时，过滤，提取滤液。这个滤液就是多糖。按这个方法分别提取车前草根，种子，叶的多糖[9]。
2.3标准曲线的绘制
2.3.1标准溶液的准备
精密称取干燥恒重的葡萄糖10mg，加适量的水溶解，稀释至100ml，准备浓度为0.1mg/ml葡萄糖标准溶液。
2.3.2标准曲线的绘制
精确吸取葡萄糖标准溶液0.5ml，1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，7ml，8ml在容量瓶稀释至100ml。取9支试管，分别加入1ml标准溶液，分别加入1ml，6%苯酚，再加入5ml浓硫酸。另取一个试管加入1ml蒸馏水方法上述一样，做一空白。这些溶液在400C水浴中加热，取出冷至15分钟。利用分光光度计，在490nm处测定时，吸光度为0.013，0.035，0.046，0.063，0.087，0.105，0.122，0.145，0.167。回归方程A=20.928C，R2=0.9918。具有良好的线性关系。

表2 葡萄糖不同浓度的吸光度
浓度（mg/ml）
0
0.0005
0.001
0.002
0.003
0.004
0.005
0.006
0.007
0.008
吸光度
0
0.013
0.035
0.046
0.063
0.087
0.105
0.122
0.145
0.167

2.4样品内多糖含量的测定
利用索氏提取法从根，种子，叶所提取的多糖置于500ml容量瓶，稀释至500ml。被稀释的叶子样品液中称取1ml，加入10ml容量瓶，再加入1ml苯酚，再加入5ml浓硫酸稀释至刻度。然后通过利用分光光度计在490nm波长处，测出吸光度。按回归方程计算出浓度。按这个方法分别测出根，种子，吸光度，计算出浓度[3，4，5，7]。结果见表
表3 样品中多糖含量测定表
样品
测定次数
多糖含量（mg/g）
平均含量（mg/g）
RSD（%）

根
1
4.3

4.3

3.5
2
4.5
3
4.2

种子
1
2.5

2.4

1.7
2
2.0
3
2.8

叶
1
5.7

5.3

6.8
2
5.2
3
5.0

2.5回收率的测定
所稀释的样品中称取0.5ml，加入10ml容量瓶，在加入0.5ml标准溶液，加入1ml 6%苯酚，再加入5ml浓硫酸，稀释至刻度。另取一个试管加入1ml蒸馏水，方法上述一样，做一空白。这些溶液在400C水浴中加热，取出冷至15分钟。利用分光光度计，在490nm处测定吸光度。按回归方程计算含量，并计算回收率[4]。
结果见表4。

回收率= [（测出的多糖含量-样品中多糖含量）/加入的葡萄糖含量]ⅹ100%

表4 回收率测定表

样品
次数
加入葡萄糖的含量（mg/g）
加入样品中的多糖含量(mg/g)
测得的多糖的含量(mg/g)
回收率(%)
平均回
收率(%)
RSD（%）

叶
1
0.05
0.028
0.078
99

99.4

4.4
2
0.05
0.026
0.078
104
3
0.05
0.025
0.073
95.2

根
1
0.05
0.020
0.071
102

101

1.7

2
0.05
0.022
0.074
103
3
0.05
0.021
0.071
101

种子
1
0.05
0.012
0.061
97

97.2

2.1

2
0.05
0.010
0.059
99.4
3
0.05
0.014
0.062
95.2
3.结果与讨论
3.1 先粗提取车前草中的糖类，用好几种鉴别方法来证明了车前草的个部分（根，种子，叶）都有糖类。
3.2。利用索氏提取法提取了车前草中不同部位的多糖。这种方法纯度和效果比较好。实验结果表明车前草中多糖含量分为，叶内多糖含量可达5.3mg/g，根：4.3mg/g，种子：2.4mg/g。RSD分别为3.5%，6.8%，1.7%。顺序为叶>根>种子。这可能是叶的光合作用，合成以后的多糖的运输有关。
3.3在测定多糖含量时，如果提取的样品液中有脂类和叶绿素等杂合物一定会影响多糖的含量测定。所以采用石油醚除出样品中的脂类和叶绿素。
3.4本试验利用苯酚-硫酸法来测定了车前草中的多糖含量。苯酚-硫酸法是最好的测定方法。但是应该注意控制反应温度，温度一般不要超过400C，苯酚的用量应该多于0.5ml，浓硫酸的用量一般多于总体积的一半[8]。
3.5糖类是生物维持生命活动的主要能量和热量来源。多糖也有许多生物活性，尤其是对人体健康来说增强人体的免疫能力和抗肿瘤，抗病毒和各种感染，抗辐射，抗癌，延迟衰老等重要的功能。
车前草具有重要的药用价值，它用于治疗腹泻，痢疾，牙疼，耳朵疼，月经不正常等疾病，它有能解毒，解热，除了这些以外车前草清热利尿，可治湿热所致的小便不利。这可能是与多糖有关。车前草各部分都有糖类 所以研究车前草中多糖的含量并多糖种类具有重要的药用意义。

参考文献
1.沈保安，剂荣禄 主编 现代中药鉴定手册 [M] 中国中医出版社 359页。
2. 中国科学院北京植物研究所 主编 中国高等植物图鉴[M] 第四册 高等教育出版社 180页。
3.凌育赵 “白花蛇舌草多糖的分离提取及含量测定” 生物技术[J] 2005年8月第15卷 第4期。
4.库尔班江.吾斯曼，阿里木江.米吉提“龙葵中多糖的提取和含量测定”喀什师范学院学报[J] 2005年第5期。
5. 玛依努尔。吾斯曼和木合塔。阿里木 向日葵茎髓中多糖及微量元素含量分析[J] 喀什师范学院学报 2006年 5 26页
6. 库尔班江.吾斯曼，陈爱香，王晓丹“红茶，绿茶，茯茶的茶未的多糖的提取及含量测定”[J] 喀什师范学院学报 2005年5月第26卷第3期。
7.李剑荣 “板蓝根多糖及含量测定” 广东省家禽科学院所。
8.董群，郑丽伊，方积手 “改良的苯酚-硫酸法测定总糖和寡糖的研究” 中国药学杂志[J] 1996年31 9期550页
9.帕孜来提.拜合提，文雪梅，阿不都拉.阿把斯 “新疆红景天总黄酮及多糖的分离提取及抑菌活性初深” 2006年 27 07期 114页。
10.王秀奇 等 主编 基础生物化学试验[M] 第二版 高等教育出版社 96-100页。
11. 曾昭琼等 主编 有机化学试验[M] 第三片高等教育出版社 179页

致谢
在此我要感谢环境与生命科学系的所有老师，是老师们让我们学到了许多的知识，是他们传授给我学习方法，是他们使我们坚定了学习的方向。我还要特别感谢我的指导老师阿布来提.阿布都热西提，本论文是在他悉心指导下完成的，无论是论文的选择，研究内容，还是方案设计，实验方法及论文完成等各环节，无不凝聚着他的智慧与心血。
藉此论文完成之际，特向老师表示最衷心的感谢，论文的顺利完成还得益于同学阿曼古丽的协助，在此一并表示感谢。

3