安乃近残留溶剂甲醇气相色谱检测方法_张晓灿.pdf

0引言安乃近（Metamizole sodium）为老牌解热镇痛类原料药，由于其疗效好，使用方便，价格低廉，在医学上发挥了重大作用。可用于头痛、神经痛、偏头痛、肌肉痛、关节痛和痛经等症状；如出现高热，可用于解热，安乃近极易溶于水，作用较为迅速，解热镇痛作用强而快，在解热镇痛类药中是为数不多的既能口服又可注射的品种；还可以用于滴鼻，尤其小儿鼻腔内毛细血管丰富，药液接触面大，易于吸收，使用时药效快，作用强。安乃近合成工艺一般以吡唑酮为基础原料，经甲基化反应制得安替比林，再经亚硝化还原成 4-氨基安替比林，然后经甲酰化和甲基化得 4-甲氨基安替比林，最后经缩合反应得到安乃近。生产过程中用到的甲醇会残留到安乃近中，但各国药典均没有关于安乃近残留溶剂甲醇的检测方法的报道，按照国际制药指南 ICHQ3C，甲醇属于对人体有害的有机溶剂，故应对残留溶剂给予控制，本实验开发了安乃近残留溶剂甲醇的定量检测方法，为安乃安乃近残留溶剂甲醇气相色谱检测方法张晓灿，康 倩，李焕君，王莉莉，王 丽，马凤霞，刘晓莲，马宁宁（河北冀衡药业股份有限公司，河北 衡水 053000）摘要：采用气相色谱法，检测化学原料药安乃近残留溶剂甲醇的含量。检测方法为采用Agilent DB-WAX 柱，FID 检测器，检测器温度为 230，进样器温度为 200，柱温为 55，以 DMF 作为溶剂，氮气为载气，在程序升温条件下进行检测，以外标法进行计算。结果表明，甲醇浓度在 0.7424721 g/mL具有良好的线性关系，相关系数 R2=0.999 8，线性方程Y=171.24 x+172.72，相对误差 RSD5%，该检测方法得到的峰型较好，溶剂峰和甲醇峰分离度好，且操作简单，快速，准确，灵敏度高，可定量检测甲醇含量，为提高安乃近产品的质量提供了保障。关键词：安乃近；甲醇；残留溶剂；气相色谱法；程序升温；外标法中图分类号：O657.7+1文献标识码：A文章编号：2095-5979（2023）05-0133-05Gas chromatography test of methanol frommetamizole sodium residual solventZhangXiaocan,KangQian,Li Huanjun,WangLili,WangLi,Ma Fengxia,Liu Xiaolian,Ma Ningning(Hebei Jiheng Pharmaceutical Corporation Ltd.,Hengshui 053000,China)Abstract：Gas chromatography was used to detect the content of chemical drug.The detection method is as follows:usingAgilent DB-WAXcolumn,FIDdetector,detector temperature 230,sampler temperature 200,column temperature 55,DMF as solvent,nitrogen as carrier gas,tested under the program heatingcondition,and calculated byexternal standardmethod.The results showthat the methanol concentration has a good linear relationship between 0.742 4 u g/mL and 721 ug/ml,the correlation coefficient R2=0.999 8,linear equationY=171.24 x+172.72,relative error RSD less than 5%,thedetection method obtained good peak type,good solvent peak and methanol peak separation,and simple operation,fast,accurate,high sensitivity,quantitative detection ofmethanol content,toimprove the qualityofthe products.Key words：analgin;methanol;residual solvent;gas chromatography;procedural heating;external standard method责任编辑：索喜梅DOI：10.19286/ki.cci.2023.05.033作者简介：张晓灿（1985），女，河北枣强人，工程师。引用格式：张晓灿，康倩，李焕君，等.安乃近残留溶剂甲醇气相色谱检测方法J.煤炭与化工，2023，46（5）：133-137.Coal and Chemical Industry煤 炭 与 化 工Coal and Chemical Industry第 46 卷 第 5 期2023 年 5 月Vol.46 No.5May 2023化 工 分 析 与 检 测133煤炭与化工2023 年第 5 期第 46 卷近生产提供重要的理论依据，同时也达到了提高安乃近质量的目的。1实验部分1.1仪器及试剂1.1.1仪器QUINIX124-1CN分析天平，赛多利斯。Clarus 580 气相色谱仪，PE 气相色谱仪。SPN-300 高纯度氮气发生器，北京中惠普分析技术研究所。SPH-300 高纯度氢气发生器，北京中惠普分析技术研究所。SPB-3 全自动空气源，北京中惠普分析技术研究所。1.1.2试剂N,N-二甲基甲酰胺，天津大茂。安乃近，河北冀衡药业股份有限公司。甲醇，默克。1.2色谱条件色谱柱，Agilent DB-WAX，30 m0.32 mm0.50 m。载气。氮气。检测器，FID。柱温，起始温度 55，以每分钟 3 的速率升温至 80，然后以 5.0 的速率升温至 140 保持 5 min。检测器温度，230。进样器温度，200。流速，20 mL/min。进样量，1.0 l。量程，1。载气流速，3。计算方法，外标法。2结果与讨论2.1定性分析2.1.1溶液配制标准溶液：精密称取 0.05 g 甲醇于 100 mL 容量瓶中，用 DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。供试试液：精密称取 2 个 0.5 g 样品分别于 10mL容量瓶中，用 DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀。2.1.2操作步骤分别吸取标准溶液 1.0 L，重复进样 5 次；分别吸取样品溶液 1.0L进样。计算式如下：式中：As样品溶液中甲醇的峰面积；Ar 标准溶液中甲醇的峰面积；Wr 配制标准溶液称取甲醇的质量；Ws 称取样品的质量。2.2气相色谱方法学考察2.2.1检测方法的系统适用性对照液：精密称取甲醇 0.05 g 于 100 mL 容量瓶中，用 DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。取对照溶液 1.0 L 重复进样 6 次，记录色谱图，6 次结果的平均值为 77 353.5，RSD 为 1.55%，5.0%，符合规定。系统适用性检测结果见表 1。2.2.2检测方法的专属性吸取 DMF1.0 L 进样，记录色谱图。与系统适用性中的溶液 1 进行比较。从溶剂图谱未检测到甲醇，对甲醇的测定没有影响，专属性符合规定。2.3甲醇检测限和定量限的测定2.3.1定量限吸取系统适用性项下对照液 1.0 mL 于 10 mL量瓶中，用 DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为定量限的储备液；吸取定量限储备液 0.8 mL 于 50mL 容量瓶中，用 DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀。吸取 1.0 L重复进样 6 次，记录色谱图。定量限重复性，甲醇面积平均值为 190，面积RSD 为 7.6%，10.0%；甲醇的信噪比均介于 815，此时的浓度 0.742 4 g/mL 为甲醇定量限浓度。2.3.2检测限精密称取甲醇 0.05 g 于 100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照液。吸取对照液 1.0 mL 于 10 mL 量瓶中，用 DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为定量限的储备液；吸取定ASWr100ArWs10106（1）表 1 系统适用性检测结果Table 1 Testingresult ofsystemsuitabilitytest名称123456平均RSD甲醇面积77 73077 47977 60077 52978 68575 09877 353.51.55%1342023 年第 5 期量限储备液 0.8 mL 于 50 mL 容量瓶中，用 DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为定量限溶液。吸取定量限溶液 2.5 mL 于 10 mL 容量瓶中，用 DMF溶解并稀释至刻度，摇匀作为检测限溶液。吸取检测限溶液 1.0 L 注入气相色谱仪，记录色谱图，甲醇峰的信噪比为 3.04，介于 24，保留时间为 1.810 min，此时的浓度 0.19 ug/mL 为甲醇检测限浓度。2.4线性及线性范围的测定在甲醇残留溶剂的定量限至甲醇残留溶剂限度的 150%之间，相关系数 R0.999，依次配制溶液，分别用 DMF 配制成 6 个不同浓度的溶液，甲醇 在 浓 度 0.7424 721 g/mL（LOQ-限 度 的150%）具有良好的线性，线性方程为 Y=171.24x+172.72，R2=0.999 8，R=0.999 9。甲醇标准溶液不同浓度峰面积见表 2。甲醇溶液线性关系如图 1 所示。2.5重复性的测定吸取溶剂 1.0 L 注入气相色谱仪中，记录色谱图。吸取检测限下的对照液 1.0 L，重复进样 5次，记录色谱图。甲 醇 对 照 的 平 均 值 为 82 546.4，RSD 为0.94%，5.0%，符合规定。甲醇对照液重复性检测结果见表 3。取一批安乃近样品，称取 6 个样，各 0.5 g，分别于 10 mL 容量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀。分别吸取 1.0 L，注入气相色谱仪中，记录色谱图。计算样品中检测到甲醇的平均值为 4010-6，RSD 为 7.62%，10%，符合规定。安乃近样品的甲醇检测结果见表 4。2.6样品溶液稳定性吸取 1.0 L DMF 注入气相色谱仪中，精密称取甲醇 0.05 g于 100 mL容量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。分别称取安乃近样品二个样，各 0.5 g，分别于 10 mL容量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀。分别吸取溶剂、对照溶液、样品溶液各 1.0L，注入气相色谱仪中，记录色谱图。标准溶液、样品溶液、溶剂分别在 0、4、8 h进样，记录色谱图。溶剂、样品溶液、标准溶液在 0、4、8 h 比较稳定；对照溶液的 RSD 为 1.5%，样品中甲醇检测结果的 RSD为 3.5%，5.0%，符合规定。2.7准确度的测定在甲醇残留溶剂限度的 80%、100%、120%3个水平项下。（1）空白溶剂，吸取 1.0LDMF 注入气相色谱仪中，空白溶剂中未检测到甲醇。（2）空白样品，精密称取安乃近 0.5 g 于 10mL 量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀。吸取 1.0L注入气相色谱仪中，样品中未检测到甲醇。表 2 甲醇标准溶液不同浓度峰面积Table 2 Table ofdifferent concentration peakareas ofmethanol standard solution浓度/（ug.mL-1）0.742 44.7547.5237.5475721甲醇峰面积192933795140 81882 985122 698图 1甲醇溶液线性关系Fig.1 Linear relationship ofmethanol solution表 3 甲醇对照液重复性检测结果Table 3 Testingresult ofmethanol standardsolution repeatabilitytest名称12345平均RSD甲醇峰面积83 24281 97281 59983 36882 55182 546.40.94%表 4 安乃近样品的甲醇检测结果Table 4 Methanol testingresult ofthree samplesofmetamizole sodiumsamples名称123456平均RSD甲醇面积397362331345334339甲醇结果计算4610-64210-63810-64010-63810-63910-64010-64.3%140 000120 000100 00080 00060 00040 00020 0000Y=171.24x+172.72R2=0.999 8YA(Area)线性(YA(Area)0200400600800张晓灿等：安乃近残留溶剂甲醇气相色谱检测方法135煤炭与化工2023 年第 5 期第 46 卷（3）标准储备液，精密称取甲醇对照 0.25 g于 50 mL容量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀。（4）进一针样品+标准溶液（甲醇限度的80%、100%、120%3 个水平）。（5）进一针标准溶液(甲醇限度的 80%、100%、120%3 个水平)。分别吸取各溶液 1.0 L 注入气相色谱仪，进一针样品+标准溶液、标准溶液（相应杂质限度的80%、100%、120%3 个水平），每个浓度取 3 次，分别进样，记录色谱图，以平均回收率做为甲醇测定的准确度，各组分定量的准确度应在 92%108%之间，RSD不得10.0%。然后用（4）-（2）/（5）-（1）来计算各个残留溶剂的回收率。注：（4）：样品+标准品（2）：样品（5）：标准品（1）：空白。平均回收率 100.27%介于 90%108%；RSD为 0.84%10.0%，符合规定。分别检测甲醇残留溶剂的 80%、100%、120%，样品加标准溶液80%、100%、120%中的甲醇，最后测得甲醇的平均回收率为 100.27%，RSD为 0.84%，符合规定。2.8耐用性精密称取甲醇 0.046 1 g 于 100 mL 容量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。吸取1.0 L标准溶液，重复进样 5 次。精密称取安乃近 0.781 3-0.281 2=0.500 1 g、0.781 7-0.281 6=0.500 1 g 于不同 10 mL 容量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀。吸取溶剂、标准溶液、样品溶液各 1.0 L，检测器、进样器、色谱柱、载气流速、柱温在正常条件下，注入气相色谱仪中，记录色谱图，耐用性项下正常条件检测结果见表 5。2.8.1柱温 58 吸取 2.8 项下溶液各 1.0 L，在其他条件不变，柱温 58 条件下，注入气相色谱仪中，标准溶液重复进样 5 次，记录色谱图，耐用性项下柱温58检测结果见表 6。2.8.2柱温 62 精密称取甲醇 0.046 8 g 于 100 mL 容量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。精密称取安乃近 0.500 1 g、0.500 0 g 于不同10 mL容量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀。分别吸取溶剂、标准溶液、样品溶液各 1.0L，在其他条件不变，柱温 62 条件下，注入气相色谱仪中，标准溶液重复进样 5 次，记录色谱图，耐用性项下柱温 62 检测结果见表 7。由表 7 可知，柱温在 60、58 和 62条件下，样品均未检测到甲醇，甲醇的 RSD5.0%，符合规定。2.8.3进样口温度进样口温度在 200、195 和 205 条件下进行。2.8.3.1进样口 195 分别吸取柱温 62 项下的溶剂、标准溶液、样品溶液各 1.0 L，在其他条件不变，进样口温度 195 条件下，注入气相色谱仪中，标准溶液重复进样 5 次，记录色谱图，耐用性项下进样口 195检测结果见表 8。2.8.3.2进样口 200 （同柱温 60 ）精密称取甲醇 0.046 1 g 于 100 mL 容量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。表 5 耐用性项下正常条件检测结果Table 5 Testingresult ofrobustness test on normal condition样品名称rongjiDZjia chun1DZjia chun2DZjia chun3DZjia chun4DZjia chun5yangpinyangpin甲醇面积未检测到75 08674 53374 07074 21671 701未检测到未检测到甲醇计算结果甲醇标准溶液平均值 73921.2，RSD为 1.76%未检测到未检测到表 7 耐用性项下柱温 62 检测结果Table 7 Robustness testingresult ofcolumn temperature 62 样品名称rongji（zhuwen62du）DZjia chun1（zhuwen62du）DZjia chun2（zhuwen62du）DZjia chun3（zhuwen62du）DZjia chun4（zhuwen62du）DZjia chun5（zhuwen62du）yangpin（zhuwen62du）yangpin（zhuwen62du）甲醇面积未检测到84 80184 95984 21983 24383 894未检测到未检测到甲醇计算结果甲醇标准溶液平均值84 223.2，RSD为 0.83%与原始结果比较 RSD为 0表 6 耐用性项下柱温 58 检测结果Table 6 Robustness testingresult ofcolumn temperature 58 样品名称rongji（zhuwen58du）DZjia chun1（zhuwen58du）DZjia chun2（zhuwen58du）DZjia chun3（zhuwen58du）DZjia chun4（zhuwen58du）DZjia chun5（zhuwen58du）yangpin（zhuwen58du）yangpin（zhuwen58du）甲醇面积未检测到74 16075 23974 57875 30475 101未检测到未检测到甲醇计算结果甲醇标准溶液平均值 74876.4，RSD为 0.66%与原始结果比较 RSD为 01362023 年第 5 期精密称取安乃近 0.500 1 g、0.500 1 g 于不同 10 mL容量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀。分别吸取溶剂、标准溶液、样品溶液各 1.0L，在正常条件下，注入气相色谱仪中，标准溶液重复进样 5 次，记录色谱图，耐用性项下进样口200 检测结果见表 9。2.8.3.3进样口 205 精密称取甲醇 0.044 7 g 于 100 mL 容量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。精密称取安乃近 0.500 1 g、0.500 1 g 于不同10 mL容量瓶中，用 DMF 稀释至刻度，摇匀。分别吸取溶剂、标准溶液、样品溶液各 1.0L，在其他条件不变，进样口 205 条件下，注入气相色谱仪中，标准溶液重复进样 5 次，记录色谱图，耐用性项下进样口 205 检测结果见表 10。由表 10 可知，进样口温度在 200、195 和 205 条件下，样品中均为检测到甲醇，甲醇的RSD为 0，5.0%，符合规定。2.93 批样品的测定取 3 批样品，按照 2.1.1 项下描述的方法进行检测，3 批样品残留甲醇测定的结果分别为 2810-6，1610-6，2210-6。安乃近样品中残留甲醇含量检测结果见表 11。3结语本文以 DB-WAX 柱（30 m0.32 mm0.50um），FID 检测器，在程序升温条件下进行检测安乃近残留溶剂甲醇的含量，具有操作简单、误差小，方便实验室操作的优点。使用 DMF 作溶剂，溶剂峰与甲醇能很好的分离，该气相色谱法检测甲醇溶液线性关系良好，线性方程 Y=171.24 x+172.72，R2=0.999 8，R=0.999 9。该方法能准确可靠的测定安乃近残留溶剂甲醇的含量，为提高安乃近产品的质量提供了保障。参考文献：1 中国药典 M.第一增补本.北京：中国医药科技出版社,2010.2 中华人民共和国药典 M.2020 年版二部.北京：中国医药科技出版社，2020.3 中华人民共和国药典 M.2020 年版四部.北京：中国医药科技出版社：2020.4 中华人民共和国药典 M.2020 年版四部.北京：中国医药科技出版社.5 GB/T9722，化学试剂气相色谱法通则S.6 王梅.安乃近合成工艺的改进 D.青岛：青岛科技大学,2013.7 GB/T9722，分析实验室用水规格和分析方法S.8 中国药品检验标准操作规范 2019 年版.9 HG2028-91，中华人民共和国化工行业标S.10 蔡颂公，马朝华.安乃近原料药的生产方法：中国，CN102584707BP.2014-11-26.11 李发美.分析化学（第 7 版）M.北京：人民卫生出版社.12 有机化学（第 7 版）M.北京：人民卫生出版社.表 10 耐用性项下进样口 205 检测结果Table 10 Robustness testingresult ofinjection port 205 样品名称rongji（Acap205）DZjia chun1（Acap205）DZjia chun2（Acap205）DZjia chun3（Acap205）DZjia chun4（Acap205）DZjia chun5（Acap205）yangpin（Acap205）yangpin（Acap205）甲醇面积未检测到76 83078 71077 80870 16672 348未检测到未检测到甲醇计算结果甲醇标准溶液平均值75 172.4，RSD为 4.95%与原始结果比较 RSD为 0。表 8 耐用性项下进样口 195检测结果Table 8 Robustness testingresult ofinjection port 195 样品名称rongji（Acap195）DZjia chun1（Acap195）DZjia chun2（Acap195）DZjia chun3（Acap195）DZjia chun4（Acap195）DZjia chun5（Acap195）yangpin（Acap195）yangpin（Acap195）甲醇面积未检测到84 11883 63584 76875 80881 554未检测到未检测到甲醇计算结果甲醇标准溶液平均值 81 975.8，RSD为 4.46%与原始结果比较 RSD为 0表 9 耐用性项下进样口 200 检测结果Table 9 Robustness testingresult ofinjection port 200 样品名称rongjiDZjia chun1DZjia chun2DZjia chun3DZjia chun4DZjia chun5yangpin（Acap200）yangpin（Acap200）甲醇面积未检测到75 08674 53374 07074 21671 701未检测到未检测到甲醇计算结果甲醇标准溶液平均值 7 3921.2,RSD为 1.76%未检测到未检测到表 11 安乃近样品中残留甲醇含量检测结果Table 11 Residual methanol content inthe metamizole sodiumsamples样品123甲醇含量/110-6281622张晓灿等：安乃近残留溶剂甲醇气相色谱检测方法137