HPV16和Krt7表达在子宫颈癌及癌前病变中的临床意义.pdf

128 医药前沿 2024年4月 第14卷第12期 综合医学1 资料与方法1.1 一般资料选 取 2021 年 1 月 2022 年 12 月 遂 宁 市 中 心 医院病理科进行病理检查的宫颈癌患者的病理组织样本50 例、不典型增生子宫颈上皮内瘤变（CIN）病理组织样本 50 例以及慢性宫颈炎病理组织样本 50 例，分为宫颈癌组（n=50）、CIN 组（n=50）以及慢性宫颈炎组（n=50）。宫颈癌组患者年龄 30 54 岁，平均年龄（44.734.49）岁；病程 6 个月 3 年，平均（1.650.47）年。宫颈癌前病变组患者年龄3158岁，平均（46.294.38）岁；病程16年，平均（2.560.6）年。宫颈炎组患者年龄 31 71 岁，平均（46.625.15）岁；病程 6 个月 4 年，平均（2.630.54）年。所有患者均未经放疗和化疗，患者年龄 30 71 岁，平均（46.924.85）岁。三组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P 0.05），具有可比性。本研究符合赫尔辛基宣言要求。纳入标准5：（1）宫颈癌组患者符合宫颈癌诊断标准，CIN 组患者符合 CIN 诊断标准，慢性宫颈炎组需要进行其他妇科手术患有慢性宫颈炎的患者；（2）术前患者均未进行放化疗或是激素治疗。排除标准：（1）妊娠期女性；（2）曾接受过宫颈或阴道病变治疗的患者；（3）合并有严重器质性疾病的患者；（4）合并其他原发恶性肿瘤并转移至宫颈者；（5）患有不可控制的感染性疾病者；（6）精神障碍的病者。1.2 方法（1）样本获取及处理：三组患者在手术过程中，手术操作均严格按照无菌操作规范完成。将获取的标本进宫颈癌是临床妇科最为常见的恶性肿瘤之一，根据统计数据显示，发病呈年轻化趋势，发病率逐年增高1-2。宫颈癌是全球妇女第四大常见恶性肿瘤。虽然人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）感染一直被认为是宫颈癌的主要病因，但在所有病例中，HPV 阴性宫颈癌占3%8%。当前，子宫颈癌的发病机制尚不明确，随着HPV 感染率的上升，宫颈癌的发病率也在增加。相关研究证实，HPV 是子宫颈癌的重要致病因子3。HPV 是一类攻击人体皮肤细胞的病毒，有 200 多种不同类型。这些病毒可以通过密切接触传播，如性行为。HPV 可能导致阴道、外阴、口腔、咽喉、宫颈、阴茎和肛门癌症3。宫颈上的 HPV 会损害宫颈表面的细胞，通常情况下，免疫系统可以抵御 HPV 并治愈受损细胞。然而，如果免疫系统无法应对 HPV，受损细胞将会逐渐增多并发生异常变化。几年后，宫颈受伤的细胞可能会变成癌细胞。角蛋白（keratins）形成上皮细胞特有的中间丝。角蛋白家族由 80 多种蛋白质组成，这些蛋白质形成异源二聚体，由一个型 K 分子和另一个型 K 分子组成。正常上皮细胞通常具有特定的角蛋白特征，不同组织学类型的上皮细胞的角蛋白特征各不相同。肿瘤在恶性转化过程中基本保留了角蛋白特征，这一特征被广泛用于癌的组织学鉴别诊断，角蛋白的异常表达会导致患者预后不良。相关研究表明，在胚胎期，角蛋白 7（keratin 7,Krt7）的表达广泛分布于整个宫颈上皮，而成人期则仅局限于宫颈鳞状上皮与柱状上皮的交界区。另外，一些学者指出，随着宫颈病变程度的加重，Krt7 的表达量也随之增加4。本研究旨在探讨 HPV16、Krt7 在子宫颈癌前病变中的临床意义，现报道如下。HPV16 和 Krt7 表达在子宫颈癌及癌前病变中的 临床意义李林丰，刘汝艺，夏涌然，梁 鹏，黄欣雨（通信作者）（遂宁市中心医院病理科 遂宁 四川 629000）【摘要】目的：探讨人乳头瘤病毒 16 型（HPV16）、角蛋白 7（Krt7）在子宫颈癌前病变中的临床意义。方法：选取 2021 年 1 月2022 年 12 月遂宁市中心医院病理科进行病理检查的宫颈癌患者的病理组织样本 50 例、不典型增生子宫颈上皮内瘤变（CIN）病理组织样本 50 例以及慢性宫颈炎病理组织样本 50 例，分为宫颈癌组（n=50）、CIN 组（n=50）以及慢性宫颈炎组（n=50）。采用免疫组织化学法对以上三组的样本的 HPV16、Krt7 表达量进行检测，统计学分析三组患者的 HPV16、Krt7 的表达量，分析 HPV16、Krt7 与宫颈癌组、CIN 组、慢性宫颈炎组患者病情发展的相关性。结果：宫颈癌组 HPV16 阳性表达率（100.00%）高于 CIN 组（58.00%）及慢性宫颈炎组（36.00%），三组两两比较，差异有统计学意义（P 0.05）。宫颈癌组 Krt7 阳性表达率（86.00%）高于 CIN 组（54.00%）及慢性宫颈炎组（22.00%），三组两两比较，差异有统计学意义（P 0.05）。宫颈癌组 HPV16 与 Krt7 均阳性表达率（90.00%）高于CIN 组（44.00%）及慢性宫颈炎组（2.00%），差异有统计学意义（P 0.05）。结论：HPV16、Krt7 的阳性表达可能是宫颈癌的潜在标志物，在宫颈癌病情发展过程中发挥重要作用。【关键词】宫颈癌；癌前病变；HPV16；角蛋白 7【中图分类号】R737.33【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2024）12-0128-03医药前沿 2024年4月 第14卷第12期 综合医学 129表 1 三组 HPV16 蛋白的表达水平情况比较组别例数表达强度阳性率/%-宫颈癌组500221414100.00CIN 组50211310658.00慢性宫颈炎组5032126036.00注：宫颈癌组与慢性宫颈炎组比较，2=47.059，P0.001；宫颈癌组与CIN组比较，2=26.582，P0.001；CIN组与慢性宫颈炎组比较，2=4.857，P=0.028。2.2 三组 Krt7 表达水平情况比较。宫颈癌组 Krt7 阳性表达率（86.00%）高于 CIN 组（54.00%）及慢性宫颈炎组（22.00%），三组两两比较，差异有统计学意义（P 0.05），见表 2。表 2 三组 Krt7 蛋白的表达水平情况比较组别例数表达强度/例阳性率/%-宫颈癌组50716131486.00CIN 组5023215154.00慢性宫颈炎组5039101022.00注：宫颈癌组与慢性宫颈炎组比较，2=41.224，P 0.001；宫颈癌组与 CIN 组比较，2=12.190，P 0.001；CIN 组与慢性宫颈炎组比较，2=10.866，P 0.001。2.3 三组 HPV16、Krt7 共同表达水平情况比较宫颈癌组 HPV16 与 Krt7 均阳性表达率（90.00%）高于 CIN 组（44.00%）及慢性宫颈炎组（2.00%），差异有统计学意义（P 0.05），见表 3。表 3 三组 Krt7 与 HPV16 均阳性表达情况比较组别例数Krt7（+）与HPV16（+）/例Krt7（-）或HPV16（-）/例阳性率/%宫颈癌组5045590.0CIN 组50222844.00慢性宫颈炎组501492.00#注：宫颈癌组与慢性宫颈炎组比较，2=77.939，P 0.001；宫颈癌组与 CIN 组比较，2=23.926，P 0.001；CIN 组与慢性宫颈炎组比较，2=24.901，P 0.001。3 讨论随着我国女性健康意识的提高、宫颈癌筛查的普及以及癌前病变早期治疗水平的提高，宫颈癌患者的发病率在一定程度上得到了遏制。然而，越来越多的女性检测出存在不同程度的子宫颈病变。根据以往研究总结，宫颈癌的发生是多种因素协同作用的结果，其组织学改变从鳞状上皮的单纯性增生-不典型增生-原位癌-浸润性癌的发展过程7-8。现阶段，HPV 公认为乳多空病毒科 A 亚群中的一组 DNA 病毒，具有致癌作用。从宫行常规处理。（2）免疫组化染色：本研究采用 EnVision二步法进行检测。将标本进行常规脱蜡环保透明剂脱蜡3 次，每次 10 min；再将切片放在乙醇里面，将脱蜡的环保透明剂置换出来，依次进入 100%乙醇 3 次，每次10 min；95%乙醇 2 次，每次 10 min；80%乙醇 10 min，70%乙醇 10 min，再将切片浸泡在蒸馏水中，进行水化；同时将盛有枸橼酸缓冲液的烧杯放在高压锅中进行预热，预热后将切片放进该缓冲液中进行高温高压修复，待高压锅加热至上汽后再修复 5 min，关火后将高压锅放在在通风处，待其自然冷却。冷却后，拿出切片浸泡在 PBS缓冲液中，浸泡 10 min；然后甩干切片上的液体，使用免疫组化笔对组织进行画圈，再分别对各组标本分别滴加抗体，确保抗体完全覆盖组织，液面饱满，放在湿盒中，放置于 4 冰箱环境下过夜。次日，将湿盒取出，放在室温环境中进行复温，复温 30 min 后，再采用 PBS 漂洗10 min。漂洗结束后，滴加 EnVision 二抗（1 100），37 温度下孵育 30 min，再采用 PBS 漂洗 10 min，漂洗结束后采用 DAB 显色剂进行显色（DAB 需要现配现用，注意避光），显色 10 min 后，蒸馏水冲洗终止显色后进行苏木精复染 10 min，复染结束后将切片放在盐酸乙醇里面分化 30 s，分化结束后使用流水返蓝；返蓝结束后再进行梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，晾干后进行镜下结果观察。1.3 免疫组化染色结果判定标准本次研究采用每高倍镜（400）视野阳性细胞百分比进行计分6。染色强度标准：3 分：棕褐色；2 分：棕黄色；1 分：淡黄色；0 分：无染色。阳性细胞标准：4 分：75%；3 分：51%75%；2 分：26%51%；1 分：5%26%；0 分：5%。将染色强度 阳性细胞评分所得结果：1 为阴性；1 为阳性由 2 名高年资病理科医生进行阅片，HPV16 蛋白表达主要定位于细胞膜，可有细胞质着色；Krt7 蛋白表达主要定位于细胞膜，观察上述指标的阳性定位，以及其染色强度。1.4 统计学方法使用 SPSS 18.0 统计软件进行数据处理。符合正态分布的计量资料采用均数 标准差（x s）表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料用频数和百分率n（%）表示，组间比较采用2检验。P 0.05 表示差异有统计学意义。2 结果2.1 三组 HPV16 表达水平情况比较宫颈癌组 HPV16 阳性表达率（100.00%）高于 CIN组（58.00%）及慢性宫颈炎组（36.00%），三组两两比较，差异有统计学意义（P 0.05），见表 1。130 医药前沿 2024年4月 第14卷第12期 综合医学【参考文献】1 高福锋，张师前子宫颈癌的预防与规范化诊疗 J中国临床医生杂志，2023,51(3):258-263.2 何立群，袁婧，胡孟钧人乳头瘤病毒 E6/E7 mRNA 检测与宫颈低度鳞状上皮内病变预后的相关性分析 J中国妇幼保健，2023,38(6):979-982.3 VIDAL A C,SKAAR D,MAGUIRE R,et al.IL-10,IL-15,IL-17,and GMCSF levels in cervical cancer tissue of Tanzanian women infected with HPV16/18 vs.non-HPV16/18 genotypes J.Infect Agents Cancer,2015,10(1):1-7.4 戴永刚，张乃馨，穆家康HPV 亚型与子宫颈癌前病变及癌变的关系研究 J中国肿瘤临床与康复，2018,25(6):657-659.5 侯兴华，孙笑非，李春杨，等子宫颈癌、子宫颈上皮内病变组织中 SIRT1、HPV 16/18E6 的表达及其意义 J临床与实验病理学杂志，2016,32(9):994-997.6 李凌，李隆玉，杨起楠，等高危型 HPV 载量与分型检测对宫颈高级别病变预测价值的前瞻性队列研究 J中国肿瘤临床，2016,43(9):376-380.7 美丽古丽 莫合买提 Krt7和p16在宫颈病变进展中的临床意义D石河子：石河子大学，2017.8 李杏婵，何雅婷，赵愚高危型 HPV 感染与宫颈癌前病变、宫颈癌的关系分析 J中国医药科学，2020,10(16):71-73.9 邓凯琳宫颈鳞状上皮内病变患者 HPV 分型检测结果分析 J中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生，2022(9):31-34.10 ZHANG Q,ZHAO M Y,CAO D,et al.Assessment of the effectiveness of HPV16/18 infection referred for colposcopy in cervical cancer screening in Northwest of China J.J Med Virol,2018,90(1):165-171.11 唐志坚，赵超，李明珠，等高危型人乳头瘤病毒感染的不同级别子宫颈病变患者细胞免疫状态分析 J中国实用妇科与产科杂志，2023,39(10):1024-1029.颈上皮的轻度病变到发展为宫颈癌，整个过程大约需要十多年的时间，因此，早期诊断、早期治疗=可以控制病情发展，降低宫颈癌的发病率。既往研究表明，HPV 是宫颈癌的主要病原体，HPV 检测阳性率为 95%100%9。在子宫颈癌病变过程中，HPV16 主要是通过干扰机体正常细胞周期的检测机制，使细胞获得异常的增殖能力，从而发生恶性转化。本次研究结果显示，宫颈癌组 HPV16 阳性表达率（100.00%）高于CIN组（58.00%）及慢性宫颈炎组（36.00%），三组两两比较，差异有统计学意义（P 0.05）。表明在子宫颈癌病变的早期就已经有 HPV16 的参与，提示HPV16 与子宫颈癌及癌前病变的发生、发展密切相关。Krt7 是角蛋白基因家族的成员之一，这一蛋白具有重要的生理功能，主要参与 DNA 复制、细胞周期的调控以及相应基因的表达等8-11。有学者研究发现，在胚胎期 Krt7 蛋白表达分布于整个宫颈上皮，到成人期 Krt7 仅局限于宫颈鳞柱交界区，推测出这一蛋白可能是宫颈表面上皮的胚胎源性干细胞标记物7。同时，也有相关研究学者认为这一蛋白与宫颈癌的发生、发展具有十分密切的关系，本研究结果显示，宫颈癌组 Krt7 阳性表达率（86.00%）高于CIN组（54.00%）及慢性宫颈炎组（22.00%），三组两两比较，差异有统计学意义（P 0.05）。Krt7阳性率随着组织学级别的增高而增加，提示 Krt7 的表达程度与子宫颈癌的组织学分级具有一定相关性。此外，本次研究结果还显示，宫颈癌组 HPV16 与 Krt7 均阳性表达率（90.00%）高于 CIN 组（44.00%）及慢性宫颈炎组（2.00%），差异有统计学意义（P 0.05）。说明HPV16、Krt7 联合检测能够更为有效筛选出子宫颈癌的高危人群。病与寄生虫学，2023,21(4):232-237.6 陈晟，严慧艳，陶剑文，等上海市大场社区老年居民睡眠质量调查及影响因素分析 J慢性病学杂志，2023,24(10):1441-1444.7 刘琳，徐德翠新型冠状病毒肺炎疫情暴发期重点医院医护的失眠情况及影响因素分析 J武汉大学学报（医学版），2023,44(9):1062-1067.8 赖靖慧，蔡扬帆，张仁雄，等睡眠限制联合刺激控制治疗原发性失眠的临床观察 J中外医学研究，2020,18(33):57-59.9 张娟，沈定毅，许文杰，等224 例中老年女性共病性失眠的影响因素分析 J中西医结合心脑血管病杂志，2023,21(13):2498-2500.10 马瑞红，王雪可，崔应麟老年失眠症的中医研究进展 J中国中医药现代远程教育，2023,21(22):200-202.【参考文献】1 陆德钱浅针联合认知行为干预对原发性失眠患者睡眠质量的影响 J中国医药指南，2023,21(16):132-134.2 张天元，杨莹莹，崔书克失眠的中西医研究进展 J中国中医药现代远程教育，2023,21(10):196-199.3 孟令娜，王娜娜，韩晓嫣，等失眠认知行为疗法对慢性失眠症患者焦虑及睡眠的影响 J临床心身疾病杂志，2023,29(6):96-99.4 DRAGER L F,PACHITO D V,MORENO C R C,et al.Insomnia episodes,new-onset pharmacological treatments,and other sleep disturbances during the COVID-19 pandemic:a nationwide cross-sectional study in 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