环吡酮胺发用洗剂的制备及含量测定_石锦峰.pdf

202312分析与检测39Modern Chemical Research当代化工研究环吡酮胺发用洗剂的制备及含量测定石锦峰1 李媛媛1 徐旭辉1 张帅1 董自波1,2*（1.江苏海洋大学药学院 江苏 2220052.江苏省教育厅高校优秀科技创新团队，海洋药用资源开发工程研究中心 江苏 222005）摘要：制备环吡酮胺发用洗剂，并采用HPLC法测定环吡酮胺含量。采用Waters X TerraR MS C18（3.0mm100mm column）色谱柱，以0.096%的乙二胺四乙酸二钠溶液-冰醋酸（750:0.1）为流动相A，乙腈为流动相B,采用梯度洗脱，流速0.7mL/min，检测波长为304nm,柱温：30，进样量：20L。结果表明，环吡酮胺在0.060.09mg/mL范围内，浓度与峰面积的线性关系良好（r=0.9938），回收率、精密度符合要求，空白辅料对环吡酮胺的测定没有干扰，含量测定方法简便、灵敏、准确。关键词：环吡酮胺；HPLC；制备；含量测定中图分类号：R927.2 文献标识码：ADOI：10.20087/ki.1672-8114.2023.12.013Preparation and Content Determination of Ciclopirox Olamine Hair LotionShi Jinfeng1,Li Yuanyuan1,Xu Xuhui1,Zhang Shuai1,Dong Zibo1,2*(1.School of Pharmacy,Jiangsu Ocean University,Jiangsu,2220052.Excellent Science and Technology Innovation Team of Jiangsu Provincial Department of Education,Jiangsu Marine Pharmaceutical Resources Development Engineering Research Center,Jiangsu,222005)Abstract：Preparation of ciclopirox olamine hair lotion,determination of ciclopirox olamine content by HPLC.A Waters X TerraR MS C18(3.0 mm100 mm column)chromatographic column was used,0.096%disodium ethylenediaminetetraacetate solution-glacial acetic acid(750:0.1)was used as mobile phase A,acetonitrile was used as mobile phase B,and gradient elution was used.The flow rate was 0.7 mL/min,the detection wavelength was 304 nm,the column temperature:30 C,and the injection volume:20 L.The results showed that ciclopirox olamine was in the range of 0.060.09 mg/mL,and the linear relationship between the concentration and the peak area was good(r=0.9938),and the recovery and precision meet the requirements.Blank excipients did not interfere with the determination of ciclopirox olamine,and the content determination method is simple,sensitive and accurate.Key words：ciclopirox olamine；HPLC；preparation；content determination头皮脂溢性皮炎是一种慢性炎症性皮肤病,主要临床表现包括头皮油腻、头皮发痒、头皮屑、毛囊炎、甚至脱发等1。传统治疗方法如口服抗生素、局部外用糖皮质激素等，对头皮刺激性大，不良反应多，且容易出现反跳现象和耐受性2，而局部外用抗真菌药使用安全、疗效好且持久，此外马拉色菌在头皮脂溢性皮炎中的致病作用表明此种疾病的严重程度会随着头皮上微生物数量的增加而增加，因此当前首选抗真菌药物治疗3-4。环吡酮胺是人工合成的吡啶酮类抗真菌药，目前国外已有上市的相关发用洗剂，但国内目前尚无此类制剂面市5。现参考国外已上市制剂的处方6，进行工艺调整和优化后，制备环吡酮胺发用洗剂，采用高效液相色谱法测定环吡酮胺发用洗剂中环吡酮胺的含量，并采用之前在各环吡酮胺制剂含量分析方法中未被采用过的梯度洗脱的方式，使测定更为准确。1.仪器与材料（1）主要仪器。Agilent 1260高效液相色谱仪，赛多利斯MSA125P-100-DA电子天平，赛多利斯SQP电子天平，BME100LX高剪切混合乳化机。（1）材料。环吡酮胺对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100232-201402）；乙腈（色谱纯）；冰醋酸（分析纯）；环吡酮胺原料药（常州上药康丽制药有限公司，批号：CPO20210102）；乙二胺四乙酸二钠（四川奥瑞特化学试剂有限公司）；月桂醇聚醚硫酸酯钠（赞宇科技集团股份有限公司）；磷酸氢二钠十二水合物（成都华邑药用辅料制造有限责任公司）；枸橼酸（湖南新绿方药业有限公司）；椰油酰胺DEA（广州至诚洗涤原料有限公司）；己二醇（罗辅医药科技有限公司）；油醇（巴斯夫股份公司）；聚山梨酯80（湖南尔康制药股份有限公司）；聚季铵盐-10（广州天赐高新材料股份有限公司）；椰油酰胺丙基甜菜碱（湖北中诺亚星生物科技有限公司）。2.方法与结果(1)处方环吡酮胺1.5g，月桂醇聚醚硫酸酯钠17g，椰油酰胺丙基甜菜碱6g，磷酸氢二钠十二水合物1g，枸橼酸0.7g，椰油酰胺DEA3g，己二醇0.22g，油醇6g，聚山202312分析与检测40Modern Chemical Research当代化工研究梨酯800.6g，聚季铵盐-100.3g，氢氧化钠适量，纯化水补齐。(2)制备加入纯化水，加入聚季铵盐-10，加热并恒温至75，启动搅拌，搅拌至完全溶解，按顺序加入磷酸氢二钠十二水合物、月桂醇聚醚硫酸酯钠、己二醇、椰油酰胺丙基甜菜碱、椰油酰胺DEA、聚山梨酯80、环吡酮胺、油醇（均待上一辅料溶解完全后再加入下一辅料），温度下降并维持至45，接着加入枸橼酸至完全溶解，用纯化水补齐处方量后缓慢搅拌溶解，根据终点pH值确定氢氧化钠加入量，调pH至5.70左右。(3)含量测定色谱条件色谱柱：Waters X TerraR MS C18（3.0mm100mm column）色谱柱；流动相：流动相A为0.096%的乙二胺四乙酸二钠溶液-冰醋酸（750:0.1），流动相B为乙腈，梯度洗脱，流速0.7mL/min；检测波长：304nm；柱温：30；进样量：20L。流动相梯度如下：表1 流动相梯度时间/min流动相A/%流动相B/%0.0075.025.020.0075.025.035.0010.090.040.0075.025.060.0075.025.0溶液的制备A.溶剂对照溶液（混合流动相）的制备。流动相A:流动相B=3:1。B.对照品溶液的制备。精密称取环吡酮胺对照品15.0mg，加含冰醋酸100L、乙腈10mL与混合流动相75mL的混合溶液，超声溶解，用混合流动相稀释至100mL，摇匀。精密量取5mL至10mL容量瓶中，加混合流动相稀释至刻度，摇匀，超声，滤过。C.供试品溶液的制备。称取环吡酮胺发用洗剂1.0g，加含冰醋酸100L、乙腈10mL与混合流动相75mL的混合溶液，超声溶解，用混合流动相稀释至100mL，摇匀。精密量取5mL至10mL容量瓶中，加混合流动相至刻度，摇匀，超声，滤过。D.空白辅料溶液的制备。称取处方量的（除环吡酮胺外）的各辅料，按照环吡酮胺发用洗剂配制方式按相同加入顺序和用量配制成空白辅料样品。取约1.0g空白辅料，加含冰醋酸100L、乙腈10mL与混合流动相75mL的混合溶液使溶解，超声溶解，用混合流动相稀释至100mL，摇匀。精密量取5mL至10mL容量瓶中，加混合流动相至刻度，摇匀，超声，滤过。系统适用性试验及专属性试验 按2.3.1项下色谱条件，将溶剂对照溶液、空白辅料溶液、供试品溶液、对照品溶液分别进样。环吡酮胺的保留时间约为18.8min，峰形较对称，发用洗剂中的辅料不干扰环吡酮胺的含量测定，结果见图1。A.溶剂对照溶液；B.空白辅料溶液；C.供试品溶液；D.对照品溶液图1 系统适用性及专属性色谱图线性关系考察 精密称取环吡酮胺对照品15.0mg，加含冰醋酸100L、乙腈10mL与混合流动相75mL的混合溶液，超声溶解，用混合流动相稀释至100mL，摇匀。分别移取溶液4mL、4.5mL、5mL、5.5mL、6mL至不同100mL容量瓶中，用混合流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。制成相当于对照品溶液的80%、90%、100%、110%、120%的线性溶液。分别进样（各质量浓度连续进样两针），记录色谱图，并以质量浓度（C，mg/mL）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：A=1568.9C+3.7583（n=5），r=0.9938。结果表明峰面积与其质量浓度线性关系良好，环吡酮胺质量浓度在合理范围内，满足质量控制要求。回收率试验 分别精密称取环吡酮胺对照品12.0mg、15.0mg、18.0mg各三份，加入约1.0g空白辅料，加含冰醋酸100L、乙腈10mL与混合流动相75mL的混合溶液，超声溶解，用混合流动相稀释至100mL，摇匀。精密量取5mL至10mL容量瓶中，加混合流动相至刻度，摇匀，超声，滤过。取三个质量浓度的供试品溶液各三份分别连续进样。结果平均回收率为100.6%，RSD为1.157%。结果见表2。表2 回收率试验结果（n=9）加入量/(mg/mL)测得量/(mg/mL)回收率/%平均回收率/%RSD/%0.0630.06299.310.0600.05998.980.0600.05999.090.0800.081101.930.0760.077101.10100.61.1570.0810.082101.400.0920.093100.620.1000.101101.680.096 0.097101.26202312分析与检测41Modern Chemical Research当代化工研究重复性试验 称取环吡酮胺发用洗剂1.0g，加含冰醋酸100L、乙腈10mL与混合流动相75mL的混合溶液，超声溶解，用混合流动相稀释至100mL，摇匀。精密量取5mL至10mL容量瓶中，加混合流动相至刻度，摇匀，超声，滤过，取续滤液作为供试品溶液（平行配制6份分别连续进样）。对照品溶液同“系统适用性试验”项下。结果平均标示含量为109.22%，RSD为1.61%（n=6）。定量限和检测限 根据2.3.2项下对照品溶液信噪比情况，取对照品溶液适量，用混合流动相逐级稀释配制成不同浓度的溶液，分别进样记录色谱图，直至信噪比（S/N）为10:1时，得到定量限溶液，环吡酮胺定量限质量浓度为2g/mL，信噪比（S/N）为3:1时，得到检测限溶液，环吡酮胺最低检测限为0.5g/mL。耐用性考察取“系统适用性”项下供试品溶液和对照品溶液分别进样，每次仅改变色谱条件中的单一条件，考察当测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的程度。考察条件1：原色谱条件；条件2：仅改变流速为0.5mL/min，其他条件不变；条件3：仅改变流速为0.9mL/min，其他条件不变；条件4：仅改变柱温为25，其他条件不变；条件5：仅改变柱温为35，其他条件不变；条件6：仅改变EDTA水溶液的含量为0.092%，其他条件不变；条件7：仅改变EDTA水溶液的含量为0.1%，其他条件不变。结果：供试品溶液各条件下环吡酮胺峰面积RSD为1.893%，对照品溶液各条件下环吡酮胺峰面积RSD为1.885%，表明耐用性良好。稳定性试验 同2.3.2项下供试品溶液和对照品溶液配制方法，临用新配。分别于0h、4h、8h、16h、24h、36h、48h进样分析，测定峰面积，计算放置一段时间后供试品溶液和对照品溶液的环吡酮胺峰面积的RSD，结果表明，供试品溶液和对照品溶液在48h内稳定，RSD分别为0.60%和1.71%（n=7）。样品含量测定取三批样品，批号分别为21120101、21120102、21120103，均按2.3.2项下供试品溶液配制方法配制成，另取对照品溶液，按色谱条件依次进样，按外标法以峰面积计算供试品中环吡酮胺含量，结果见表3。表3 样品含量测定结果（n=3）批号环吡酮胺含量/%平均值/%211201011.62211201021.581.597211201031.593.讨论本文在建立HPLC测定方法时通过参考国外已上市发用洗剂的处方7-8，对原辅料用量及工艺流程进行了优化，最终制得了质地均匀、含量准确的发用洗剂。所建立的HPLC方法能够有效测定环吡酮胺发用洗剂中环吡酮胺的含量，与之前一些文献中及药典9所用方法相比，具有明显优势。如胡寒山等人10-11采用乙腈-甲醇-缓冲液作为流动相，虽然能准确测定环吡酮胺含量，但通过参考其他文献及实际实验中发现甲醇的比例对环吡酮胺峰形影响不明显，乙腈的比例对环吡酮胺峰形影响较大，因此选择直接采用乙腈并调整其比例12。本文不仅对流动相种类配比进行了优化，而且采用了梯度洗脱的方式，避免了连续进针时上一针残留对下一针结果所造成的影响。因此，具有简便快速，专属性强，稳定性好，分离效果好，色谱图峰形较好，测定结果较为准确的优点，可用于环吡酮胺发用洗剂的含量测定。【参考文献】1唐磊,周汛,王淑美.头皮脂溢性皮炎病因及治疗研究概述J.实用中医药杂志,2021,37(06):1074-1076.2TAJIMA M,SUGITA T,NISHIKAWA A,et al.Molecular analysis of Malassezia microflora in seborrheic dermatitis patients:comparison with other diseases and healthy subjectsJ.The Journal of investigative dermatology.2008,128(2):345-351.3BARONI A,DE ROSA R,DE ROSA A,et al.New strategies in dandruff treatment:growth control of Malassezia ovalisJ.Dermatology,2000,201:332-336.4BULMER AC,GLENN S.The antifungal action of dandruff 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