年产300吨螺旋霉素的发酵基本工艺设计.doc

1绪论1.1引言螺旋霉素，英文名Spiramycin。白色或微黄色粉末，微有味；微吸湿；易溶于乙醇、丙醇、丙酮和甲醇，难溶于水。该品系多组分大环内酯类抗生素，具备强大体内抗菌作用和抗菌后效应（PAE），可以增强吞噬细胞吞噬作用，广泛分布于体内。本品在组织细胞内浓度较红霉素高，而副作用不大于红霉素。与红霉素有交叉耐药。对革兰阳性菌和某些革兰阴性菌如链球菌、脑膜炎双球菌、百日咳杆菌、梭状芽胞杆菌等涉及对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素耐药菌均有效。螺旋霉素是多组分抗生素，其重要成分涉及螺旋霉素I、II、III。其发酵液中组分I含量最高，为60；另一方面是组分II含量，为24；最后是组分III含量，为13。各组分活性相近。螺旋霉素是3种组分复合物，复合物为奶油色、味苦无定形碱性抗生素。可溶于氯仿、醇类、己烷、苯、酮、醋酸酯，微溶于水。其硫酸盐溶于水和低档醇。熔点：组分I为134137：组分II为130133；组分III为128131。在231-232 um处有紫外吸取峰，自身带有发色基团。遇浓硫酸或盐酸呈紫色反映。麦芽酚反映、茚三酮反映、坂口反映、双缩反映、斐林反映均为阴性。近年来，在国内药物市场中，抗感染药物销售额始终位居第1，当前年销售额已达400多亿元人民币，占全国年药物销售总额30%左右。在抗感染药物市场中，大环内酯类抗生素是主力军之一，在此后发展中，国内医疗保障系统将会更完善，对螺旋霉素及其衍生物需求也会加大。2.菌种选育2.1出发菌种选取普通菌种分离纯化和筛选环节如下：采样材料预解决分离所需菌种培养菌种菌落选取菌种初筛菌种复筛性能鉴定菌种保藏用产二素链霉菌SIPI9004生产螺旋霉素。2.2筛选培养基和培养条件琼脂培养基/%：葡萄糖1.5，黄豆饼粉1.0，麸皮1.0，MgSO47H2O0.05，CaCO30.3，琼脂2.0；pH7.0，28培养12d。种子培养基：葡萄糖，淀粉，黄豆饼粉，酵母粉，NaCl，CaCO3；pH7.0，斜面孢子挖块接种，摇瓶置于旋转摇床(230r/min)，28培养48h。发酵培养基：淀粉，鱼粉，酵母粉，NaCl，NaNO3，KH2PO4，CaCO3；pH6.5，取种子培养液10%移种于发酵摇瓶中，摇床(230r/min)，28培养120h。2.3测定办法总糖：用费林法测定。菌体浓度：取发酵液10ml置于刻度离心管中，离心(3000rmin)10min，测定菌丝体湿重。发酵单位：取发酵滤液用杯碟法测定，藤黄八叠球菌为检定菌。2.4菌种解决 单孢子悬浮液制备：新鲜孢子斜面加入无菌生理盐水，洗下孢子经滤纸过滤，镜检单孢子分散度达到97%以上方可用于诱变解决。2.5菌种诱变 吸取单孢子悬浮液6ml培养皿，置于30WUV灯(253.7nm)下30cm处，振动照射解决，杀死率控制在90%左右。2.6初筛 用氨基乙酸和缬氨酸作为筛选剂，以恰当浓度分别加至琼脂培养基中，制成不含药物平板及药物浓度梯度平板。将诱变后存活孢子涂布于上述平板上，恒温培养；UV解决和不解决孢子，分别涂布于不含药物琼脂培养基平板上培养作对照。分别选用单菌落传斜面培养。2.7摇瓶复筛斜面挖块移种种子瓶培养；以10%接种量移种发酵瓶发酵培养，发酵滤液作生物效价测定，去劣留优。2.8高产菌株高产菌株为突变产二素链霉菌SIPI9004生产螺旋霉素。3菌种保藏菌种保藏办法有：斜面菌种低温保藏法、砂土管保藏法、甘油封藏法、真空冷冻干燥法、液氮超低温保藏法。真空冷冻干燥法：是当前比较抱负一种办法。在低温-15C下，迅速将细胞冻结，并保持细胞完整，然后在真空中使水分升华至干。在此环境下，微生物生长和代谢都暂时停止，不易发生变异，故可长时间保存，普通为5-，最多可达之久。此法兼备了低温、干燥及缺氧几方面条件，使微生物可以保存较长时间，但过程较麻烦，需要一定设备。产二素链霉菌遗传极不稳定，在培养过程或菌株保藏中，常发生变异，故采用真空冷冻干燥法。4培养基配备4.1配制培养基原则培养基是指可供微生物细胞生长繁殖所需一组营养物质和原料，同步也为微生物生长提供除营养外其她生长所需条件。原则上满足必要原料；生化反映基本条件（温度、溶氧和批pH）；来源丰富、价格低廉、取材以便、质量稳定；培养基成分不影响下游产品提取加工。4.2培养基类型培养基可以按照用途可以提成孢子培养基、种子培养基和发酵培养基。4.2.1孢子培养基孢子培养基是供菌种繁殖孢子一种惯用固体培养基。 4.2.2种子培养基种子培养基是供孢子发芽、生长和大量繁殖菌丝体，并使菌丝体长粗壮，成为活力强“种子”。4.2.3发酵培养基 发酵培养基既要有助于生长繁殖，防止菌体过早衰老，又要有助于产物大量合成。4.3发酵培养基与培养条件孢子培养基 琼脂培养基%：葡萄糖1.5，黄豆饼粉1.0，麸皮1.0，MgSO47H2O0.05，CaCO30.3，琼脂2.0；pH7.0，28培养12d。种子培养基(g/L)淀粉30，黄豆饼粉20，葡萄糖5，磷酸二氢钾0. 5，蛋白胨6，豆油5，氯化钠4。以温度 280.5，220r/min培养。发酵培养基(g/L)淀粉70 ，黄豆饼粉15，玉米浆7，动物蛋白NY5，糊精12，氯化钠4，硝酸铵6，碳酸钙5，磷酸二氢钾0. 5，硫酸镁1，豆油3。以温度 280.5，接种量8% ，220r/min 培养96h。4.3.1碳源碳源是构成培养基重要成分之一，其重要功能有两个：一是为微生物菌种生长繁殖提供能源和合成菌体所必要碳成分；二是为合成目产物提供所需碳成分。发酵条件研究发现：不同碳源中以淀粉最佳，糊精次之，最差是蔗糖和乳糖。本设计中发酵培养基所用碳源为淀粉与葡萄糖。4.3.2氮源氮源重要用于构成菌体细胞物质和含氮代谢物。惯用氮源分为有机氮源和无机氮源。本设计发酵培养基中有机氮源是黄豆饼粉、玉米浆和鱼粉；无机氮源是硝酸铵。4.3.3无机盐和微量元素无机盐和微量元素是生理活性物质构成成分或具备生理调节作用，磷（核酸）、硫、铁（细胞色素）、镁、钙（调节细胞膜透性）、锰、铜、锌（辅酶或激活剂）、钴、钾、钠（调节渗入压）、氯。普通低浓度起增进作用，高浓度起抑制作用。4.3.4水 水是所有培养基重要构成成分，是生命活动不可或缺物质，是细胞重要成分，良好介质，营养传递道体，调节细胞生长。4.3.5生长因子生长因子是指氨基酸、核苷酸、维生素、脂肪酸等菌体必要地生理活性物质。在这种天然培养集中已然具有无需添加。4.3.6前体物质在抗生素发酵过程中加入前提物可以控制菌体合成抗生素方向和增长抗生素产量。在螺旋霉素发酵中不同前体物对发酵有不同影响。本设计采用正丙醇作为前体。在20h补加0.5%正丙醇。4.3.7消泡剂在发酵过程中会有泡沫浮现，需要添加消泡剂进行消泡。本设计中具有豆油，可作为消泡剂。 5.灭菌灭菌是指运用物理或化学办法杀灭或除去物料及设备中一切有生命物质过程。惯用灭菌办法有：化学灭菌法，射线灭菌法，干热灭菌法，湿热灭菌法，过滤除菌法。5.1培养基灭菌为减少对培养基破坏，采用湿热灭菌。培养基湿热灭菌还分分为：培养基分批灭菌和持续灭菌。分批灭菌设备简朴，易操作，但是计算难，耗时长，对培养基破坏比较大。持续灭菌在不同温度下分开灭菌，减少了培养基受热破坏限度，灭菌时间短，提高了设备运用率。本设计采用湿热持续灭菌对培养基进行灭菌。5.1.1持续灭菌设备配料预热罐，将配好料液预热到6070 ，以避免灭菌时由于料液与蒸汽温度相差过大而产生水汽撞击声；连消塔，连消塔作用重要是使高温蒸汽与料液迅速接触混合，并使料液温度不久升高到灭菌温度；维持罐，是一种直立圆形容器，附有进出料管道，保温时，培养基由进料口持续进入维持罐底部，液面不断上升，离开罐后流入冷却器。喷淋冷却器，普通安装在室外，顶端装有带齿轮水槽，冷却水从水槽内溢出沿下方管壁以膜状依次流下。培养基从下部进入，从上部排出由分派站进入发酵罐。5.1.2持续灭菌流程 图5-1-2 持续灭菌流程图培养基在采用持续灭菌时，发酵罐应当在持续灭菌前先进行空罐灭菌，普通先把发酵罐空气过滤器灭菌并用空气吹干。加热器、维持罐及冷却设备也应先行灭菌。构成培养基不同成分可以在不同温度下分开进行灭菌，以减少培养基受热破坏限度。持续灭菌时，培养基在短时间内被加热到131 ，短时间保温8min后，被迅速冷却，在进入早已灭菌完毕发酵罐。（1）配料 配料罐用于培养基配备。然后将培养基用泵打入预热桶中。、（2）预热 预热桶作用一是定容，二是预热。预热目是使培养基在后续加热过程中能迅速升到指定灭菌温度，同步避免太多冷凝水带入培养基，还可减少震动和噪声。普通可将培养基预热到7090 .（3）预热好培养基由连消泵打入加热器。加热器也称连消塔，使培养基与蒸汽混合并迅速达到灭菌温度。加热采用蒸汽压力普通为0.450.8MPa，其目是使培养基在较短时间（2030s）里迅速升温。加热器有塔式加热器和喷射加热器两种。（4）保温 保温是将培养基维持灭菌温度一段时间，使杀灭微生物重要过程。其设备有维持罐和管事罐两种。保温设备普通采用保温材料包裹，但不直接通入蒸汽。（5）降温 升降温快是持续灭菌重要特性之一，为避免培养基营养成分破坏，保温后培养基需要迅速降温至接近培养温度（4050 ）.国内大多采数用喷淋冷却设备，也有采用螺旋板式换热器、板式换热器、真空冷却器等。反映依照培养基特点、解决量、场地特性选用喷淋冷却设备。5.2发酵罐灭菌空罐灭菌办法：从关于管道通入蒸气，使罐内蒸气压力达0.147MPa，维持45min。灭菌过程从关于阀门，边阀排除空气，并使蒸气通过达到死角灭菌。灭菌完毕，关闭蒸气后，待管内压力低于空气过滤器时，通入无菌空气保压0.098MPa。5.3空气除菌空气中微生物重要是细菌、酵母菌、霉菌和病毒，它们大多附着在空气中灰尘上。5.3.1空气预解决图为空气净化系统流程图，把这一流程中过滤器此前某些称为空气预解决。 图5-3-1空气除菌设备流程图采风塔：采风塔建在工厂上风头，远离烟囱，采风塔可用灰铁皮或砼制成。采风塔越高越好，至少10 m，气流速度为8 m/s。粗过滤器：安装在空压机吸入口前，重要作用是拦截空气中较大灰尘以保护空气压缩机，同步起一定除菌作用，减轻总过滤器承担。应阻力小，容量大。空气压缩机：作用是提供动力，以克服随后各设备阻力。本设计采用往复式空压机。空气贮罐：作用是消除压缩空气脉动，空气贮存，降温，保证稳定出口压规定：H/B=22.5 ， V=（0.10.2）VA 其中，H为罐高；B为罐直径；VA为空压机每分钟排气量（20，1105Pa状况下），冷却器：空压机出口温度气温在120左右，必要冷却。此外在潮湿地区和季节还可以达到降湿目。空气冷却器可采用列管式热互换器空气走壳程，管内走冷却水。旋风分离器：是运用离心力进行气-固或气-液沉降分离设备。它构造简朴、阻力小、分离效率高。丝网除沫器：运用惯性拦截原理。对1m以上雾滴除去率98。 空气加热设备：压缩空气加热设备普通采用列管换热器，空气走管程，蒸汽走壳程，换热系数普通为160W/（m2）。5.3.2空气过滤除菌大型发酵工厂常采用两级或者三级过滤器，本设计采用两级过滤器，第一级过滤器称为总过滤器，二级为分过滤器。总过滤器：纤维及颗粒状介质过滤器，介质为玻璃纤维和活性炭颗粒。纤维层：活性炭层：纤维层高度为1：1：11：2：1，介质层总高度为0.31.0m。分过滤器：微孔膜过滤器，它是由耐高温、疏水、厚度为150m聚四氟乙烯薄膜构成，可以清除所有不不大于0.01m微粒，能清除几乎所有空气中夹带微生物。 压缩空气总过滤器分过滤器无菌空气进 发 酵 罐5.3.3无菌空气检查 空气系统无菌检测重要考察过滤器与否失效。过滤器失效检测办法之一是检测过滤器两侧压降，压降大阐明过滤介质被堵塞；二是用粒子计数器测定空气中粒子数与否超标，有无达到干净度规定。6种子扩大培养种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管处在休眠状态生产菌种接入试管斜面活化后，再通过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量纯种过程。种子制备普通涉及两个过程，即在固体培养基上生产大量孢子孢子制备和在液体培养基中生产大量菌丝种子制备过程。图6种子制备工艺流备图6.1孢子制备孢子制备是种子制备开始，是发酵生产一种重要环节。孢子质量、数量对后来菌丝生长、繁殖和发酵产量均有明显影响。霉菌孢子培养，普通以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中营养成分较适合霉菌孢子繁殖，并且此类培养基表面积较大，可获得大量孢子。霉菌培养普通为2528，培养时间为4 14天。本设计采用在pH=7、28下培养12d。6.2种子制备种子制备是将固体培养基上培养出孢子或菌体转入到液体培养基中培养，使其繁殖成大量菌丝或菌体过程。种子罐培养目是使种子量增大，以缩短发酵罐发酵延滞期。将生产菌种悬浮液用微孔接种法接入种子罐进行扩大培养，种子罐之间转接采用压差接种法，种子罐接入发酵罐也采用压差接种法。螺旋霉素种子制备采用三级发酵。培养温度和时间均为28、24h，接种量分别为15%、8%。种子罐衡算： 二级种子罐：5000.70.080.7=40m，每个周期需要3个40m种子罐。 一级种子罐：400.70.150.7=6m，每个周期需要3个6m种子罐。6.3影响种子质量因素（1）原材料质量影响（2）培养条件温度：要获得高质量孢子，其最适温度区间很狭窄，必要保证在最适范畴，尽量控制在28。湿度：其相对湿度应当保持在40%50%之间。通气量：因采用三级发酵，通气量定为1：1.5/分。（3）斜面冷藏时间：冷藏时间越长，越需要活化，冷藏时间不能超过78天。7发酵工艺流程控制7.1发酵分类微生物发酵过程可分为分批、补料-分批、半持续和持续等几种方式。由于在发酵过程中需要添加培养基，本设计采用补料-分批发酵。7.2发酵条件影响及控制7.2.1温度温度：是指发酵整个过程或不同阶段中所维持温度。其高低与发酵中酶反映速率、氧在培养液中溶解度和传递速率、菌体生长速率和产物合成速率等有密切关系。影响发酵温度变化因素：发酵热是发酵过程中释放出来净热量，由产热因素和散热因素两方面决定。Q发酵=Q生物Q搅拌Q蒸发Q显Q辐射7.2.2 pH微生物生长和产物合成最重要状态参数是代谢活动综合指标。PH对发酵影响:影响酶活性。影响微生物细胞膜所带电荷状态。影响培养基中某些组分中间代谢产物解离，从而影响微生物对这些物质运用；pH不同，引起菌体代谢过程不同，使代谢产物质量和比例发生变化。影响霉菌形态。pH控制:发酵培养基配方，有些成分可在中间补料时补充调控。加入适量缓冲剂，控制培养基pH变化，采用内源调节。在发酵过程加酸碱或其她物质进行调节。7.2.3溶氧溶氧是微生物生长所必须，是影响发酵重要因素。溶氧太低会使糖代谢缓慢，菌体生长不良，产物合成受阻；溶氧太高则使菌体生长过于旺盛，底物完全氧化比例过高，也不利于产物合成。对溶氧控制还应考虑底物浓度，在不同底物浓度下应有不同溶氧水平，底物浓度较高时，增长DO可以加强菌体代谢活性，不会由于基质完全氧化减少产量；底物浓度较低时，过高溶氧会导致基质完全氧化而减少产物产量。DO水平应当保持在50%如下。7.2.4CO2溶解在发酵液中CO2对发酵有抑制或刺激作用。大多数微生物适应低浓度CO2，当尾气CO2浓度高于4%时，微生物糖代谢与呼吸速率下降。呼吸商RQ=CO2释放率/摄氧率，可以判断菌生长、呼吸状况，还可以反映菌代谢状况。7.2.5泡沫对发酵影响及控制 泡沫对发酵影响及其控制：通气搅拌和代谢产气愤体是泡沫产生因素。泡沫是气体被分散在少量液体中胶体体系，泡沫间被一层液膜隔开而彼此不相连通。一类存在于发酵液液面上，气相所占比例特别大，并且泡沫与它下面液体之间有明显界线；另一种是出当前粘稠发酵液中均匀而细泡沫，比较稳定，其气相所占比例由下而上逐渐增长，气泡与液面没有明显界限，此类泡沫又称为流态型泡沫。泡沫控制办法涉及物理消泡和化学消泡，在本设计中，豆油可作为消泡剂，进行消泡。7.3发酵过程控制接种量为8%，发酵周期为96小时，发酵温度28C，通气量为1：1.5/分，湿度为40%50%。在接种发酵后20小时补加前体正丙醇，40小时补加12%发酵培养基，60小时补加10%培养基。在整个过程中，需要不断通气和搅拌，维持一定罐温和罐压，并隔一段时间取样进行生化分析和无菌实验，观测代谢变化、抗生素产生状况和有无杂菌污染。7.4发酵终点鉴定判断放罐指标重要有菌体浓度、过滤速度、菌体形态、氨基氮、pH、DO和发酵液黏度和外观等。普通，菌丝自溶前迹象有：氨基氮、DO和pH开始上升，菌丝碎片增多，黏度增长，过滤速度下降。7.5发酵染菌防治与解决1.染菌因素：种子质量问题，培养及灭菌不彻底，空气染菌，泡沫冒顶，夹套、内壁破裂。解决办法：（1）前期染菌，重新灭菌，补充新鲜培养液；（2）中期染菌，检查所感染杂菌，偏离杂菌生长条件；（3）发酵后期染菌，提前放罐。2.噬菌体感染：发酵液变稀，在通气量扥外部条件不变状况下，DO迅速回升。解决办法：灭菌放罐，清除生产环境，调换生产菌株，停产整顿（极其严重状况下），选育抗性菌。8发酵罐工艺设立8.1发酵罐数量衡算年产300吨螺旋霉素工艺设计，螺旋霉素发酵周期为4天，生产周期为5天。一年工作日有200天。螺旋霉素产率为11.1g/L，发酵液收率95%，发酵液预解决收率为95%，固液分离率为83%，提取率为92%，纯化时收率为82%，干燥收率为95%，提取总收率为（0.920.830.820.950.95=0.56）0.56，装料系数0.7。产300吨螺旋霉素所需发酵液量：3001030.950.5611.1=50802.68m每个周期所需发酵液体积为：50802.68（2005）=1270.07m本设计选用补料分批发酵，选用500 m3发酵罐。每个发酵罐一种周期共用发酵液量为：5000.7（1+12%+10%）=427m因此选用三个500m发酵罐。8.2发酵罐设计（1）发酵罐选取 选用机械搅拌通风发酵罐 (2)发酵罐设计发酵罐中，取H/D=2；取d/D=1/3；C/d=1；s/d=3；W/d=0.1；B=0.2W；封头高度：h=ha+hb,ha=1/4D。V全=D2H+2(hb+D/6)/4,H=2D,hb忽视。V全=500m， 得D=6.52m,H=13.04m,d=2.17m,C=2.17m,s=6.52m,W=0.217m,B=0.04m.其中：H：发酵罐筒身高 D：发酵罐内径d：搅拌器直径 W：档板宽度C：下搅拌器距底部距离 S：两搅拌器之间距离Hl：液位高度 B:挡板与罐壁距离9下游加工 螺旋霉素发酵液提取采用溶酶萃取法。螺旋霉素提取环节：发酵液净化液滤液水提液水洗液水提液脱溶液结晶液湿晶体干燥成品包装入库9.1发酵液预解决将发酵液加1.0%1.5%硫酸铝并调节pH值4.55.0，搅拌，静止，使蛋白质充分沉淀。9.2过滤发酵液一方面通过板框过滤机过滤。各板框机进料压力相似，过滤压力最初不得超过0.03 MPa，待每个出料嘴都出料后可以提高至0.05 MPa，滤速减慢，至0.100.15 MPa，整批过滤完后，用3.54.0 m3/次水顶洗，用30%（V/V）低单位（400 U/mL如下）酸水顶洗。接着过滤液由水输送至滤液贮池，滤液再通过泵送至混合萃取罐。9.3醋酸丁酯提取用5moL/L NaOH调过滤液pH值8.59.0，将醋酸丁酯泵入混合萃取罐。启动搅拌机搅拌（80100r/min）混合后静置分层。若干小时后，如浮现乳化层，则用高速离心机将丁酯相和水相分开。9.4水洗丁酯提取液由萃取罐泵送到水洗罐。然后用40、50%（V/V）无盐水洗涤2次，每次洗涤均间歇搅拌（转速80100r/min）1 min，重复3次，静置分层4060 min，当放水至乳化层为白色时为止。9.5水提水洗后再泵入水提灌。按水提液为3000050000 U/mL计算无盐水。用量：用1moL/L氯化氢和0.05mmoL/L磷酸二氢钠缓冲液调pH值为2.02.5，与丁酯提取液混合搅拌1min，重复3次，静置分层4060 min，分2次提取，合并2次水液，用真空泵抽到脱溶罐。9.6脱丁酯水提液通过真空泵缓缓输入脱丁酯罐。用1moL/L氢氧化钠回调pH值5.05.5，加碱液要慢，防止局部结膜，用0.02 MPa干净空气和真空彻底去除，至无丁酯味为止，防止跑料。9.7结晶晶体成核可分为初级成核（没有待结晶物质以晶体形式存在）和二次成核（已有待结晶物质以晶体形式存在）两类。螺旋霉素晶核大小测量困难，由于结晶过程中成核和晶体生长总是相耦合，并且没有适当条件可以保存它。光散射提供了一种预计核大小有效办法，这种办法简便易行。运用光散射测量单分散性球形颗粒粒径。螺旋霉素颗粒真密度可以使用比重瓶法测量，测量流体介质为正辛烷。9.8干燥将颗粒在真空干燥箱内真空度为99990Pa如下，水温80，每 2 h翻料1次，如有结块必要压碎。干燥时间10 h左右，当水分达到15%如下时停止。9.9包装干燥后进入最后包装阶段，将干粉分装于8 kg木桶或3 kg铁桶内，桶内用3层包装，塑料袋外层为1层牛皮纸，最内一层仍为塑料袋，用绳扎好。10.物料衡算指标名称单位指标数生产规模t/a300生产办法用产二素链霉菌生产螺旋霉素年工作日d/a200发酵液收率%95发酵周期h96提取率%56产率g/l11.1 发酵液量 生产300吨螺旋霉素需要发酵液V=50802.68m淀粉： 50802.68*70=3556187.6kg黄豆饼粉： 50802.68*15=762040.2kg玉米粉： 50802.68*7=355618.76kgNY： 50802.68*5=254013.4kg糊精： 50802.68*12=609632.16kg氯化钠： 50802.68*4=203210.72kg硝酸铵： 50802.68*6=304816.08kg碳酸钙： 50802.68*5=254013.4kg磷酸二氢钾：50802.68*0.5=25401.34kg硫酸镁： 50802.68*1=50802.68kg豆油： 50802.68*3=152408.04kg物料名称每周期所需物料量300t/a螺旋霉素物料量淀粉88904.69kg3556187.6kg黄豆饼粉19051.005kg762040.2kg玉米粉8890.469kg355618.76kgNY6350.335kg254013.4kg糊精15240.804kg609632.16kg氯化钠5080.268kg203210.72kg硝酸铵7620.402kg304816.08kg碳酸钙6350.335kg254013.4kg磷酸二氢钾635.034kg25401.34kg硫酸镁1270.067kg50802.68kg豆油3810.201kg152408.04kg参照文献1 俞俊棠.唐孝宣，邬行彦新编生物工艺学（上、下册）北京：化学工业出版社，2 陈国豪生物工程设备北京：化学工业出版社，3 岑沛霖.蔡谨工业微生物学北京：化学工业出版社，4 华南工学院等发酵工程与设备北京：轻工业出版社，19855 刘国诠生物工程下游技术北京：化学工业出版社，6 贾树彪.李盛贤新编酒精工艺学北京：化学工业出版社，7 贾士儒. 生物反映工程原理.-2版.北京：科学出版社，.18 吴思方. 生物工程工厂设计概论.北京：中华人民共和国轻工业出版社，.79王欣荣.螺旋霉素发酵工艺研究J.中华人民共和国抗生素杂志，(12)：145-148. 10金志华.螺旋霉素高产菌种推理选育J.中华人民共和国抗生素杂志，1998(2)：133. 11 汪国庆.应对螺旋霉素重新结识J.中华人民共和国药学杂志，1995(5)：84-88. 12 陈长华.螺旋霉素发酵培养基改进J.生物工程学报，1991(11)：295.13 宋友礼。螺旋霉素高产菌株推理选育和工业生产J.中华人民共和国医学工业杂志，（11）：142.