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甲状腺乳头状癌组织中 MTAP、SETD2 表达水平及其与临床病理特征的关系吴艳，相开放(通信作者)江汉大学附属医院/武汉市第六医院(湖北 武汉 430014)摘要目的:探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)、组蛋白甲基转移酶(SETD2)表达水平及其与患者临床病理特征的关系。方法:选取2019 年12 月至2022 年12 月我院收治的 60 例 PTC 患者作为研究对象，收集 PTC患者的癌组织标本(PTC 组)及对应的癌旁组织标本(癌旁组)。采用免疫组化法检测 MTAP、SETD2 在 PTC 组织、癌旁组织中的表达水平。采用 x2检验分析 MTAP、SETD2 表达水平与 PTC 患者临床病理特征的关系，采用 Spearman 相关系数法分析PTC 患者 MTAP 与 SETD2 的相关性。结果:PTC 组 MTAP、SETD2 阳性表达率均低于癌旁组(3333%VS 9166%，5166%VS8333%)，x2=43556、13713，P0001。肿瘤直径1cm、TNM 分期期、有淋巴结转移的 PTC 患者 MTAP、SETD2 阳性表达率分别低于肿瘤直径1cm、TNM 分期期、无淋巴结转移患者(P005)。相关分析显示，PTC 患者 MTAP 与 SETD2呈正相关(r=0644，P0001)。结论:MTAP、SETD2 在 PTC 患者中均呈低表达，且与患者临床病理特征有关，有望作为 PTC治疗提供新靶点。关键词:甲状腺乳头状癌组织;甲硫腺苷磷酸化酶;组蛋白甲基转移酶;临床病理特征中图分类号:7361文献标识码:A文章编号:10062882(2023)0370403DOI:1014035/jcnkihljyy202303070甲状腺癌为常见的内分泌系统恶性肿瘤，其中甲状腺乳头状癌(PTC)占80%1。随诊疗技术的不断革新，我国PTC 的早期诊断率显著提高，但仍有部分患者出现淋巴结转移、局部复发导致预后不理想，因此需寻找新的诊断治疗靶点。甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)是作用于嘌呤、甲硫氨酸合成补救途径的一种关键酶，既往研究发现其在非小细胞肺癌等多种恶性肿瘤组织中存在纯合性缺失2。组蛋白三甲基化转移酶(SETD2)可特异性催化组蛋白三甲基化，既往研究证实 SETD2 与胃癌、透明细胞肾癌等肿瘤的发生发展有关，其在肿瘤组织中基因表达下调3。截至目前尚未见 MTAP、SETD2 在 PTC 中表达水平研究报道。因此本研究主要探讨MTAP、SETD2 在 PTC 患者癌组织中的表达水平及其与患者临床病理特征的关系，以期为往后治疗 PTC 提供参考。1资料与方法11一般资料选取 2019 年 12 月至 2022 年 12 月我院收治的 60 例PTC 患者作为研究对象，收集 PTC 患者的癌组织标本(PTC组)及对应癌旁组织标本(癌旁组)。其中 PTC 患者男 25(内文见下页)参考文献 1刘小女，雷敏，胡青青，等甲状腺微小乳头状癌超声特征联合TSH 检测对颈侧淋巴结转移的预测作用分析J 中国煤炭工业医学杂志，2022，25(06):668672 2罗水光，宋晗，黄海深，等甲状腺素、促甲状腺激素联合甲状腺球蛋白抗体、甲状腺过氧化物酶抗体检测在甲状腺疾病评估中的作用J广东医科大学学报，2022，40(06):645649 3任超，王亚利，魏贤，等FT3、FT4、TSH 与 T3、T4 联合检测在甲状腺功能异常患者中的应用效果J 临床医学研究与实践，2022，7(36):140143 4王丽娜，赵伟，张婧莹，等CL6000i 全自动化学发光免疫分析仪检测甲状腺激素的性能验证J国际检验医学杂志，2022，43(20):24582464 5庄健，冯绪芬TPOAb 联合 TSH 在筛查孕妇自身免疫性甲状腺功能紊乱中的应用效果J 当代医学，2021，27(33):165166 6吴金庆，吴小玲，蒋娅玲甲状腺激素水平检测在老年抑郁症患者中的应用价值分析J黑龙江医药，2022，35(6):14401442 7尹立平，王文逸，杨德仁，等 血清 TSH 水平及 BAF 基因V600E 突变联合检测在甲状腺癌诊断中的价值J中国肿瘤外科杂志，2022，14(5):447450 8赵广要血清 MK、IGF1 和 Tg 水平检测在甲状腺癌诊断中的价值 J 中国民康医学，2022，34(18):123125收稿日期:20230410407黑龙江医药Heilongjiang Medicine Journal Vol36 No3 2023例，女 35 例;年龄 4273 岁，平均(5043524)岁。纳入标准:经病理活检确诊 PTC;接受手术治疗;患者及家属知情同意。排除标准:心肝肺肾等功能异常者;合并其他肿瘤、内分泌系统功能异常者;认知、精神异常者;依从性差者。本研究获得我院医学伦理委员会批准。12方法采用免疫组化法检测 MTAP、SETD2 在 PTC 组织及癌旁组织中的表达情况，操作流程如下:主要试剂与仪器:兔抗人 SETD2 多克隆抗体(上海生工生物工程技术有限公司)、兔抗人 MTAP 多克隆抗体(武汉三鹰生物有限公司)、羊抗兔二抗 IgG(艾美捷科技有限公司)、免疫组化试剂盒、DAB显色盒(上海尚宝生物科技有限公司)、显微镜(上海永科光学仪器有限公司)。检测方法:4%多聚甲醛常规固定后采用冰冻切片机对 PTC 组织及癌旁 组 织 标 本 蜡 块 切 片(4m)，再逐步行二甲苯脱蜡、乙醇梯度水化、柠檬酸钠溶液高压高温修复抗原、H2O2 灭活内源性过氧化物酶。加入磷酸盐缓冲液(PBS)清洗培养皿 3 次，5min/次，再加入 5%山羊血清抗体进行封闭，滴加兔抗人 MTAP 多克隆抗体(稀释比 1 200)、兔抗人 SETD2 多克隆抗体(稀释比 1 100)，4冰箱内孵育过夜，加入 PBS 冲洗 3 次，滴加辣根酶标记山羊抗鼠 IgG 二抗(稀释比 1 5000)，37 环境内孵育半小时，PBS 冲洗 3 次，采用 DAB 染色试剂盒进行显色，随后进行苏木精复染、酒精脱水、二甲苯透明及中性树胶封片，显微镜下采集图片。结果判定:显微镜下观察到细胞质内出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞。着色强度:无显色计 0分、浅黄或黄色计 1 分、棕黄色计 2 分、棕褐色计 3 分;阳性细胞百分比评分:5%计 0 分、5%25%计 1 分、25%50%计 2 分、50%75%计 3 分、75%计 4 分。染色指数(SI)=染色强度阳性细胞百分比，根据 SI 得分情况分为阳性表达(SI3 分)和阴性表达(SI3)。13统计学分析统计软件为 SPSS240，采用例数和百分比(%)描述计数资料，采用 x2检验分析 MTAP、SETD2 表达与 PTC 患者临床病理特征的关系，采用 Spearman 相关系数分析 PTC 患者癌组织 MTAP 与 SETD2 的相关性，双侧检验水准 为 005。2结果21两组 MTAP、SETD2 表达情况比较PTC 组 MTAP、SETD2 阳性表达率均低于癌旁组(P005)，见表 1。表 1两组 MTAP、SETD2 表达情况比较 n(%)组别例数MTAPSETD2阴性阳性阴性阳性PTC 组6040(6666)20(3333)29(4833)31(5166)癌旁组605(833)55(9166)10(1666)50(8333)x2值4355613713P 值0001000122MTAP 表达与 PTC 临床病理特征的关系不同性别、年龄、肿瘤个数、有无脉管侵犯的 PTC 患者MTAP 表达情况比较无统计学意义(P005);肿瘤直径1cm、TNM 分期 期、有淋巴结转移的 PTC 患者 MTAP阳性表达率低于肿瘤直径1cm、TNM 分期 期、无淋巴结转移者(P005)，见表 2。表 2MTAP 表达与 PTC 临床病理特征的关系 n(%)组别例数MTAP阴性阳性x2值P 值性别男2515(6000)10(4000)女3525(7142)10(2857)08570355年龄(岁)503221(6562)11(3437)502819(6785)9(3214)00330855肿瘤直径1cm3619(5277)17(4722)1cm2421(8750)3(1250)78130005肿瘤个数单发3824(6315)14(3684)多发2216(7272)6(2727)05740449TNM分期期3721(5675)16(4324)期2319(5135)4(1081)42660039脉管侵犯无3119(5135)12(3243)有2921(7241)8(2758)08340361淋巴结转移无3922(5641)17(4358)有2118(8571)3(1428)5275002223SETD2 表达与 PTC 临床病理特征的关系不同性别、年龄、肿瘤个数、有无脉管侵犯的 PTC 患者SETD2 表达情况比较无统计学意义(P005);肿瘤直径1cm、TNM 分期 期、有淋巴结转移的 PTC 患者 SETD2阳性表达率低于肿瘤直径1cm、TNM 分期 期、无淋巴结转移者(P005)，见表 3。表 3SETD2 表达与 PTC 临床病理特征的关系 n(%)组别例数SETD2阴性阳性x2值P 值性别男2511(4400)14(5600)女3518(5142)17(4857)03220570年龄(岁)503218(5625)14(4375)502811(3437)17(5312)17210190肿瘤直径1cm3612(3333)24(6666)1cm2417(7083)7(2916)81090004肿瘤个数单发3820(5263)18(4736)多发229(4090)13(5909)07670381TNM分期期3712(3243)25(6756)期2317(7391)6(2608)97730002脉管侵犯无3114(4516)17(5483)有2915(5172)14(4827)02580611淋巴结转移无3914(3589)25(6410)有2115(7142)6(2857)69010009507黑龙江医药Heilongjiang Medicine Journal Vol36 No3 202324PTC 患者 MTAP 与 SETD2 的相关性Spearman 相关分析显示，PTC 患者癌组织 MTAP 与SETD2 呈正相关(P005)，见表 4。表 4PTC 患者 MTAP 与 SETD2 的相关性项目SETD2rPMTAP064400013讨论流行病学调查发现，我国 PTC 发病率呈逐年上升趋势，为危害社会群体健康的公共卫生问题4。PTC 早期大多无症状，多数患者通过超声引导穿刺活检明确诊断后行手术切除治疗，但部分患者发生癌细胞转移、扩散，疗效难以达到预期目标。因此探寻早期诊断手段至关重要。既往研究证实，PTC 发生发展、预后与多种分子蛋白相关5。SETD2 最早分离自人造血干细胞，是组蛋白 H3 第 36位赖氨酸的三甲基化(H3K36me3)的主要甲基转移酶，H3K36 参与基因转录激活、DNA 错配修复等，H3K36me3 在染色质中的分布受到破坏会诱发疾病。研究表明，SETD2 在乳腺癌、中枢神经胶质瘤等中蛋白表达缺失6。动物实验显示，敲除 SETD2 的小鼠 H3K36me3 在 Fgfr3 基因启动子区分布减少，导致基因转录激活异常，影响胚胎内胚层分化7。本研究发现，PTC 组 MTAP 阳性表达率低于癌旁组(P005);不同肿瘤直径、TNM 分期、淋巴结转移的 PTC 患者MTAP 表达情况比较有统计学差异(P005)。提示 MTAP在 PTC 患者中呈低表达，且与病情进展有关。盛雅茹等研究发现，SETD2 基因表达下调，导致白血病干细胞自我更新、白血病进展，与本研究结果一致8。究其原因，肾脏、骨髓、乳腺等多种细胞中均有 SETD2 蛋白表达，SETD2H3K36me3信号通路为肿瘤中常见的抑癌机制。SETD2 蛋白与 p53 作用，使 p53 活性及其蛋白稳定性上调，参与 DNA 同源重组、错配修复，保持基因组稳定9。敲除 SETD2 会使 p53 靶基因水平下降，发生泛素化降解，促进肿瘤形成。MTAP 基因定位于 9p21，其基因的缺失或超甲基化会引起基因表达缺失。MTAP 通过催化甲硫腺苷(MTA)转为腺嘌呤，再生成甲硫氨酸，参与多胺代谢、腺嘌呤和甲硫氨酸合成补救过程10。MTA 是 MTAP 的底物，为氨丙基、甲基转移酶抑制剂，MTAP 基因缺失引起 MTA 高浓度积聚，MTA 介导成纤维细胞分泌生长因子和基质金属蛋白酶 3(MMP3)，导致转录激活蛋白1(AP1)活性增加，进而使肿瘤细胞侵袭能力增强11。本研究发现，PTC 组 MTAP 阳性表达率低于癌旁组(P005);MTAP 阳性表达与肿瘤直径、TNM 分期、淋巴结转移有关(P005)。提示 MTAP 低表达在 PTC 发生、发展、转移过程中起重要作用。张奇等研讨了恶性胸膜间皮瘤中 9p21区域纯合性缺失，MTAP 失活，会导致肿瘤预后不良12。而肿瘤中 MTAP 缺乏现象，为临床提供了采用代谢类似物阻断嘌呤合成途径，从而可有效杀死 MTAP 的肿瘤细胞这一治疗方法。相关分析显示，PTC 患者 MTAP 与 SETD2 呈正相关(P0001)。提示 MTAP、SETD2 均可作为 PTC 早期诊断、病情评估指标。综上所述，MTAP、SETD2 在 PTC 患者中均呈低表达，且与临床病理特征有关，可为 PTC 治疗提供新靶点。参考文献 1Prete A，Borges de Souza P，Censi S，et alUpdate on FundamentalMechanisms of Thyroid CancerJFront Endocrinol(Lausanne)，2020，13(11):102 2Kalev P，Hyer ML，Gross S，et al MAT2A Inhibition Blocks theGrowth of 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