急性心肌梗死病人血清微RN...3表达与中医证型的关系分析_林丹凤.pdf

安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）349354.18刘彩林，李晓改，明亮.血培养中异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的分布及特征分析 J.中华微生物学和免疫学杂志，2020，40（2）：85-90.19朱娟，陈丽华，佘鹏飞，等.表皮葡萄球菌临床菌株icaA、icaR基因与生物被膜形成关系的研究 J.湖南中医药大学学报，2018，38（6）：619-623.20WU Y，MENG YY，QIAN L，et al.The vancomycin resistance-associated regulatory system vrasr modulates biofilm formation of staphylococcus epidermidis in an ica-dependent mannerJ/OL.mSphere，2021，6（5）：e0064121.DOI：10.1128/mSphere.00641-21.21郭宇，魏莹，刘颖，等.人工关节假体感染中表皮葡萄球菌的毒力及耐药基因研究 J.临床和实验医学杂志，2021，20（13）：1433-1437.（收稿日期：2022-04-07，修回日期：2022-05-13）引用本文：林丹凤，陈艳俏，牛卫洲.急性心肌梗死病人血清微RNA-1283表达与中医证型的关系分析 J.安徽医药，2023，27（7）：1342-1345.DOI：10.3969/j.issn.1009-6469.2023.07.014.急性心肌梗死病人血清微RNA-1283表达与中医证型的关系分析林丹凤，陈艳俏，牛卫洲作者单位：北京市怀柔区中医医院心血管科，北京101400基金项目：怀柔区卫生和计划生育委员会资助项目（2018-B-002）摘要：目的 探讨急性心肌梗死病人血清微RNA-1283（miR-1283）表达与中医证型的关系。方法 选择北京市怀柔区中医医院2018年12月至2021年11月收治的236例急性心肌梗死病人作为疾病组，另选取同期在该院体检的健康人群230例作为健康组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应PCR（RT-qPCR）法检测两组病人血清miR-1283表达情况并对比。另根据中医辨证分型标准将疾病组分为不同证型，比较疾病组不同中医证型病人血清miR-1283表达水平。结果 疾病组miR-1283表达水平（0.420.07）低于健康组（0.980.18）（t=44.47，P0.05）；阴竭阳脱型病人血清miR-1283表达水平均高于痰瘀互结型、寒凝心脉型、气虚血瘀型、气虚痰瘀互阻型、气虚痰浊闭阻型、气阴两虚型病人（P0.05）；痰瘀互结型病人血清miR-1283表达水平低于寒凝心脉型、气虚血瘀型、气虚痰瘀互阻型、气虚痰浊闭阻型、气阴两虚型（P0.05）。结论 急性心肌梗死病人血清miR-1283表达水平偏低，且不同证型病人血清miR-1283表达水平有差异，提示该指标可以作为急性心肌梗死病人中医证型的分型依据。关键词：心肌梗死；微RNA-1283；实证；虚实夹杂；诊断；中医证型Analysis of the relationship between serum microRNA-1283 expression and TCM syndrome types in patients with acute myocardial infarctionLIN Danfeng,CHEN Yanqiao,NIU WeizhouAuthor Affiliation:Department of Cardiology,Huairou District Hospital of Traditional Chinese Medicine,Beijing 101400,ChinaAbstract：Objective To explore the relationship between the expression of serum microRNA-1283(miR-1283)and Traditional Chinese Medical(TCM)syndrome types in patients with acute myocardial infarction.Methods A total of 236 patients with acute myocardial infarction admitted to Huairou District Traditional Chinese Medicine Hospital in Beijing from December 2018 to November 2021 were selected as the disease group,and 230 healthy people who underwent physical examination in Huairou District Hospital of Traditional Chinese Medicine in the same period were selected as the health group.The expressions of serum miR-1283 in the two groups were detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction PCR(RT-qPCR)and compared.In addition,the disease groups were divided into different syndrome types according to the dialectical typing standard of TCM,and the expression levels of serum miR-1283 in patients with different TCM syndrome types in the disease groups were compared.Results The expression 临床医学1342安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）level of miR-1283 in the disease group(0.420.07)was lower than that in the healthy group(0.980.18)(t=44.47,P0.05).The expression level of serum miR-1283 in patients with yin exhaustion and yang removal type was higher than that in phlegm and blood stasis type,cold coagulation heart pulse type,qi deficiency and blood stasis type,qi deficiency and phlegm stasis mutual resistance type,qi deficiency and phlegm turbidity closed resistance type and qi yin deficiency type(P0.05).The expression level of serum miR-1283 in patients with phlegm and blood stasis type was lower than that in patients with cold coagulation heart pulse type,qi deficiency and blood stasis type,qi deficiency and phlegm stasis mutual resistance type,qi deficiency and phlegm turbidity closed resistance type and qi Yin deficiency type(P0.05）。本研究已经通过北京市怀柔区中医医院医学伦理委员会批准（批号201811-004）。纳入标准：均符合 急性心肌梗死诊断和治疗指南7中急性心肌梗死的诊断标准；均经皮冠状动脉介入治疗（PCI）；对照组均经体检确认健康；所有对象均对本研究知情并签署同意书。排除标准：合并先天性心脏病；急性肺栓塞、心肌炎等疾病；严重抑郁或其他精神病者；严重感染性疾病；严重肝、肾等器官功能损伤；患有恶性肿瘤。1.2方法血清 miR-1283 的检测方法：疾病组病人于确诊时，健康人群于体检当天均空腹抽取外周血5 mL，置于无菌抗凝管中。采用TRIzol裂解抽提法进行总RNA的提取，确定符合逆转录标准，并用分光光度计法检测RNA的完整性。根据Fermentas逆转录试剂盒（北京瑞尔欣德科技有限公司）进行逆转录。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）按 照 All-in-oneTM miRNA First-Strand cDNA 1343安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）Synthesis Kit试剂盒进行PCR扩增，PCR反应条件：97 反应10 min，95 反应20 s、62 反应1 min，共35个循环，每个反应重复3次以减少误差，采用2Ct方法计算miR-1283表达水平。引物序列：miR-1283正向：5-CGCGCTCTACAAAGGAAAGCG-3，反向：5-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3；内参 U6 正向：5-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3，反向：5-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3。中医辨证分型的诊断方法：均符合 急性心肌梗死中西医结合诊疗指南8中急性心肌梗死中医证型的诊断标准，并由经验丰富的副高职称以上的资深中医医师确诊中医证型。1.3统计学方法采用SPSS 26.0软件进行数据分析，计量资料以x s表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验，计数资料以例（%）表示，采用2检验，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1疾病组和健康组血清 miR-1283 表达情况比较疾病组miR-1283表达水平0.420.07低于健康组0.980.18（t=44.47，P0.05）；痰瘀互结型病人血清miR-1283表达水平0.360.06低于寒凝心脉型0.410.05、气虚血瘀型0.420.07、气虚痰瘀互阻型 0.430.06、气虚痰浊闭阻型 0.440.07、气阴两虚型0.450.09和阴竭阳脱型0.550.08（P0.05），阴竭阳脱型病人血清miR-1283表达水平均高于其他型（P0.05），总体比较，差异有统计学意义（F=20.18，P0.001）。3讨论急性心肌梗死是临床常见的急、危重病症，也是世界范围内最主要的心血管疾病死亡原因之一9。临床主要表现为突发性胸骨或心前区压榨性疼痛，与中医学中“胸痹”和“真心痛”等过程相一致，灵枢厥病 中曾记载：“真心痛，手足青至节，心痛甚，旦发夕死，夕发旦死”10，由此可见急性心肌梗死病人病情的严重性。中医辨证分型治疗的方法由来已久，但在实际的诊断和治疗中，中医辨证中“证”属于动态变化，其主观、客观等影响因素繁杂多样，辨别困难11。因此，探讨能够辅助进行急性心肌梗死中医辨证分型的血清学客观指标对指导临床工作具有重要意义。本研究结果显示疾病组miR-1283表达水平低于健康组，提示血清miR-1283表达水平与急性心肌梗死的发生发展密切相关。各种生物体内都存在miRNA，当其与 mRNA 非编码序列特异性结合时，可导致miRNA降解或阻止蛋白编码基因表达与翻译成蛋白的过程，转录后调节基因和蛋白表达，从而调节机体的生长发育，在各种疾病的发生发展中发挥重要作用12。miR-1283属于miRNA家族，能调节心肌细胞增殖与凋亡，有研究报道，miR-1283表达水平在缺血/复氧损伤心肌细胞中降低，使心肌细胞活力下降并促进心肌细胞凋亡，表明miR-1283表达水平可能促进心血管疾病的发生发展13。急性心肌梗死在中医中被认为发病位置在心脉，涉及肾、脾、肝等脏器，最常见的病理机制为本虚标实，本虚为发病基础，标实为发病条件14。由于病人发病时间和诱发病因的不同，会表现出不同的证型，且证型分布较为复杂。中医辨证分型是根据病人症状、舌脉象等依照中医的思维方式，得出证型，然后根据证型给予相应治疗，急性心肌梗死辨证分型也是通过病人发生心肌梗死时的症状、舌脉象等辨证得出。本研究通过中医辨证将疾病组236例病人分为实证、虚实夹杂证、虚证三类共7种证型，以虚实夹杂证占比最高，实证占比稍微次之，虚证占比最次之，其中痰瘀互结型、寒凝心脉型、气虚血瘀型、气虚痰瘀互阻型、气虚痰浊闭阻型、气阴两虚型、阴竭阳脱型占比分别为 38.98%、2.97%、27.12%、11.86%、8.05%、8.90%、2.12%，以痰瘀互结型，气虚血瘀型病人占比较高，与朱新峰15等研究结果一致。王琦的体质学说中提到气虚质易受寒邪和热邪，血瘀质易患血症、痛症，痰湿质易患中风、胸痹16。急性心肌梗死存在长期慢性病史，本虚突出，五脏气血亏虚，心气不足，心阳不振，气血运行不利，心脉推行无力，以致心脉瘀阻，出现血瘀；气血推行受阻，出现气滞；水液气化无力，聚而生痰，出现痰浊；痰浊重浊黏腻，久病难除，遇寒邪容易寒凝化寒湿，遇热邪容易化火转痰热，视为标实，痰浊瘀血互结，导致瘀血祛除更加困难17-18。据此可知，虚证为急性心肌梗死的病因，随着病程延长病情逐渐加重，血瘀贯穿整个急性心肌梗死的发病过程，达到痰浊瘀血互结时，病人病情更为危重。1344安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）本研究比较痰瘀互结型、寒凝心脉型、气虚血瘀型、气虚痰瘀互阻型、气虚痰浊闭阻型、气阴两虚型、阴竭阳脱型病人血清miR-1283表达水平，发现以阴竭阳脱型表达最高，以痰瘀互结型表达最低，而寒凝心脉型、气虚血瘀型、气虚痰瘀互阻型、气虚痰浊闭阻型、气阴两虚型两两比较无显著差异，说明急性心肌梗死不同证型病人血清miR-1283表达水平存在差异，提示血清miR-1283表达水平可能对急性心肌梗死中医辨证分型提供一定的客观依据。分析原因：miRNA在机体细胞生长、增殖、分化和凋亡等过程中发挥重要的调节作用，不同证型急性心肌梗死病人血清miR-1283表达水平不同，其表达水平越低，病人的病情越严重。杨泽民等19研究报道，血清miRNA可作为脾虚证病人脾虚证临床辨证分型的潜在标志物，为脾虚证病人发病机制的研究提供依据，贾敏等20研究报道，循环microRNA在急性冠脉综合征中可协助判断血瘀证的轻重。miR-1283来自miRNA家族，急性心肌梗死气血虚弱是发病基础，阴阳失调是病变基础，痰瘀互结是最终产物，而miR-1283参与细胞的生长发育及凋亡，调节心肌细胞增殖分化和血管内皮功能，且与急性心肌梗死发生发展密切相关，故其在不同证型急性心肌梗死病人中差异显著。既往何铃21研究也报道了 miR-1283在冠心病血瘀证、高血压血瘀证等心血管疾病中表达异常，通过调控PERK/ATF4 信号通路来影响血管内皮细胞的功能，参与糖脂代谢和动脉硬化的形成，并通过分泌炎性因子影响细胞的增殖、分化与凋亡，可能是冠心病血瘀证、高血压血瘀证等心血管疾病血瘀证形成的相关特异性miRNA。综上所述，急性心肌梗死病人血清miR-1283表达水平降低，在急性心肌梗死病人中医不同证型表达存在差异，有望成为急性心肌梗死病人不同中医证型的分型依据。参考文献1 ALKHOULI M，ALQAHTANI F，JNEID H，et al.Age-stratified sex-related differences in the incidence，management，and outcomes of acute myocardial infarction J.Mayo Clin Proc，2021，96（2）：332-341.2 JORTVEIT J，PRIPP AH，LANGRGEN J，et al.Incidence，risk factors and outcome of young patients with myocardial infarction J.Heart，2020，106（18）：1420-1426.3 谭丽，陈韦，王利波，等.中医辨证施护对急性心肌梗死患者自我护理能力与生活质量的影响 J.长春中医药大学学报，2020，36（5）：1019-1022.4 SU J，LI JY，YU QL，et al.Exosomal miRNAs as potential biomarkers for acute myocardial infarction J.IUBMB Life，2020，72（3）：384-400.5 HAN C，WANG S，WANG H，et al.Knockdown of circ-TTBK2 inhibits glioma progression by regulating miR-1283 and CHD1 J.Cancer Manag Res，2020，12（1）：10055-10065.6 熊智慧，王欣晨，官海涟.妊娠期高血压病中医证候与体质分布及循环MicroRNA的研究 J.浙江临床医学，2020，22（4）：494-496.7 中华医学会心血管病学分会，中华心血管病杂志编辑委员会，中国循环杂志 编辑委员会.急性心肌梗死诊断和治疗指南 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