植保高粱叶枯病的室内毒力测定.doc

内蒙古民族大学本科毕业论文编号：119070241015本 科 毕 业 论 文 题 目：高粱叶枯病的室内毒力测定 学 院： 农学院 专 业： 植物保护 年级： 2011 级 姓 名： 赵海龙 指导教师： 赵艳琴 完成日期： 2015年5月 内蒙古民族大学本科毕业论文目 录 摘要1ABSTRACT2引言31 材料和方法31.1 供试材料31.2 室内药剂筛选及配制41.3 试验方法52 结果与分析62.1 单剂抑制率的测定62.2 孢子抑制率及其显著性分析82.3 毒力回归方程的计算113 结论与讨论12参考文献13致谢14摘 要高粱叶枯病是高粱上一种真菌病害，本文主要是以高粱叶枯病为材料，采用生长速率法和孢子萌发抑制法对常用的五种杀菌剂进行室内毒力测定，结果表明：对于高粱叶枯2号菌株，50%异菌脲500倍液0.01和0.05显著水平下，该病菌的生长速率均为最低，孢子抑制率最高，菌落生长抑制率最高，是该病菌的有效防治药剂，而在50%嘧菌酯400倍液和3%中生菌素在0.01显著水平下下生长速率最高，菌落生长抑制率最低，孢子抑制率最低，对于防治该病并无明显效果；对于高粱叶枯4号菌株，50%异菌脲500倍液0.01和0.05显著水平下该病菌的生长速率最低，孢子抑制率最高，菌落生长抑制率最高，是防治该病菌的有效药剂，而在50%嘧菌酯400倍液和800倍液下该菌株表现出生长促进作用。关键词：高粱叶枯病；杀菌剂；毒力测定；萌发抑制率AbstractSorghum leaf blight is a new kind of fungi diseases on sorghum。This paper is based on sorghum leaf blight materials using the growth rate and spore germination inhibition method to measurement the five common fungicides indoor toxicity。The results show that：For the sorghum leaf blight No.2 strain，the Iprodione 50% w.p. 500 times liquid under the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited the lowest growth rate and the best inhibitory effect which is an effective control of the germs。But under the Azoxystrobin 50% w.p. 400 times liquid and the Zhongshengmycin 3% w.p. liquid of the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited the highest growth rate and the lowest colony growth inhibition rate。For the sorghum leaf blight No.4 strain， the Iprodione 50% w.p. 500 times liquid of the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited the lowest growth rate and the best inhibitory effect which is an effective control of the germs。But under the Azoxystrobin 50% w.p. 400 times and 800 times liquid of the significant level of 0.01 and 0.05，the strain showed growth promoting effect。Key Words:sorghum leaf blight；fungicide；toxicity measurement；germination inhibition rate引 言高粱属禾本科一年生草本植物，又名蜀黍、秫秫、芦粟、茭子、木稷等，高粱是酿酒的重要原料，泸州特曲、茅台、竹叶青等名酒都是以高粱为主要原料酿造的【1】。高粱在中国的栽培面积很广，其中山西地区是高粱的主产量区，在内蒙地区，高粱的的产量也占有很大的比重。随着高粱大面积的种植，一方面，高粱病害的蔓延也逐渐增长。据统计，目前高粱病害种类高达30多种，其主要为害以黑穗病，叶斑病，炭疽病和大斑病为主【2】，高粱散黑穗病在我国各高粱产区普遍发病，在华北、东北发病较重，近几年来严重影响高粱产量【3】。另一方面，高粱上的新病害也逐步增多，高粱叶枯病在一些地区也被发现。高粱叶枯病是由细极链格孢（Alternaria tenuissima）引起的真菌性病害，属于半知菌亚门半知菌纲链孢霉目黑霉科链格孢属，链格孢属是全球分布最广，经济上重要的半知菌类真菌之一，其有性态在自然条件下难以见到，仅有十余种链格孢的有性态在实验室条件下被发现；其菌丝黑色，大量存在于土壤、空气和作为培养料的各种有机质上，其孢子通过空气传播【4】。由链格孢引起的病害一般都属于流行性较强的病害。高粱叶枯病主要危害的是高粱的叶片，影响其光合作用，从而使高粱产量降低。在发病初期，高粱叶片上形成梭形斑，上面长有白色柱状霉层，由于湿度的增大，在后发病期病斑的边缘出现黄褐色轮纹。高粱叶枯病是高粱上一种新的病害，目前还没有特效的防治药剂，对此，本文采用菌丝生长速率法和孢子抑制率法对五种杀菌剂对于高粱叶枯病菌的室内毒力进行研究，筛选出防治该病害有效药剂，用来指导田间生产，从而提高产量，增加经济效益。1 材料和方法 1.1 供试材料1.1.1 供试菌种采集于内蒙古通辽市内蒙古民族大学农学院试验田，进行分离纯化【5】获得两个菌种：高粱叶枯2号菌种和高粱叶枯4号菌种，并保存于冷藏箱备用。1.1.2 供试药剂及有效成分编 号药剂名称有效成分剂型防治对象生产厂家1异菌脲50%可湿性粉剂小麦赤霉病海南正业中农高科技股份有限公司2多菌灵50%可湿性粉剂水果蔬菜等多种病害利民化工3烯酰福美双55%水分散粒剂霜霉病青岛瀚生科技4中生菌素3%可湿性粉剂辣椒疫病利民化工5嘧菌酯50%可湿性粉剂黄瓜枯萎病陕西美邦农药1.1.3 培养基制备原料 本试验均采用PDA培养基进行接种培养，培养基配制原料包括马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g和蒸馏水1000ml。1.1.4 试验主要仪器设备超净工作台，LRHS-250B恒温恒湿培养箱（上海贺德实验设备有限公司），立鹤牌电热恒温培养箱（山东潍坊医疗器械厂），101型电热鼓风干燥箱（江苏省通州市通用科技仪器厂），万分之一电子天平(上海精密科学仪器公司)，电子显微镜( 日本尼康公司)，高压灭菌锅（上海三申），酒精灯，培养皿，移液管，接种环，打孔器，直尺，锥形瓶，烧杯，搅拌棒，电磁炉，镊子等。1.2 试验室内药剂梯度调节及培养基的配制1.2.1 PDA培养基的制备按照PDA培养基的制备配方，配制1000ml培养基五组，每组分装至3个三角瓶中，封装完毕后，用高压灭菌锅121灭菌30min后取出冷却备用。1.2.2 药剂梯度调节及配制方案本试验的每个药剂均设定五个梯度，一个对照，每个梯度三次重复。具体配制为：50%异菌脲可湿性粉剂配制500倍母液，配制成500、1000、1500、2000、2500倍液；50%多菌灵可湿性粉剂配制400倍母液，配制成400、600、800、1000、1200倍液；55%烯酰福美双水分散粒剂配制400倍母液，配成400、800、1000、1200、1600倍液；3%中生菌素可湿性粉剂配制成400倍母液，配制成400、600、800、1000、1200倍液；50%嘧菌酯可湿性粉剂配制400倍母液，配成400、800、1000、1200、1600倍液。1.3 试验方法1.3.1 生长速率法本试验需在超净工作台上进行，因此在实验前需要对无菌工作室和超净工作台进行30min左右的紫光灯灭菌，确保将空气中的杂菌降到最低。并且试验所用的培养皿和其他仪器都要放进干热灭菌箱165灭菌1h，冷却后取出备用。首先将之前配制的培养基水浴加热溶解，加入少许的抗生素后冷却备用。在无菌条件下，将上述配置好的药剂取1ml放入9ml冷却至约50的PDA培养基中混合均匀，倒入消毒灭菌的培养皿中制成带药的培养基平板，每个药剂浓度重复3次。然后用直径为5mm的打孔器，在试验前将已经培养好的高粱叶枯病2号菌种的菌落中打取直径为5mm的菌饼（打取菌落边缘生长旺盛的菌丝），将菌饼分别接种在含不同浓度药剂的PDA平板的中心（使带菌丝的一面接触培养基），加盖，翻转,25下放入恒温培养箱中培养。另外，每个药剂做一个对照处理，对照组取1ml无菌水放入9ml PDA培养基中混合，再倒入平板中，同样用消毒后的打孔器打取菌饼接到培养基上，重复三次。（高粱叶枯病4号菌种采取同样的方法）最后在培养的第2、4、6天分别调查病原菌菌丝生长情况，并用十字交叉法测量其菌落直径，记录数据。1.3.2 孢子数目法将培养5至6天的病原菌取出，在培养皿中滴加50ul的土温试剂和500ul的蒸馏水，用玻璃棒搅拌，配制成均匀的孢子悬浮液，用球计数板记录孢子数目。2 结果与分析2.1 单剂抑制率的测定根据实验记录的菌落直径数据绘制表格，运用数据分析软件计分析，对于高粱叶枯2号菌株，50%异菌脲抑制率范围为82.3%-48.3%，其次为55%烯酰福美双，抑制率范围为71.3%-42.2%，接下来是50%多菌灵，3%中生菌素，而抑制率最低的是50%嘧菌酯；其中，50%异菌脲500倍液的抑制率最高达82.3%，其抑制效果最好，50%异菌脲1000倍液和55%烯酰福美双1600倍液的抑制效果仅次之，50%嘧菌酯400倍液的抑制效果最差，仅达17%左右。表1 五种药剂各梯度对高粱叶枯2号菌株菌落生长平均速率及抑制药剂及有效成分稀释倍数GLYK2菌落生长平均速率抑制率CK6.3333 50%异菌脲500倍液1.1222 0.822850%异菌脲1000倍液1.6278 0.742950%异菌脲1500倍液2.1944 0.653550%异菌脲2000倍液2.6278 0.585150%异菌脲2500倍液3.2722 0.4833CK9.1389 50%多菌灵400倍液4.4537 0.512750%多菌灵600倍液6.2944 0.311250%多菌灵800倍液6.9185 0.242950%多菌灵1000倍液5.7426 0.371650%多菌灵1200倍液7.4278 0.1872CK12.0556 55%烯酰福美双400倍液6.9685 0.421955%烯酰福美双800倍液5.2852 0.561655%烯酰福美双1000倍液5.5796 0.537155%烯酰福美双1200倍液4.9407 0.590155%烯酰福美双1600倍液3.4611 0.7129CK12.2778 3%中生菌素400倍液7.2111 0.41263%中生菌素600倍液8.3981 0.31593%中生菌素800倍液9.5481 0.22233%中生菌素1000倍液9.3907 0.23513%中生菌素1200倍液9.5667 0.2208CK10.2778 50%嘧菌酯400倍液8.4926 0.173650%嘧菌酯800倍液5.9639 0.419750%嘧菌酯1000倍液6.4102 0.376350%嘧菌酯1200倍液5.5454 0.460450%嘧菌酯1600倍液7.5694 0.2635对于高粱叶枯4号菌株，50%异菌脲抑制率范围为68.1%-45.6%，其次为55%烯酰福美双，抑制率范围为67.5%-42.1%，接下来是50%多菌灵，3%中生菌素，其中，50%异菌脲500倍液的抑制率最高，其抑制效果最好，55%烯酰福美双1000倍液和1200倍液的抑制效果仅次之；而50%嘧菌酯低倍液下对于该菌种的生长具有增效作用，高倍液下仅具有微弱的抑制作用，效果不太明显。表1 五种药剂各梯度对高粱叶枯4号菌株菌落生长平均速率及抑制率比较药剂及有效成分稀释倍数GLYK4菌落生长平均速率抑制率CK7.1667 50%异菌脲500倍液2.2889 0.680650%异菌脲1000倍液2.9611 0.586850%异菌脲1500倍液3.4778 0.514750%异菌脲2000倍液2.9278 0.591450%异菌脲2500倍液3.9000 0.4558CK8.6667 50%多菌灵400倍液4.6019 0.469050%多菌灵600倍液6.0204 0.305350%多菌灵800倍液6.3352 0.269050%多菌灵1000倍液5.3981 0.377150%多菌灵1200倍液6.7519 0.2209CK10.3056 55%烯酰福美双400倍液5.9722 0.420455%烯酰福美双800倍液6.2685 0.391755%烯酰福美双1000倍液3.3500 0.674955%烯酰福美双1200倍液3.6407 0.646755%烯酰福美双1600倍液3.7611 0.6350CK12.2222 3%中生菌素400倍液6.2204 0.49113%中生菌素600倍液8.6296 0.29393%中生菌素800倍液9.6556 0.20993%中生菌素1000倍液9.6759 0.20833%中生菌素1200倍液9.8722 0.1922CK5.8333 50%嘧菌酯400倍液8.0648 -0.382550%嘧菌酯800倍液8.7148 -0.493950%嘧菌酯1000倍液5.2954 0.092250%嘧菌酯1200倍液3.1417 0.461450%嘧菌酯1600倍液1.8472 0.68332.2 孢子抑制率及其显著性分析根据试验记录的孢子数量进行相对抑制率的分析和显著水平分析，对于2号菌种，处于0.05的显著水平下，50%异菌脲显著水平较其他杀菌剂高，最高的是50%异菌脲500倍液，孢子抑制效果应是最好的；其次为50%异菌脲1500倍液，50%异菌脲2000倍液；显著水平最低的为3%中生菌1200倍液，55%福美双和50%多菌灵差异显著性均处于中间同一水平。处于0.01的显著水平下，最高的仍是50%异菌脲500倍液，孢子抑制效果是最好的；其次为50%异菌脲1000倍液，50%异菌脲1500倍液，50%异菌脲2000倍液；55%福美双和50%多菌灵差异显著性均处于中间同一水平。表3 五种药剂各梯度对高粱叶枯2号菌株孢子抑制率显著性差异比较药剂及有效成分稀释倍数孢子相对抑制率显著水平0.010.053%中生菌素1200倍液0.8321gK50%嘧菌酯800倍液0.8754fgHK3%中生菌素400倍液0.8016efgGHK3%中生菌素600倍液0.8495defgFGHK3%中生菌素800倍液0.8567cdefgEFGH50%嘧菌酯1600倍液0.8431cdefgdefgh3%中生菌素1000倍液0.8852cdefgEFGH50%嘧菌酯400倍液0.8946bcdefDEFGH50%嘧菌酯1200倍液0.8846abcdefCDEFG50%多菌灵1000倍液0.9089abcdefBCDEF50%嘧菌酯1000倍液0.8992abcdeABCDE50%多菌灵1200倍液0.9115abcdeABCDE50%多菌灵800倍液0.9123abcdeABCDE50%多菌灵400倍液0.9216abcdABCDE55%烯酰福美双1600倍液0.9253abcdABCDE50%多菌灵600倍液0.9311abcdABCDE55%烯酰福美双400倍液0.9564abcdABCDE55%烯酰福美双1000倍液0.9434abcABCD55%烯酰福美双1200倍液0.9658abcABCD55%烯酰福美双800倍液0.9684abcABC50%异菌脲2500倍液0.9838abAB50%异菌脲2000倍液0.9844aA50%异菌脲1500倍液0.9857aA50%异菌脲1000倍液0.9864aAB50%异菌脲500倍液0.9875aA对于4号菌种，处于0.01和0.05显著水平下的显著性差异基本相同，50%异菌脲显著水平较其他杀菌剂高，最高的是50%异菌脲500倍液，其孢子抑制效果为最佳；显著水平最低的为50%嘧菌酯，其抑制效果不仅小，反而低倍液下右微弱的促进效果；而3%中生菌素，55%福美双和50%多菌灵差异显著性之间没有大的差别。表4 五种药剂各梯度对高粱叶枯4号菌株孢子抑制率显著性差异比较药剂及有效成分稀释倍数孢子相对抑制率显著水平0.010.0550%嘧菌酯400倍液-0.3529hK50%嘧菌酯800倍液-0.4165gH50%嘧菌酯1000倍液0.1521fG3%中生菌素1200倍液0.8105hK50%嘧菌酯1600倍液0.8452efEF50%多菌灵1200倍液0.7986eF50%嘧菌酯1200倍液0.5498deF50%多菌灵600倍液0.8213cdeEF50%多菌灵800倍液0.8252cdeEF50%多菌灵1000倍液0.8123cdeEF50%多菌灵400倍液0.8547bcdeEF3%中生菌素1000倍液0.8426bcdeEF3%中生菌素800倍液0.8245bcdeCDEF3%中生菌素600倍液0.8459abcdeBCDEF55%烯酰福美双1200倍液0.8947abcdeBCDEF55%烯酰福美双1600倍液0.8959abcdeBCDEF3%中生菌素400倍液0.8989abcdeABCDEF55%烯酰福美双1000倍液0.9018abcdeABCDE55%烯酰福美双800倍液0.9125abcdeABCDE50%异菌脲2500倍液0.9431abcdABCD55%烯酰福美双400倍液0.9541abcABC50%异菌脲2000倍液0.9689abcABC50%异菌脲1500倍液0.9657abABC50%异菌脲1000倍液0.9798abAB50%异菌脲500倍液0.9875aA2.3 毒力回归方程的计算最后对5种杀菌剂进行毒力回归方程的计算，对于高粱叶枯2号菌株，五种杀菌剂的EC50高低排列为:50%异菌脲可湿性粉剂50%多菌灵可湿性粉剂55%烯酰福美双水分散粒剂50%嘧菌酯可湿性粉剂3%中生菌素可湿性粉剂，50%异菌脲最灵敏，因此抑菌效果最好，而3%中生菌素EC50很大，且r值是负值，浓度与抑制率表现负相关，其抑菌效果最差。表5 五种杀菌剂对高粱叶枯2号菌株的毒力回归方程药剂r毒力回归方程EC50（mg/L)50%异菌脲可湿性粉剂0.92y=6.97+0.08x4.98E-26 50%多菌灵可湿性粉剂0.69y=5.68+0.23x1.09E-0355%烯酰福美双水分散粒剂0.51y=5.65+0.34x1.23E-023%中生菌素可湿性粉剂-0.59y=7.30-0.41x4.27E+05 50%嘧菌酯可湿性粉剂0.70y=5.29+0.29x9.88E-02对于高粱叶枯4号菌株，50%异菌脲可湿性粉剂的EC50为7.47E-02，表现为最灵敏，抑菌效果最好，而50%嘧菌酯可湿性粉剂的EC50非常，抑菌效果表现为最差。表6 五种杀菌剂对高粱叶枯4号菌株的毒力回归方程药剂r毒力回归方程EC50（mg/L)50%异菌脲可湿性粉剂0.96y=5.55+0.49x7.47E-02 50%多菌灵可湿性粉剂0.94y=4.65+0.41x7.21E+0055%烯酰福美双水分散粒剂0.90y=4.44+0.64x7.60E+003%中生菌素可湿性粉剂0.89y=3.76-0.72x5.15E+01 50%嘧菌酯可湿性粉剂-0.62y=10.39-1.82x9.35E+023 结论与讨论本文选用农业生产中用来防治真菌病害常用的5种杀菌剂对高粱叶枯病进行室内的药剂筛选和毒力测定，这5种杀菌剂对于链格孢的病害都具有很好的防治作用，并且具有不同程度的抑制作用，通过选取不同梯度的药剂用于试验，计算菌丝的生长抑制率和孢子抑制率，最终结合毒力回归方程，结果初步显示50%异菌脲可湿性粉剂对于该病菌的防治效果表现最好，尤其是在400-100倍液之间，其防治效果最高。另外，55%烯酰福美双水分散粒剂和50%多菌灵对于高粱叶枯病的防治也有一定的效果；3%中生菌素的防治效果微乎其微，在农业生产中起不到什么大的防治作用；而50%嘧菌酯在这几个方法中得出的结果均是对病害的发生有促进作用，因此在大田防治高粱叶枯病害时，尽量不要用此药剂。目前高粱上的病害主要以高粱大斑病和黑穗病为害最为严重，在农业防治中目前还没有特效的药剂，一般使用的化学药剂多为光谱性杀菌剂或是一些新型生物源药剂。本文最终筛选出的药剂异菌脲属于低毒类内吸性杀菌剂，对于蔬菜水果上的霜霉病，叶斑病都有很好的防治效果，另外，异菌脲对于玉米交链格孢叶枯病的防治效果也比较好，与高粱细极链格孢叶枯病很相似，张希福教授曾对玉米叶枯病做过相关的试验，其结果表示退菌特、扑海因、代森锰锌、异菌脲等对病菌分生孢子萌发有较强的抑制作用【6】 ，因此对于退菌特、扑海因、代森锰锌是否同样适用于高粱叶枯病还有待于下一步的试验。虽然此试验结果表明50%异菌脲是防治高粱叶枯病的最佳药剂，但是此试验属于室内的药剂筛选，于田间试验相比，由于试验条件和时间的限制，对于外界的自然因素和环境因素等都没有严格的控制，化学药剂室内抑菌活性和田间防治效果有较大的相关性【7】， 但田间病害的发生和流行是多种因素综合影响的结果【8】， 因此，田间试验结果是否与室内试验效果一致，还有待依赖多点重复的田间试验结果来确定， 本试验结果只是为田间病害防治选药提供参考。参考文献1曹玉佩.高粱病虫害的防治技巧J.农药市场信息.2011(20)2成慧娟.严福忠.马尚耀.王立新.葛占宇.王岩.影响高粱种子出苗率下降的原因及预防措施J.内蒙古农业科技.2011(04)3杨冠美.郑永利.吴华新.吴降星.章初龙.林福呈.9种杀菌剂对芸薹生链格孢菌毒力的测定.浙江农业科学.浙江大学生物技术研究所.2011(3)4邱星海.古蔺县高粱主要病虫害及防治技术J.四川农业科技.2011(08)5周德庆.平板划线法分离微生物纯种的一个经验J.辽宁省农业科学院.1981(7),1-26张希福.张定法.高山松.河南省玉米细交链孢菌叶枯病的初步研究.玉米链格孢菌叶枯病发生及综合防治技术.植物保护.1996年03期7林晓民.胡公洛.侯文邦.周丽鸿.豫西地区小麦雪霉叶枯病的初步研究J.河南科技大学学报(农学版).1991(03)8蒋军喜.戴兆基.唐自文.5种杀菌剂对梨轮纹病的毒力测定和田间药效试验J.江西农业大学学报.2010.(04):0710-0713致 谢 本篇论从题目的选择到实验的设计和数据的处理都得到了赵艳琴老师的耐心指导。悉心的帮我捋请论文思路，对我的论文批改给与了无微不至的关怀，使论文得以顺利完成。赵艳琴老师严谨的教学作风让我颇感敬意。特此机会，在这里对赵艳琴老师表示衷心的感谢。 然后，感谢这四年来，给我们代课的安瑞军老师、赵艳琴老师、张宁老师、张丽娟老师、石凯老师、于秀英老师、董永义老师，是你们细心的传教让我们在求学的路上受益匪浅，并且帮助我们逐步走向成才之路，感谢我的同学们陪我度过的四年大学生活，和对论文写作的大力支持。 最后，向将要在论文审阅、评议、答辩过程中给予指导的各位老师表示最衷心的感谢和美好的祝愿！目录第一章项目基本情况3一、项目情况说明3二、可行性研究的依据5第二章项目建设的必要性与可行性8一、项目建设背景8二、项目建设的必要性9三、项目建设的可行性14第三章市场供求分析及预测17一、项目区生猪养殖和养殖粪污的利用现状17二、禽畜粪污产量、沼气及沼肥产量调查与分析18三、项目产品市场前景分析20第四章项目承担单位的基本情况21一、养殖场概况21二、资产状况21三、经营状况21第五章项目地点选择分析23一、选址原则23二、项目选点23三、项目区建设条件24第六章工艺技术方案分析27一、污水处理模式的选择27二、处理工艺的选择29三、项目工艺流程31四、主要技术参数35五、主要设备选型39第七章项目建设目标40一、项目建设目标40二、项目建设规模40第八章项目建设内容42一、建安工程42二、仪器设备46第九章投资估算和资金筹措48一、投资估算的范围48二、投资估算的依据48三、投资估算49四、资金使用计划54五、资金筹措54第十章建设期限和实施进度安排55一、项目建设期限55二、项目实施进度安排55第十一章土地、规划和环保57一、土地与规划57二、环境保护57三、安全防护60第十二章项目组织管理与运行63一、项目建设组织管理63二、项目建成后运行管理66三、项目运行费用67第十三章效益分析与风险评价69一、经济效益分析69二、项目风险评价72三、生态效益75四、社会效益76五、附表77第十四章招标方案78一、编制依据78二、招标范围78三、招标方式78四、招标组织形式79有关证明材料及附件8116