分子免疫学免疫球蛋白培训课件.ppt

文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。免疫球蛋白抗体的抗体的发现及特性发现及特性免疫球蛋白的分子免疫球蛋白的分子结构结构免疫球蛋白分子的免疫球蛋白分子的功能功能抗体的抗体的异质性异质性免疫球蛋白基因的免疫球蛋白基因的遗传控制遗传控制抗体的抗体的制备制备思考题思考题文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。抗体的发现及特性抗体的发现及特性1890年年，Behring发现抗毒素发现抗毒素40年代年代，Tiselius和和Kabat采用电泳技术研究抗体采用电泳技术研究抗体1968年年WHO决定决定文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。1890年，年，Behring发现发现白喉外毒素白喉外毒素动物（发病）动物（发病）提取血清提取血清注射另外动物注射另外动物血清血清+毒素毒素动物不发病动物不发病动物不发病动物不发病说明：血清中存在一种能中和毒素的部分：说明：血清中存在一种能中和毒素的部分：抗毒素（抗体抗毒素（抗体Antibody，Ab）刺激机体产生抗体的物质：刺激机体产生抗体的物质：抗原（抗原（Antigen，Ag）白喉外毒素白喉外毒素文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。40年代，年代，Tiselius和和Kabat文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。当时认为：抗体就是当时认为：抗体就是球蛋白球蛋白（丙球），丙球就是抗体。（丙球），丙球就是抗体。后来发现：抗体大部分局限在后来发现：抗体大部分局限在区，区，少部分延伸至其它区。少部分延伸至其它区。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。1968年年WHO决定决定将具有抗体活性或化学结构与抗体相似的将具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称为球蛋白统称为-免疫球蛋白免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）分泌型：血清抗体分泌型：血清抗体膜型：膜型：B细胞膜上的抗原受体细胞膜上的抗原受体将机体受抗原刺激后出现的能与抗原发生将机体受抗原刺激后出现的能与抗原发生特异性结合，具活性的球蛋白特异性结合，具活性的球蛋白-抗体抗体（Antibody，Ab）抗体是抗体是Ig，而，而Ig并非都是抗体并非都是抗体文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。二二.免疫球蛋白分子结构免疫球蛋白分子结构基本结构基本结构立体结构立体结构功能区功能区其他成分其他成分水解片段水解片段文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。（一）基本结构（一）基本结构组成组成命名命名分区分区文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。组成由一对较长的和一对较短的多肽链组成由一对较长的和一对较短的多肽链组成四条多肽链四条多肽链长链长链：重链重链（HeavyChain，H链链），），450-550aa，55-57KD短链短链：轻链轻链（LightChain，L链链），），214aa，24KD二硫键：二硫键：H链和链和L链之间，两条链之间，两条H链之间链之间由由二硫键二硫键连接，呈连接，呈Y型型文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。N端C端文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。命命名名H H链链：分五类分五类 、链链 IgD IgD、IgMIgM、IgG IgG、IgE IgE、IgA IgA L L链链：分两型分两型 型和型和型型文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。分分区区N端：端：aa序列变化（序列变化（110个残基）个残基）C端端：则相对稳定：则相对稳定（1）可变区（）可变区（Variableregion，V区）区）近近N端：端：V区区=1/2L链链+1/4（1/5）H链链（2）恒定区（）恒定区（Constantregion，C区）区）近近C端：端：C区区=1/2L链链+3/4（4/5）H链链（3）铰链区铰链区文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。高变区（高变区（hypervariableregio，HVR）可变区中某些区域的可变区中某些区域的aa组成和排列特别组成和排列特别易变化或具更高的变易性。易变化或具更高的变易性。VL28-3549-5691-98VH29-3149-5895-102HVR1HVR2HVR3CDR1CDR2CDR3CDR（互补决定区）：（互补决定区）：Ig的抗原结合部位和抗原的抗原结合部位和抗原表位互补结合部位，决定抗体的特异性。表位互补结合部位，决定抗体的特异性。可变区可变区文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。铰链区铰链区位于CH1和CH2之间，富含脯aa，富有弹性，可自由折叠 意义：能使V区与不同距离的抗原结合 补体结合位点易于暴露 IgM和IgE无铰链区文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。立体结构立体结构文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Ig功能区功能区nL链：链：VL、CLnH链：链：IgG、IgA、IgD：VH、CH1、CH2、CH3IgM、IgE：VH、CH1、CH2、CH3、CH4文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。功能区的作用功能区的作用VL、VH：抗原结合部位抗原结合部位HVR（CDR）与抗原表位结合）与抗原表位结合CH1、CL：遗传标志所在：遗传标志所在IgG-CH2：补体结合位点，通过胎盘部位：补体结合位点，通过胎盘部位CH3：与各种组织表面：与各种组织表面IgGFc受体受体（FcR）结合部位）结合部位IgM：CH3：补体结合位点：补体结合位点IgE：CH2、CH3：与肥大细胞、嗜碱性与肥大细胞、嗜碱性粒细胞的粒细胞的（IgEFc受体受体FcR）结合部位）结合部位文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Ig的其他片段的其他片段J链链（JoiningChain）：连接两个或两个以上连接两个或两个以上Ig单体作用单体作用SIgA：二聚体：二聚体IgM：五聚体五聚体分泌片分泌片SP（SecretoryPiece）：是是SIgA上上的一个辅助成分的一个辅助成分上皮细胞合成，分泌到黏膜细胞表面上皮细胞合成，分泌到黏膜细胞表面作用：具抵抗外分比液中蛋白水解酶作用：具抵抗外分比液中蛋白水解酶的降解作用，稳定的降解作用，稳定SIgA的作用。的作用。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。水解片段水解片段木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶IgG2Fab段段+Fc段段（抗原结合片段）（可结晶片段）抗原结合片段）（可结晶片段）胃蛋白酶胃蛋白酶IgGF（ab）2段段+pFc段段（抗原结合片段）抗原结合片段）碎片碎片意义：意义：F（ab）2段保持了与抗原结合的生物学活性，段保持了与抗原结合的生物学活性，又减少了又减少了Fc段的生物学活性。可应用于生物段的生物学活性。可应用于生物制品研究，如精致抗毒素等。制品研究，如精致抗毒素等。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。三免疫球蛋白的生物学特性三免疫球蛋白的生物学特性特异性特异性结合抗原结合抗原：活化补体：活化补体：IgM，IgG1，IgG2，IgG3-经典途径经典途径凝聚的凝聚的IgA，IgG4，IgE-旁路途径旁路途径结合结合Fc受体受体：Ig+AgIg的的Fc段活化段活化与细胞表面的与细胞表面的Fc受体结合受体结合通过胎盘通过胎盘文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。与Ag的结合具有高度特异性，必须是超变区与抗原的空间构象完全吻合。与抗原结合后，可介导体内的多种生理和病理效应（中和病毒、毒素，介导炎症反应），体外可产生凝集、沉淀现象用于检测等 特异性结合抗原特异性结合抗原文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。结合结合Fc受体受体介导介导I型超敏反应型超敏反应调理调理吞噬作用吞噬作用发挥发挥ADCC作用作用文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。介导介导I型超敏反应型超敏反应：IgE由于其由于其Fc段结构的特异性，段结构的特异性，可在游离情况下与相应的可在游离情况下与相应的Fc受体结合受体结合肥大细胞肥大细胞IgEFcR嗜硷性粒细胞嗜硷性粒细胞一旦一旦Ag与与IgE结合，触发细胞脱颗粒，产生结合，触发细胞脱颗粒，产生I型超敏反应。型超敏反应。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。调理吞噬作用：调理吞噬作用：抗原与抗体结合后，能增强吞噬细胞的吞噬活性抗原与抗体结合后，能增强吞噬细胞的吞噬活性。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。发挥发挥ADCC作用作用靶细胞抗原靶细胞抗原+IgGIgGFc段活化段活化+FcR中性粒细胞，单核细胞，中性粒细胞，单核细胞，M，NK发挥对靶细胞的直接杀伤作用发挥对靶细胞的直接杀伤作用文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。通过胎盘通过胎盘IgG：唯一通过胎盘的免疫球蛋白唯一通过胎盘的免疫球蛋白母体的母体的IgGCH2滋养层细胞内吞滋养层细胞内吞主动外排主动外排胎儿体内胎儿体内吞噬囊泡中有吞噬囊泡中有IgG的的Fc受体而无其他受体而无其他Ig受体，受体，且且IgG与与FcR结合后得以避免被酶水解结合后得以避免被酶水解文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。三三.抗体的抗体的异质性异质性抗原抗原A/B-机体机体-抗体抗体A/B(识别不同抗原识别不同抗原)Ig可变区（可变区（CDR）差异）差异抗原抗原A-机体机体-抗体抗体A（IgM/IgG）（识别同一抗原）（识别同一抗原）Ig恒定区差异恒定区差异抗体异质性抗体分子的多样性抗体异质性抗体分子的多样性文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。抗体恒定区的异质性抗体恒定区的异质性Ig Ig 类型类型 抗体异质性产生因素抗体异质性产生因素 外源性外源性Ig Ig 多样性多样性 内源性内源性Ig Ig 血清型血清型文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。1）类与亚类：类：IgG、IgM、IgA、IgD、IgE亚类：IgA：IgA1、IgA2（1、2）IgG：IgG1IgG4（1、4）尚未发现IgM，IgD，IgE有不同亚类2）型与亚型：型：和，：=2：1（人）亚型：1-4四个亚型Ig Ig 类型类型文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Ig Ig 多样性多样性q自然界多种不同的抗原（表位）诱导自然界多种不同的抗原（表位）诱导 机体产生多种不同的特异性抗体机体产生多种不同的特异性抗体q 同一种抗原（表位）诱导机体产生特同一种抗原（表位）诱导机体产生特 异性相同、类型不同的抗体异性相同、类型不同的抗体文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Ig Ig 血清型血清型q IgIg具有双重性：具有双重性：与相应抗原发生特异性结合抗体特性与相应抗原发生特异性结合抗体特性 可诱导机体产生特异性抗体抗原特性可诱导机体产生特异性抗体抗原特性q 类型：类型：同种型同种型、同种异型同种异型、独特型独特型文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。同种型（同种型（Isotype）存在同种抗体分子中的抗原表位存在同种抗体分子中的抗原表位同一种属所有个体同一种属所有个体Ig分子共有的抗原特异性标志分子共有的抗原特异性标志具种属特异性，为种属型标志，存在具种属特异性，为种属型标志，存在IgC区区。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。同种异型（同种异型（Allotype）同一种属不同个体间的同一种属不同个体间的Ig分子所具有的不同抗分子所具有的不同抗原特异性，因而可在同种异体间诱导免疫反应。原特异性，因而可在同种异体间诱导免疫反应。为个体型标志，存在为个体型标志，存在IgC区、区、V区。区。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。独特型（独特型（Idiotype，Id）同一个体不同抗体形成细胞所产生的同一个体不同抗体形成细胞所产生的Ig分子的分子的V区的抗原性不同（区的抗原性不同（CDR序列）。序列）。A1B1Ab1A2机体机体B2Ab2（HVR序列）序列）A3B3Ab3B4Ab4（抗（抗-Ab1）B5Ab5（抗（抗-Ab2）B6Ab6（抗（抗-Ab3）独特型抗原表位（独特型抗原表位（Id）-抗独特型抗体抗独特型抗体（AId）文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。独特型表位独特位，独特型表位独特位，存在存在Ig的的V区区文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。五免疫球蛋白基因的遗传控制五免疫球蛋白基因的遗传控制Ig的基因的基因定位和基因库定位和基因库Ig基因片段基因片段重排重排Ig的基因的基因多样性多样性Ig的基因的基因生物合成生物合成Ig的的类型转化类型转化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Ig的基因定位的基因定位免疫球蛋白基因定位免疫球蛋白基因定位编码的肽链编码的肽链基因符号基因符号基因定位（人）基因定位（人）H链链IGH第第14号号链链IG第第6号号链链IG第第16号号文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。基因库基因库H链：链：VH：VH，DH，JH（可变区基因、多样性基因、连接基因）CH：5-C-C-C3-C1-C1-C2-C4-C-C2-3L链：链：链：链：V，JC链：链：VJ-C（JC两群基因并不分开）两群基因并不分开）文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。人类H链基因重排vV区区：VH：功能基因片段约51个，编码靠N段的CDR1，CDR2和3个骨架区（FR1-3）DH：功能基因片段约30个，编码CDR3JH：功能基因片段约6个，编码FR4基因重排：首先D与J基因连接形成D-J基因，然后与V基因连接形成V-D-J基因vC区区：通过RNA剪接来实现Ig类型转化FR3FR2FR1FR4CDR1CDR2CDR3文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。人类L链基因重排VL编码编码CDR1，CDR2区区JL编码编码CDR3区区CL编码恒定区编码恒定区链：链：V：功能基因片段50个J：功能基因片段5个C:功能基因片段1个链：链：V：50-100个基因片段个基因片段J-C：基因不可分，有：基因不可分，有4个基因组个基因组链重排失败，再进行链重排失败，再进行链重排链重排FR3FR2FR1FR4CDR1CDR2CDR3文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。基因重排基因重排文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。L VH Cm1.胚系基因2.基因重排3.重排基因4.RNA转录本5.mRNA剪切6.成熟mRNA7.Igm前体多肽 V1 V2 V3 Vn D1 D2 D3 Dn J1 J2 J3 J4 Cm Cd Cg Ce Ca V1 V2 D2 J3 J4 Cm Cd Cg Ce Ca V1 V2 D2 J3 J4 Cm Cd Cg Ce Ca V2D2J3 J4 Cm Cd V2D2J3 Cm Cd V2D2J3 CdCmJ4J4 V2 D2 J3 Cm V2 D2 J3 Cd L VH Cd Ig重重链链基基因因重重排排 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。日本-利根川文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Ig的基因多样性形成机制的基因多样性形成机制组合组合造成的多样性造成的多样性连接连接造成的多样性造成的多样性体细胞高频体细胞高频突变突变造成的多样性造成的多样性文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。组合造成的多样性组合造成的多样性（combinatorialdiversity）众多的众多的V区基因片段的组合和轻重链的组合，区基因片段的组合和轻重链的组合，众多的众多的V、D、J基因中，重排时每个片段只能取一个，基因中，重排时每个片段只能取一个，就存在多种组合。就存在多种组合。VH：51个基因片段，编码个基因片段，编码CDR1、CDR2部分的部分的aaDH：30个基因片段，编码个基因片段，编码CDR3中的大部分中的大部分aaJH：6个基因片段，编码其余的个基因片段，编码其余的CDR3部分的部分的aa和第和第四个骨架区四个骨架区VH链：链：51x30 x6=9180种种V：50个基因片段个基因片段J：5个基因片段个基因片段V链：链：50X5=250种种V：30个基因片段个基因片段J：4个基因片段个基因片段V链：链：30X4=120种种文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。连接造成的多样性连接造成的多样性(junctional diversity)CDR3区位于区位于V、J和和V、D、J片段连接处，片段连接处，两片段之间可插入或丢失数个核苷酸，增两片段之间可插入或丢失数个核苷酸，增加了互补决定区（加了互补决定区（CDR3）的）的多样性多样性。N-氨基酸氨基酸插入插入文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。V、D、J片段连接多样性片段连接多样性文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。N-氨基酸氨基酸插入插入文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。体细胞高频突变造成的多样性体细胞高频突变造成的多样性(somatichypermutation)成熟的成熟的B细胞重排的细胞重排的V区基因，往往在抗原的区基因，往往在抗原的刺激下发生点突变，突变的频率非常高（每次细胞刺激下发生点突变，突变的频率非常高（每次细胞分裂，大约每分裂，大约每1000个个bp中就有一对发生突变，而其中就有一对发生突变，而其他体细胞的突变频率为他体细胞的突变频率为10-10bp。）。）。称为体细胞高频突变。称为体细胞高频突变。有人计算多样性可达有人计算多样性可达4.8X107，故针对外界，故针对外界众多的抗原分子，体内可产生数以亿计的不同抗体众多的抗原分子，体内可产生数以亿计的不同抗体分子。分子。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。免疫球蛋白的生物合成Ig主要由脾、淋巴结和其他淋巴组织内的桨细胞所产生。重链和轻链分别合成，然后装配。Ig的合成过程：转录、mRNA剪切、合成重链和轻链；在粗面内织网装配四肽链；转运、加糖基、分泌胞外。B细胞在抗原刺激后，最初只合成IgM，后合成IgG。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。免疫球蛋白类型转换免疫球蛋白类型转换指一个指一个B细胞克隆在分化过程中细胞克隆在分化过程中V区基因不变，区基因不变，而而CH基因片段不断发生重排，即识别抗原的基因片段不断发生重排，即识别抗原的特异性不变，但特异性不变，但Ig分子的类和亚类发生变化。分子的类和亚类发生变化。Ag机体机体B细胞细胞先先IgM（VDJC）后后IgG（VDJC）V区：区：V-D-J基因不变，识别抗体能力不变基因不变，识别抗体能力不变C区：区：C转换为转换为C，从，从IgM-IgG文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。六抗体的制备六抗体的制备1.多克隆多克隆抗体（抗体（Polyclonalantibody,PAb）第一代第一代抗体抗体2.单克隆单克隆抗体（抗体（Monoclonalantibody，McAb）第二代抗体第二代抗体3.基因工程抗体基因工程抗体（genticengineeringantibody）第三代抗体第三代抗体文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。多克隆抗体多克隆抗体12B1Ab13机体机体B2Ab2B3Ab3蛋白质抗原蛋白质抗原多种抗体的混合物多种抗体的混合物存在于血清与体液中存在于血清与体液中由含多种抗原表位的抗原刺激机体产生的免疫由含多种抗原表位的抗原刺激机体产生的免疫血清，含多种抗体的混合物，称多克隆抗体。血清，含多种抗体的混合物，称多克隆抗体。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。单克隆抗体（单克隆抗体（McAb）由识别一个抗原表位的由识别一个抗原表位的B细胞克隆所产生的均细胞克隆所产生的均一的抗体。一的抗体。特点：纯度高，特异性强。特点：纯度高，特异性强。两位科学家在两位科学家在1975年首创杂交瘤技术制造年首创杂交瘤技术制造McAb，并于并于1985年获诺贝尔奖。年获诺贝尔奖。1974年，年，Koehler在在Milstein位于剑桥的实验位于剑桥的实验开始博士后研究，两人为研究抗体的多样性，对开始博士后研究，两人为研究抗体的多样性，对抗体形成细胞与骨髓瘤细胞进行融合试验。抗体形成细胞与骨髓瘤细胞进行融合试验。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。原原理理小鼠骨髓瘤细胞（浆细胞瘤细胞）能在体外无限小鼠骨髓瘤细胞（浆细胞瘤细胞）能在体外无限制增殖和分泌无活性的制增殖和分泌无活性的Ig（单一）。（单一）。小鼠脾细胞（富含小鼠脾细胞（富含B细胞）具有产生特异性抗体细胞）具有产生特异性抗体的能力，但不能无限制繁殖传代。的能力，但不能无限制繁殖传代。采用融合剂将两种细胞融合成杂交瘤细胞，具有采用融合剂将两种细胞融合成杂交瘤细胞，具有亲代双方的特性：亲代双方的特性：即能人工培养使之无限止繁殖，即能人工培养使之无限止繁殖，又可产生特异性抗体。又可产生特异性抗体。由于每一个由于每一个B细胞克隆只针对一个抗原表位，产生细胞克隆只针对一个抗原表位，产生相对应抗体，通过筛选单个外细胞，在体外增殖相对应抗体，通过筛选单个外细胞，在体外增殖而形成的细胞克隆只产生完全均一（类、亚类、而形成的细胞克隆只产生完全均一（类、亚类、型等）的单一特异性型等）的单一特异性Ab，即，即McAb。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。抗原免疫的小鼠脾细胞抗原免疫的小鼠脾细胞 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞（产生抗体（产生抗体，（不含（不含HGPRT和和TK,体外不能长期存活）体外不能长期存活）体外能长期存活）体外能长期存活）混合后加混合后加融合剂融合剂（PEG或仙台病毒等）或仙台病毒等）HAT培养基中培养培养基中培养次黄嘌呤（次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶核苷（）和胸腺嘧啶核苷（T）为合成核酸的原料，氨基喋呤（为合成核酸的原料，氨基喋呤（A）能）能阻止正常合成核酸途径阻止正常合成核酸途径未融合脾细胞或未融合脾细胞或未融合瘤细胞或未融合瘤细胞或杂交瘤细胞杂交瘤细胞自相融合脾细胞自相融合脾细胞自相融合瘤细胞自相融合瘤细胞（死亡）（死亡）（死亡）（死亡）（存活）（存活）文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。应应用用单克隆抗体由于纯度高、效价高、特异性强，单克隆抗体由于纯度高、效价高、特异性强，广泛应用于诊断、治疗、研究。广泛应用于诊断、治疗、研究。但目前临床应用的均为鼠原性但目前临床应用的均为鼠原性McAb，对人，对人来说是异物，具有抗原性，从而限制了体内来说是异物，具有抗原性，从而限制了体内的应用，尤其是抗体导向治疗肿瘤的方法。的应用，尤其是抗体导向治疗肿瘤的方法。因而，有了第三代因而，有了第三代Ab，即基因工程抗体，即基因工程抗体文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。基因工程抗体基因工程抗体概念概念嵌合抗体嵌合抗体：第一代基因工程抗体第一代基因工程抗体改型改型抗体：抗体：第二代基因工程抗体第二代基因工程抗体小分子抗体小分子抗体：第三代基因工程抗体：第三代基因工程抗体文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。基因工程抗体概念基因工程抗体概念根据研究者的意图，在基因水平对根据研究者的意图，在基因水平对Ig分子进行切割，分子进行切割，拼接或修饰，甚至是人工合成后导入受体细胞表达拼接或修饰，甚至是人工合成后导入受体细胞表达大，产生的新型抗体。大，产生的新型抗体。由于可用人体的由于可用人体的aa序列代替某些鼠源性抗体序列代替某些鼠源性抗体的的aa序列，保留其结合抗原的特异部位，再经修序列，保留其结合抗原的特异部位，再经修饰而成。故又称：人源化抗体。饰而成。故又称：人源化抗体。且：可从最小抗原结合位点（高变区）且：可从最小抗原结合位点（高变区）Fv片片段到段到F（ab）片段，甚至整个片段，甚至整个Ig分子，因而免疫分子，因而免疫原性大大地减少。原性大大地减少。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。嵌合抗体嵌合抗体鼠鼠VH基因基因+人人CH基因基因嵌合基因嵌合基因鼠鼠VL基因基因+人人CL基因基因插入载体插入载体真核或原核表达真核或原核表达人人-鼠嵌合蛋白鼠嵌合蛋白特点：减少了特点：减少了Fc段的生物学活性（鼠源性）段的生物学活性（鼠源性）但在临床上应用时发现：但在临床上应用时发现：嵌合抗体会诱发强烈的抗嵌合抗体会诱发强烈的抗可变区抗体可变区抗体文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。改型抗体改型抗体鼠的鼠的HVR（CDR）基因）基因-嵌入人嵌入人Ab的可的可变区基因变区基因-嵌合基因嵌合基因-人人Ig恒定区恒定区基因基因-插入载体真核系统（原核系统）插入载体真核系统（原核系统）-表达表达CDR移植抗体移植抗体特点特点：更进一步减少了鼠源性抗体成分：更进一步减少了鼠源性抗体成分文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。小分子抗体小分子抗体Ig-酶解酶解-提取提取Fv片段（片段（VH+VL）或）或Fab段：段：抗原结合特异性不变抗原结合特异性不变,非常适合临床诊断，肿瘤非常适合临床诊断，肿瘤的导向治疗的导向治疗用噬菌体表达技术表达人抗体片段用噬菌体表达技术表达人抗体片段人抗体多肽基因（人抗体多肽基因（VL，VH）+噬菌体（噬菌体（M13/Fd）外衣壳蛋白外衣壳蛋白III基因的基因的N端融合，转染端融合，转染E.coli，噬菌，噬菌体表面出现抗体多肽。体表面出现抗体多肽。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。仅含仅含V区结构区结构，免疫原性较弱。，免疫原性较弱。分子量小，易通过血管壁，可有效克服肿分子量小，易通过血管壁，可有效克服肿瘤灶组织对抗体的生理阻抗。瘤灶组织对抗体的生理阻抗。无无Fc段，不与非靶细胞的段，不与非靶细胞的FcR结合，易达结合，易达肿瘤病灶，适合临床诊断，肿瘤的导向治肿瘤病灶，适合临床诊断，肿瘤的导向治疗。疗。与靶细胞抗原结合力较弱。与靶细胞抗原结合力较弱。半衰期短，影响到达肿瘤局部抗体的浓度。半衰期短，影响到达肿瘤局部抗体的浓度。小分子抗体特点文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。将人将人Ab的全部的全部H链，链，L链的链的Fab片段全部与片段全部与噬菌噬菌体外衣壳蛋白基因融合，那么就可在噬菌体的表体外衣壳蛋白基因融合，那么就可在噬菌体的表面建立一个表达人抗体面建立一个表达人抗体Fab多肽基因的多肽基因的噬菌体噬菌体文库文库。进一步可从噬菌体文库中筛选出特异性多肽，进一步可从噬菌体文库中筛选出特异性多肽，从而达到制备完全人源抗体的目的。从而达到制备完全人源抗体的目的。目前，目前，RSV，TNF，HIV，汉滩病毒的噬菌体，汉滩病毒的噬菌体Fab抗体已获成功，正在进入临床使用。抗体已获成功，正在进入临床使用。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。思考题思考题1.IgIg的基本结构，功能和水解片段的基本结构，功能和水解片段2.Ig2.Ig多样性形成的机制多样性形成的机制3.3.小分子抗体的特点小分子抗体的特点4.4.单克隆抗体、基因工程抗体、嵌单克隆抗体、基因工程抗体、嵌合合 抗体、抗体、改型抗体，改型抗体，CDRCDR、ADCCADCC等概念等概念