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酶的结构与功能的介绍ppt课件.ppt

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1、第二章第二章 酶(Enzyme)1.主要内容主要内容第一节 酶的概况第二节 酶促反应机制第三节 酶促反应动力学第四节 酶活性的调节控制第五节 酶活力测定、酶的制备2.第一节 酶的概况一、酶的概念酶是一类由活细胞产生的,对其特异底物具有高效催化作用的蛋白质或核酸分子。3.二、酶学研究简史公元前两千多年,我国已有酿酒记载。一百余年前,Pasteur认为发酵是酵母细胞生命活动的结果。1878年,Kuhne首次提出Enzyme 一词。1897年,Buchner兄弟用不含细胞的酵母提取液,实现了发酵。1926年,Sumner首次从刀豆中提纯出脲酶结晶。1982年,Cech首次发现RNA也具有酶的催化活性

2、,提出核酶(ribozyme)的概念。1995年,发现脱氧核酶。4.三、酶的化学本质1大多数酶是蛋白质1926年美国Sumner得到脲酶的结晶,并指出酶是蛋白质.1930年Northrop等得到了胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的结晶,并进一步证明了酶是蛋白质。J.B.SumnerJ.H.Northrop5.证据:引起蛋白质变性的理化因素,可引起酶失活两性电解质水解产生氨基酸受蛋白水解酶作用失活具有胶体的性质化学反应6.2核酶1982年美国T.Cech(切克)等人发现四膜虫的rRNA前体能在完全没有蛋白质的情况下进行自我加工,发现RNA有催化活性。Thomas Cech University

3、of Colorado at Boulder,USA Sidney Altman Yale University New Haven,CT,USA Cech和Altman(阿尔特曼)各自独立地发现了RNA的催化活性,并命名这一类酶为ribozyme(核酶)7.8.9.3有些DNA也有催化活性1995年Cuenoud等发现有些DNA分子亦具有催化活性。4抗体酶(abzyme)抗体酶:指具有催化功能的抗体分子,在抗体分子的可变区(即肽链的N端)是识别抗原的活性区域,这部分区域被赋予了酶的属性。1986年美国Schultz和Lerner两个实验室同时在Science上发表论文,报道他们成功地得到了具

4、有催化活性的抗体。10.四、酶促反应的特点1.酶与一般催化剂的共同点在反应前后没有质和量的变化;只能催化热力学允许的化学反应;只能加速可逆反应的进程,而不改变反应的平衡点。11.酶促反应具有极高的效率酶促反应具有高度的特异性酶促反应的可调节性酶促反应要求严格的环境条件酶易失活2.酶促反应的特点12.五、酶的专一性(特异性)l酶的专一性是指酶对它所催化的反应及其底物具有的严格的选择性,通常一种酶只能催化一种或一类化学反应。13.类型14.酶的的专一性(特异性,一性(特异性,specificity)1、绝对专一性(一性(absolute specificity)例例:15.(1)族)族专一性(基一

5、性(基团专一性,一性,group specificity)相相对专一性(一性(relative specificity)A B 或或 A B如如-D-葡萄糖苷葡萄糖苷酶 16.(2)键专一性一性 A B17.3、立体、立体专一性(一性(stereospecificity)(1)D-,L-立体异构立体异构专一性一性(2)几何异构)几何异构专一性一性 18.(3)酶能区分从有机化学能区分从有机化学观点来看是属于点来看是属于对称分子中两个等称分子中两个等 同的基同的基团,只催化其中的一个基,只催化其中的一个基团,而不催化另一个。,而不催化另一个。例例1:若甘油激若甘油激酶不能区分两个不能区分两个CH

6、2OH基基团,则会生成会生成:和和19.例例2:20.六、酶的分类1.1.根据根据酶酶所作用的反所作用的反应应性性质质21.六大六大类酶催化反催化反应的性的性质 氧化氧化还原原酶类(oxido-reductases)催化氧化催化氧化还原反原反应的的酶,包括氧化,包括氧化酶类、脱脱氢酶类、过氧化氧化氢酶、过氧化物氧化物酶等。等。22.(1)氧化)氧化酶类:催化底物脱:催化底物脱氢,并氧化生成,并氧化生成H2O或或H2O2。邻苯二酚氧化苯二酚氧化酶(EC 1.10.3.1,邻苯二酚:氧氧化苯二酚:氧氧化酶)邻苯二酚苯二酚邻苯苯醌23.(2)脱)脱氢酶类:直接催化底物脱:直接催化底物脱氢 A2H+B

7、 A+B2H 例:乳酸脱例:乳酸脱氢酶(EC 1.1.1.27,L-乳酸:乳酸:NAD+氧化氧化还原原酶)乳酸乳酸丙丙酮酸酸24.转移移酶类(transferases)催化基催化基团的的转移移 例:谷丙例:谷丙转氨氨酶(GPT)()(EC 2.6.1.2,L-丙氨酸:丙氨酸:酮戊二酸氨基戊二酸氨基转移移酶)25.水解水解酶类(hydrolases)AB+H2O AOH+BH 26.裂合裂合酶类(lyases)从底物移去一个基从底物移去一个基团而形成双而形成双键或逆反或逆反应 AB A+B 例例1:27.例例2:28.异构异构酶类(isomerase)催化异构化反催化异构化反应 例:例:29.连

8、接接酶类(ligases,也称也称synthetases合成合成酶类)将两个小分子合成一个大分子,通常需要将两个小分子合成一个大分子,通常需要ATP供能。供能。例:例:30.(连接酶)(异构)(裂合)(水解)31.2.根据酶的分子组成32.结合酶各部分作用:酶蛋白:决定反应特异性 辅助因子:决定反应种类和性质33.辅助因子-金属离子 A.稳定定酶蛋白构象:蛋白构象:稳定定酶蛋白催化活性所必需蛋白催化活性所必需的分子构象的分子构象B.构成构成酶的活性中心:的活性中心:作作为酶的活性中心的的活性中心的组成成成分,参与构成成分,参与构成酶的活性中心的活性中心C.连接作用:接作用:作作为桥梁,将底物分

9、子与梁,将底物分子与酶蛋白螯蛋白螯合起来合起来D.传递电子、原子或基子、原子或基团E.中和阴离子,降低反中和阴离子,降低反应中的静中的静电斥力斥力34.35.辅助因子-小分子有机化合物 主要作用是参与酶的催化作用,在催化中起着原子、电子或某些化学基团的传递。种类很多,分子结构中常含有维生素或维生素类物质36.37.(共价结合)38.3.根据酶的结构v单体酶 通常为一条多肽链,但也有由二硫键相连的多条多肽链的情况。v寡聚酶 两个或两个以上亚基组成的酶v多酶复合体有几种功能相关的酶靠非共价键彼此嵌合形成的一个复合物称为多酶复合体。v多酶体系 在完整细胞内的某一代谢过程中,由几个酶形成的反应体系。多

10、酶体系的存在增加了整个代谢反应的催化效率,同时便于机体对酶的调控。39.七、酶的命名根据国际酶学委员会的建议,每个酶允许有两个名称:习惯名和系统名。1.习惯命名法:v底物名+“酶”如淀粉酶v有时在名字前加上酶的来源。如胃蛋白酶v反应性质+“酶”如水解酶习惯名一般比较简短,使用方便;但缺乏系统性,不够精确,有时会一酶数名或一名数酶的现象。40.2.系统命名法底物名+反应类型+“酶”l若底物二个或二个以上,则所有底物都需写出,各底物间以冒号隔开。若底物中有水,可省略。l所有底物的构型都应标明。l反应类型指酶学委员会规定的六种。例如“乳酸脱氢酶”的系统名为“L-乳酸:NAD+氧化还原酶”41.酶的标

11、码:国际酶学委员会规定,每个酶都有唯一的特定标码。如乙醇脱氢酶的编码是:EC1.1.1.1第一个“1”第1大类,即氧化还原酶类;第二个“1”第1亚类,供氢体为CHOH;第三个“1”第1亚亚类,受氢体为NAD+;第四个“1”在亚亚类中的顺序号又如乳酸脱氢酶的编码是:EC1.1.1.2742.43.第二节 酶促反应机制44.活性中心的基团均属必需基团,但必需基团还包括活性中心以外的其他一些基团,它们在维持酶的空间结构、酶活性的调节、免疫等方面起着重要的作用。一、酶的活性部位1.酶的活性中心有必需基团组成的,具有一定空间结构的,直接与底物结合,并与酶催化作用直接有关的结构区域(微区)称为酶的活性中心

12、.45.2.必需基团l与酶活性有关的基团叫必需基团(essential group)l酶分子中氨基酸侧链的化学基团中,一些与酶活性密切相关的化学基团46.活性中心(活性中心(active center)外的必需基)外的必需基团必需基必需基团 结合基合基团:与底物相:与底物相结合合 活性中心内的必需基活性中心内的必需基团 催化基催化基团:催化底物:催化底物转化成化成产物物 活性中心外的必须基团维持酶活性中心应有的空间构象或作为调节剂的结合部位所必需。47.48.例:胰凝乳蛋白酶的肽链折叠(示活性中心)49.50.结合部位:底物在此与酶分子结合。一个酶的结合部位又可以分为各种亚位点,分别与底物的不

13、同部位结合。催化部位:底物的敏感键在此被打断或形成新的键,从而发生一定的化学反应。一个酶的催化部位可以不止一个。51.3.酶的活性中心的特点都是酶分子表面的一个凹穴,有一定的大小和形状,但它们不是刚性的,在与底物接触时表现一定的柔性。活性部位为非极性的微环境,这有利于与底物的结合。在活性中心内还含有少数极性基团直接与底物相作用。52.溶菌酶活性中心为一裂缝,可以容纳肽多糖的六个单糖基,并与之形成氢键和范德华力。结合基团是101位的天冬氨酸和108位的色氨酸催化基团是35位的谷氨酸和52位的天冬氨酸。53.二、酶促反应机理v活化分子:反应中能量较高的、能发生有效碰撞的分子,叫做活化分子v活化能:

14、在一定温度下,1摩尔底物全部进入活化态所需要的自由能。单位kJ/mol54.55.酶的催化机理是降低活化能56.例例 2H2O22H2O+O2 反反 应活化能活化能非催化反非催化反应75.24kJ/mol钯催化反催化反应48.9kJ/molH2O2酶催化催化8.36kJ/mol57.三、中间产物学说 酶催化时,酶活性中心首先与底物结合生成一种酶-底物复合物(ES),此复合物再分解释放出酶,并生成产物。一般化学反一般化学反应历程:程:S P 酶促反促反应历程:程:S+E ES E+P58.四、诱导契合学说(INDUCED-FITHYPOTHESIS)1958年Koshland提出“诱导契合学说”

15、:酶分子活性中心的结构原来并非和底物的结构互相吻合,但酶的活性中心是柔性的而非刚性的。当底物与酶相遇时,可诱导酶活性中心的构象发生相应的变化,其上有关的各个基团达到正确的排列和定向,因而使底物和酶能完全契合,结合成中间络合物,并有利于催化反应的进行。当反应结束后产物从酶上脱落下来后,酶的活性中心又恢复了原来的构象。59.60.61.62.五、与酶的高效率催化有关的因素1邻近效应与定向效应邻近效应:指酶和底物结合形成中间复合物时,底物分子之间,酶的催化基团与底物之间结合与同一分子,使有效浓度增加,从而使反应速率增加的效应(两个反应的分子,它们反应的基团需要互相靠近,才能反应)。定向效应:指酶的催

16、化基团与底物的反应基团之间的正确定向。63.64.2张力效应和底物的形变65.3广义的酸碱催化v酸碱催化:瞬时向反应物中提供质子或从反应物中提供质子以稳定过渡态,加速反应。v狭义的酸碱催化:在水溶液中通过高反应性的H+离子或OH-离子对化学反应速度表现出的催化作用。v广广义的酸碱催化的酸碱催化:通过H+离子或OH-离子及能提供H+离子或OH-离子的供体进行的催化组成酶活性中心的极性基团,在底物的变化中起质子的供体或受体的作用。66.v酶活性中心处可以提供质子或接受质子而起广义酸碱催化作用的功能基团有:谷氨酸、天冬氨酸侧链上的羧基 丝氨酸、酪氨酸中的羟基 半胱氨酸中的巯基 赖氨酸侧链上的氨基 精

17、氨酸中的胍基 组氨酸中的咪唑基67.68.69.4共价催化它是指酶活性中心处的极性基团,在催化时,能分别放出电子或汲取电子并作用于底物的缺电子中心或负电中心,迅速形成不稳定的共价中间复合物,降低反应活化能,使反应加剧。根据活性中心处极性基团对底物进攻的方式不同,共价催化可分为亲电催化与亲核催化两种。70.v活性中心处的亲核基团有:丝氨酸的羟基半胱氨酸的巯基组氨酸的咪唑基v底物上典型的亲电中心:磷酰基、酰基、糖基71.特别注意:组氨酸的咪唑基既是很强的亲核基团,又是有效的广义酸碱功能基团。影响酸碱催化反应速度的因素有两个v第一个是酸碱的强度:在这些功能基团中,组氨酸的咪唑基的解离情况pK值为6.

18、0,在生理pH条件下,既可以作质子的供体又可作质子的受体。因此,咪唑基是催化中最有效最活泼的一个催化功能基团;v第二个是这些功能基团供出质子或接受质子的速度,其中的咪唑基的情况特别突出,它供出或接受质子的速度十分迅速,其半衰期小于10-10秒。而且,供出或接受质子的速度几乎相等。由于咪唑基有如此的优点,所以虽然组氨酸在大多数蛋白质中含量很少,却很重要,在许多酶的活性中心处都含有组氨酸。推测很可能在生物进化过程中,它不是作为一般的结构蛋白成分,而是被选择作为酶分子中的催化结构而存在下来的。具有酸碱催化特征的酶促反应,酶与底物结合成的中间产物是离子型络合物。72.使底物靠拢使底物分子产生应力使底物

19、分子电荷变化73.5.金属离子催化6.多元催化和协同效应7.活性部位微环境的影响74.注意:一种酶的催化反应常常是多种催化机制的综合作用,这是酶促反应高效率的重要原因 75.第三第三节 酶促反促反应动力学力学KINETICS OF ENZYME-CATALYZED REACTION l 酶促反应动力学:研究各种因素对酶促反应速率的影响,并加以定量的阐述。76.酶促反应速度的测定77.影响因素包括有:酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等。研究一种因素的影响时,其余各因素均恒定。78.一、酶浓度对反应速度的影响 l 当反应系统中底物的浓度足够大时,酶促反应速度与酶浓度成正比,即=kE。7

20、9.二、温度对反应速度的影响 l 一般来说,酶促反应速度随温度的增高而加快。但当温度增加达到某一点后,由于酶蛋白的热变性作用,反应速度迅速下降,直到完全失活。l酶促反应速度随温度升高而达到一最大值时的温度就称为酶的最适温度。80.81.三、PH对反应速度的影响l观察pH对酶促反应速度的影响,通常为一“钟形”曲线,即pH过高或过低均可导致酶催化活性的下降。l酶催化活性最高时溶液的pH值就称为酶的最适pH。82.83.q最适pH(optimumpH):酶催化活性最大时的环境pH。0酶活性 pH胃蛋白酶 淀粉酶 胆碱酯酶 24681084.(一)底物对酶促反应的饱和现象:研究前提:v单底物、单产物反

21、应v酶促反应速度一般在规定的反应条件下,用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示v反应速度取其初速度,即底物的消耗量在5以内的反应速度v底物浓度远远大于酶浓度四、底物浓度对反应速度的影响 85.当底物浓度较低时:反应速率与底物浓度呈正比;反应为一级反应随底物浓度增加:反应速率不再呈正比例增加反应为混合级反应当底物浓度高达一定程度:反应速率不再增加;反应为零级反应在其他因素不变的条件下,底物浓度对反应速率的影响呈矩形双曲线型86.87.(二)米氏方程式的推导lMichaelis&Menten于1913年推导出了上述矩形双曲线的数学表达式,即著名的米氏方程(Michaelisequation)

22、。vV不同的底物浓度时的反应速率;S底物浓度;Vmax最大反应速率;Km米氏常数88.Michaelis-Menten的三个假的三个假设:(1)推推导的的v为反反应初速度初速度 产物的生成量很少物的生成量很少 k2的反的反应忽略不忽略不计。(2)反反应体系体系处于于稳态 即即ES不不变 ES的生成量的生成量=ES的分解量的分解量(3)S E S ES 89.ES生成速度生成速度:,ES分解速度分解速度:当当酶反反应体系体系处于于恒恒态时:即即:令令:则:(1)经整理得整理得:由于由于酶促反促反应速度由速度由ES决定,即决定,即,所以所以(2)将将(2)代入代入(1)得得:(3)当当Et=ES时

23、,(4)所以所以将将(4)代入代入(3),则:米氏方程的推导恒态法90.(三)KM的意义:v1.Km值等于等于酶促反促反应速度速度为最大反最大反应速度一半速度一半时的的底物底物浓度,度,单位是位是mol/L。即即当当=Vmax/2时,Km=S。91.v2.Km值的大小可以近似反应酶与底物亲和力的大小。Km越小,酶与底物的亲和力越大。v3.可用于判断反应级数:当S100Km时,=Vmax,反应为零级反应;当0.01KmSE。164.二、二、酶的制的制备1 1、工、工业上大多采用微生物上大多采用微生物发酵法酵法来来获得大量的得大量的酶制制剂.2 2、分离、分离纯化化酶的方法:的方法:盐析法、析法、

24、有机溶有机溶剂沉淀法、吸附法。沉淀法、吸附法。165.三三、酶的分离的分离纯化化1选材:材:酶含量高的材料含量高的材料2破碎破碎细胞:胞:机械破壁,化学破壁机械破壁,化学破壁 酶破壁破壁 温温度破壁等度破壁等3抽提:抽提:缓冲液冲液4去核酸、去多糖去核酸、去多糖5纯化:化:提取蛋白提取蛋白质方法方法6保存:保存:低温干燥保存低温干燥保存酶的特殊性,在提的特殊性,在提纯过程中要注意程中要注意:v1全部操作在低温全部操作在低温04。v2在分离提在分离提纯过程中,不能程中,不能剧烈烈搅拌。拌。v3在提在提纯溶溶剂中加一些保中加一些保护剂,如少量,如少量EDTA、少量、少量-巯基乙醇。基乙醇。v4在分

25、离提在分离提纯过程中要不断程中要不断测定定酶活力和蛋活力和蛋白白质浓度,从而求得比活力,度,从而求得比活力,还要要计算算总活力。活力。166.四、酶的应用v1、固定化酶:将一种可溶性酶与不溶性的有机或无机基质结合,或者将其包埋到特殊的具有选择透过膜内来提高酶的稳定性,以便重复和持续利用。v2、固定化酶的性质:(1)酶的稳定性提高;(2)最适PH值改变;(3)酶的活性和催化底物有所变化;(4)最适温度有所提高;v3、固定化酶的作用:(1)酶固定化后,不易破损可以反复多次使用;(2)酶不易游离到产品中,产品易于纯化;(3)便于产业化、连续化、自动化。167.固定化固定化酶的制的制备 v 吸附法吸附

26、法 168.v包埋法包埋法 169.v偶偶联法法 170.五、同工五、同工酶 v同工同工酶(isoenzyme)是指催化的化学反是指催化的化学反应相相同,同,酶蛋白的分子蛋白的分子组成形式、理化性成形式、理化性质乃乃至免疫学性至免疫学性质不同的一不同的一组酶v这类酶存在于生物的同一种属或同一个体存在于生物的同一种属或同一个体的不同的不同组织、甚至同一、甚至同一组织或或细胞中。胞中。v如乳酸脱如乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH),具有多种分子),具有多种分子组成形式:成形式:LDH5(M4)、)、LDH4(M3H)、)、LDH3(M2H2)、)、LDH2(MH3)、

27、)、LDH1(H4)。)。171.172.同工同工酶也是研究代也是研究代谢调节、分子、分子遗传、生、生物物进化、个体化、个体发育、育、细胞分化和癌胞分化和癌变的有力的有力工具,在工具,在酶学、生物学、和医学中均学、生物学、和医学中均占有重占有重要地位要地位。173.后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用资料仅供参考,实际情况实际分析174.主要经营:课件设计,文档制作,网络软件设计、图文设计制作、发布广告等秉着以优质的服务对待每一位客户,做到让客户满意!致力于数据挖掘,合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面,打造全网一站式需求175.感感谢您的您的观看和下看和下载The user can demonstrate on a projector or computer,or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field176.

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