阿莫西林颗粒中有关物质高效液相色谱分析方法的建立_郑如程.pdf

安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）阿莫西林颗粒中有关物质高效液相色谱分析方法的建立郑如程1，田胜2，程正1，江跃2，张德兵2作者单位：1铜陵市食品药品检验中心，安徽 铜陵244061；2安徽安科恒益药业有限公司，安徽 铜陵244061基金项目：安徽省药品监督管理局2021年度科技创新项目（AHYJ-KJ-202121）摘要：目的 建立高效液相色谱法测定阿莫西林颗粒中的有关物质。方法 2021年6月至2022年2月，采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent Zorbax SB-C8（4.6 mm 250 mm，5 m）；流动相A为0.05 mol/L磷酸缓冲液（取0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液，用20%氢氧化钠溶液调节pH至5.5），流动相B为0.05 mol/L磷酸缓冲液（取0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液，用20%氢氧化钠溶液调节pH至4.5）-乙腈（84 16）；进行梯度洗脱；检测波长为230 nm；流速为2.0 mL/min。结果 建立了用于分析阿莫西林颗粒中有关物质的高效液相色谱方法，该方法下主峰与各杂质峰间分离良好，各杂质成分在各自线性范围内与峰面积线性关系良好（r0.999），专属性、重复性、精密度、稳定性、耐用性均符合要求。结论 该法专属性强、准确度和重复性好，可作为检测阿莫西林颗粒中有关物质的有效方法。关键词：阿莫西林；药物污染；有关物质；高效液相色谱；梯度洗脱Establishment of high performance liquid chromatography method for the determination of related substances in amoxicillin granulesZHENG Rucheng1,TIAN Sheng2,CHENG Zheng1,JIANG Yue2,ZHANG Debing2Author Affiliations:1Tongling Institutes for Food and Drug Control,Tongling,Anhui 244061,China;2Anhui Anke Hengyi Pharmaceutical Co.,Ltd,Tongling,Anhui 244061,ChinaAbstract：Objective To establish a high performance liquid chromatography method for the analysis of related substances in amoxicillin granules.Methods The high performance liquid chromatography method was performed on Agilent Zorbax SB-C8(4.6 mm 250 mm,5 m)column from June 2021 to February 2022;The mobile phase A was 0.05 mol/L phosphate buffer(0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution,pH adjusted to 5.5 with 20%sodium hydroxide solution),mobile phase B was 0.05 mol/L phosphate buffer(0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution,pH adjusted to 4.5 with 20%sodium hydroxide solution)-acetonitrile(84 16);gradient elution;the detected wavelength was 220 nm;the flow rate was 2.0 mL/min.Results A high performance liquid chromatography method was established for the analysis of related substances in amoxicillin granules.The impurities and main components were effectively separated,and the impurity components had a good linear relationship with the peak area in their respective linear range(r0.999).The specificity,repeatability,precision,stability and durability all met the requirements.Conclusion This method is suitable for determination of the related substances of Amoxicillin granules.Key words：Amoxicillin;Drug contamination;Related substance;High performance liquid chromatography(HPLC);Gradient elution阿莫西林（Amoxicillin）称羟氨苄青霉素，其为白色或类白色的结晶性粉末，稍有特异的气味和苦味，是第二代青霉素的主要品种，系广谱半合成抗生素，具有广谱抗菌作用，世界卫生组织（WHO）推荐本品作为首选的-内酰胺类口服抗生素，在口服抗生素中占有重要的位置1。本品临床上应用于革兰阴性菌、革兰阳性菌等所致的感染性疾病、呼吸系统疾病及泌尿系统疾病2-5。由于其高效、低毒，因此在临床上应用十分广泛，但其不良反应发生率居各类药物之首。为了减少不良反应的发生6-7，必须对其杂质进行控制。阿莫西林原料8-9、阿莫西林注射剂10-11、阿莫西林胶囊12-14中的杂质研究已有不少文献报道，但对阿莫西林颗粒15-16中杂质的研究相对较少。经检索各国药典，现行 中华人民共和国药典（ChP）2015年版和 2020年版中“阿莫西林颗粒”标准中未收录“有关物质”检查项17-18，国外药典中也未收载有阿莫西林颗粒剂，其相似剂型为“阿莫西药物分析引用本文：郑如程，田胜，程正，等.阿莫西林颗粒中有关物质高效液相色谱分析方法的建立 J.安徽医药，2023，27（7）：1324-1331.DOI：10.3969/j.issn.1009-6469.2023.07.011.1324安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）林口服混悬剂”，但均未控制有关物质，其中美国药典USP41“阿莫西林口服混悬剂”征求意见稿19中控制了“有关物质”检查项，但正式稿及美国药典USP4220中均未控制。本研究于2021年6月至2022年2月，结合原料药生产工艺，检索各国药典，阿莫西林目前已知的杂质共有17个（见表1）。其中杂质H与杂质P这两种杂质在原料合成工艺中不产生，阿莫西林颗粒制剂中将不再研究；杂质N为工艺杂质和副产物，是6-APA与杂质D的缩合物，杂质O为降解产物，是杂质D与阿莫西林的三聚合物，两者在聚合物测定中可予以控制，故按照其他单个杂质控制；对可以获得对照品的杂质 A、B、C、D、E、F、G、I、J、K、L、M、D-HPM这13种杂质在阿莫西林颗粒中进行了研究，对实验条件进行了优化，使阿莫西林颗粒中主成分与各杂质可实现良好分离；并进行相关的方法学验证。1仪器与试药SQP QUINTIX 224-1CN电子天平（德国赛多利斯集团），S210型pH计（瑞士梅特勒-托利多集团），LC-20A型高效液相色谱仪（二极管阵列检测器，日本岛津公司）。阿莫西林颗粒（A公司：批号S200301，S200302，S200303；L 公司：批号 1903A0，9420），阿莫西林对照品（中国食品药品检定研究院，批号 130409-201512，含量86.9%），阿莫西林工作对照品（A制药公司，批号190121034，含量87.1%），阿莫西林系统适用性对照品（中国食品药品检定研究院，批号130608-201804），杂质 A（中国食品药品检定研究院，批号 130595-201001，含量 100%），杂质 B（USP对照品，批号R081J0，含量100%），杂质C（USP对照品，批号R072H0，含量100%），杂质D（USP对照品，批号R051S0，含量100%），杂质E（美国CATO公司，批号 C4X-11486-1708，含量 95.6%），杂质 F（USP 对照品，批号 R074A0，含量 100%），杂质 G（USP 对照品，批号R019S0，含量100%），杂质I（中国食品药品检定研究院，批号 130435-201903，含量 99.9%），杂质J（美国CATO公司，批号161-12-6，含量90.1%），杂质K（美国CATO公司，批号C4X-114816-1812，含量 97.7%），杂质 L（加拿大 TRC 公司，批号 2-JPD-178-1，含量95%），杂质M（加拿大TRC公司，批号4-JPD-26-1，含量90.0%），D-HPM（美国CATO公司，批号166-12-23，含量98.7%）。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，试验用水由Milli-Q系统制备。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：Agilent Zorbax SB-C8 柱（4.6 mm250 mm，5 m）；鬼峰捕集小柱：Welch Ghost-Buster Column（4.6 mm50 mm，5 m）；流动相A为6.8 g/L磷酸二氢钾溶液（用20%氢氧化钠溶液调节pH至5.50.1）；流动相B为6.8 g/L磷酸二氢钾溶液（用20%氢氧化钠溶液调节pH至4.50.05）-乙腈（84 16）；按表 2 进行梯度洗脱程序；检测波长230 nm；柱温30；流速2.0 mL/min；低温进样器温度4；进样量20 L；溶剂为流动相A。2.2溶液配制供试品溶液：取A公司阿莫西林颗粒适量，精密称定，冷水中用流动相A溶解并定量稀释制成每1毫升中约含阿莫西林1.5 mg的溶液，滤过，取续滤液即得。对照溶液：精密量取供试品溶液 1 mL，置 100 表1阿莫西林各杂质汇总一览表序号123456化学名6-氨基青霉烷酸L-阿莫西林2，5，-二酮哌嗪-2-阿莫西林阿莫西林噻唑酸阿莫西林脱羧噻唑酸3-（4-羟基苯基）吡嗪-2-醇杂质代号阿莫西林杂质A阿莫西林杂质B阿莫西林杂质C阿莫西林杂质D（D1和D2为顺反异构体）阿莫西林杂质E（E1和E2为顺反异构体）阿莫西林杂质F序号789101112化学名D-（4-羟苯基）甘氨酰阿莫西林（2R）-2-（2，2-二甲基丙基）氨基-2-（4-羟基苯基）乙酸（2R）-2-氨基-2-（4-羟基苯基）乙酸阿莫西林闭环二聚体阿莫西林开环二聚体6-APA阿莫西林酰胺杂质代号阿莫西林杂质G阿莫西林杂质H阿莫西林杂质I阿莫西林杂质J阿莫西林杂质K阿莫西林杂质L序号1314151617化学名阿莫西林开环酸阿莫西林开环脱羧酸二聚体6-APA阿莫西林开环酸酰胺阿莫西林开环三聚体N-新戊酰基阿莫西林（R）-甲基-2-氨基-2-（4-羟苯基）乙酸盐酸盐杂质代号阿莫西林杂质M阿莫西林杂质N阿莫西林杂质O阿莫西林杂质PD-对羟基苯甲氨酸甲酯盐酸盐（简称D-HPM）1325安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）mL量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，即得。空白辅料溶液：按处方比例取空白辅料，同供试品溶液配制方法制备，即得。阿莫西林对照品贮备溶液：精密称取阿莫西林工作对照品，加溶剂溶解并定量稀释制成浓度约为0.5 g/L的贮备溶液。杂质贮备溶液：精密称取各有关杂质对照品，加溶剂溶解并定量稀释制成各杂质对照品浓度约为0.3 g/L的杂质贮备溶液。杂质单标溶液：各精密量取上述各杂质贮备溶液（杂质 D、E、J 贮备溶液为 1.0 mL，其余均为 0.5 mL），分别用溶剂定容至20 mL，作为杂质单标溶液。阿莫西林+杂质混合对照溶液：取阿莫西林颗粒约240 mg，精密称定，置20 mL量瓶中，加溶剂适量，冷水超声15 min，精密加入各杂质贮备溶液（加入杂质 D、E、J 贮备溶液为 1.0 mL，其余均为 0.5 mL），用溶剂定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.3系统适用性试验取阿莫西林系统适用性对照品适量，加流动相A溶解并稀释制成每l毫升中约含1.5 mg的溶液，作为系统适用性溶液1，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。取阿莫西林对照品与杂质E对照品适量，加流动相 A 溶解并稀释制成每 1 毫升中约含阿莫西林1.5 mg、杂质E约0.03 mg的混合溶液，作为系统适用性溶液2，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图2。由试验结果可知，阿莫西林主峰与各有关物质峰分离度良好，且杂质峰不干扰主峰与各有关物质峰定位。2.4专属性试验2.4.1辅料干扰试验取“2.2”项下供试品溶液和空白辅料溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，见图3，4。由试验结果可知：主峰与相邻杂质及各杂质间均达到基线分离，各杂质分离度符合要求；空白辅料出峰，但不干扰本品有关物质的测定。2.4.2杂质定位取“2.2”项下各杂质单标溶液和阿莫西林+杂质混合对照溶液，分别注入液相色谱仪，色谱图结果显示，各杂质间分离良好且峰行较好。结果详见表3，图5。2.4.3强制降解试验取供试品及供试品溶液，分别进行酸、碱、氧化、高温、光照、紫外破坏（强制降解条件见表4），取上述各破坏溶液及未破坏的样品溶液，除梯度洗脱时间延长为保证杂质峰出峰完全外，其余均按照“2.1”项下色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图610。由试验结果及色谱图可知：酸破坏的主要降解杂质为杂质D2；碱50015020010时间/min响应值/mAU30020401005060注：1杂质D1；2杂质D2；3阿莫西林；4杂质C；5杂质J。图1阿莫西林系统适用性溶液1色谱图2507510010时间/min响应值/mAU3002040505060注：1阿莫西林；2杂质E1；3杂质E2。图2阿莫西林系统适用性溶液2色谱图100304010时间/min响应值/mAU300204020505060注：1杂质D1；2杂质D2；3阿莫西林；4D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐；5杂质J。图3阿莫西林供试品溶液图谱2507510010时间/min响应值/mAU3002040505060图4阿莫西林颗粒空白辅料溶液图谱表2梯度洗脱程序时间/min05253040A/%100100702525B/%00307575时间/min42505160A/%00100100B/%100100001326安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）破坏的主要降解杂质为杂质D2与杂质C；氧化破坏的主要降解杂质为杂质D2与杂质B；高温液体破坏的主要降解杂质为杂质C；紫外液体破坏的主要降解杂质为杂质D1与杂质C；其余降解试验样品状态比较稳定，未降解出较大杂质；各个强制降解条件下产生的杂质与主峰均能有效分离；各强制降解试验中所得色谱图中主峰纯度均为1.00，符合验证要求。2.5检测限（LOD）、定量限（LOQ）、线性关系和校正因子测定取“2.2”项下各杂质贮备溶液及阿莫西林对照品贮备溶液，逐步稀释，配制成各杂质单标溶液浓度20%、60%、100%、140%、200%的线性溶2507510010时间/min响应值/mAU300204050506070注：1-阿莫西林。图6阿莫西林供试品溶液酸破坏试验图谱2507510010时间/min响应值/mAU300204050506070注：1阿莫西林。图7阿莫西林供试品溶液碱破坏试验图谱2507510010时间/min响应值/mAU300204050506070注：1阿莫西林。图8阿莫西林供试品溶液氧化破坏试验图谱2507510010时间/min响应值/mAU300204050506070注：1阿莫西林。图9阿莫西林供试品溶液高温液体破坏试验图谱表3杂质定位专属性试验结果组分杂质I杂质D1杂质D2杂质A杂质B阿莫西林D-HPM杂质E1杂质M杂质G杂质E2杂质C杂质K杂质F杂质J杂质L单标溶液tR/min1.4583.1824.1886.7129.42412.33721.66723.88726.33727.74030.59331.43133.12334.77235.540阿莫西林+杂质混合对照溶液tR/min1.4593.1654.1576.7129.37111.33012.15721.38023.49026.05527.36130.44831.22032.94034.66435.501分离度12.5504.88310.0027.2904.1321.82721.5534.8196.0062.9738.5542.9917.1957.5673.5522507510010时间/min响应值/mAU3002040505060注：1杂质I；2杂质D1；3杂质D2；4杂质A；5杂质B；6阿莫西林；7D-HPM；8杂质E1；9杂质M；10杂质G；11杂质E2；12杂质C；13杂质K；14杂质F；15杂质J；16杂质L。图5阿莫西林+杂质混合对照溶液色谱图表4阿莫西林供试品溶液强制降解试验条件方式未破坏酸破坏碱破坏氧化破坏高温液体破坏高温固体破坏光照液体破坏紫外液体破坏光照固体破坏紫外固体破坏强制降解条件不破坏供试品溶液加1 mol/L盐酸溶液1 mL，室温放置30 min，调中性供试品溶液加1 mol/L氢氧化钠溶液0.5 mL，室温放置3 min，调中性供试品溶液加15%双氧水1 mL，室温放置约6 min供试品溶液于80 水浴约30 min供试品于80 烘箱中放置约8 h供试品溶液于（4 500500）lx光照箱内照射约24 h供试品溶液于紫外灯下照射约24 h供试品于（4 500500）lx光照箱内照射约7 d供试品于紫外灯下照射约7 d1327安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积（A）对浓度（C：g/mL）进行线性回归，计算 LOD、LOQ和校正因子，结果见表5。2.6精密度测定取“2.5”项下 100%浓度的线性溶液，连续进样 6针，计算主峰面积和保留时间的RSD值。阿莫西林和各杂质的峰面积RSD值均小于2.0%，保留时间的RSD值均小于1.0%，表明方法的精密度良好。2.7稳定性试验取“2.2”项下各杂质贮备标溶液及阿莫西林对照品贮备溶液，配制成对照品稳定性试验溶液，于低温（4）放置12 h，分别在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h 和 12 h 时，取样检测，考察峰面积的RSD值。结果显示，在12 h内，阿莫西林主峰峰面积 RSD 为 0.5%，杂质 A 和杂质 C 峰面积 RSD 最小，均为 0.4%，杂质 B 峰面积 RSD 最大，为 2.0%。各杂质低温 4 放置 12 h 下，峰面积的 RSD 均未超过 2.0%，说明于低温 4 条件下放置 12 h 内稳定。取“2.2”项下空白辅料溶液和供试品溶液，于低温（4）放置8 h，分别在0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、6 h和8 h 时，取样检测。结果显示，供试品溶液于低温4 下放置4 h，杂质D变化量为0.024%，杂质J变化量 为 0.004%，其 他 最 大 单 个 杂 质 的 变 化 量 为0.006%，总杂质的变化量为0.022%，说明供试品溶液于低温4 下放置4 h内稳定。2.8重复性和中间精密度试验取同一批阿莫西林颗粒样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液 6份，取样检测，计算各杂质的变化量。结果显示，6次测定结果中，杂质D变化量为0.050%，杂质J变化量为0.011%，其余各杂质的变化量小于0.05%，总杂质变化量为0.056%，小于0.1%。2.9回收率试验取同一批阿莫西林颗粒，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别加入各杂质单标溶液浓度 50%、80%、100%、120%的杂质贮备溶液，每个含量平行配制三份，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率。各浓度下，杂质D平均回收率均在90%110%，杂质J和杂质E平均回收率均在92%105%，其余各杂质平均回收率均在90%108%。试验结果见表6。2.10耐用性试验在其他条件不变的情况下，分别微调检测波长（5 nm）、盐溶液pH（流动相A：pH0.2，流动相B：pH（0.05）、柱温（5）、流速（0.2 mL/min）及更换同型号同规格不同品牌色谱柱，测定本品有关物质，以分离度和各杂质的变化量考察方法的耐用性。在各耐用性色谱条件下，杂质混合溶液中各杂质均能达到基线分离且主峰与相邻峰的分离度均符合要求；供试品中单个杂质变化量均小于0.1%；总杂质变化量均小于0.2%；说明本法耐用性良好。2.11样品测定取3批次A公司生产的阿莫西林颗粒，同时取2批次L公司生产的阿莫西林颗粒作2507510010时间/min响应值/mAU300204050506070注：1阿莫西林。图10阿莫西林供试品溶液紫外液体破坏试验图谱表5阿莫西林及各杂质的标准曲线、LOD、LOQ与校正因子组分D-HPM杂质A杂质B杂质C杂质D杂质E阿莫西林杂质F杂质G杂质I杂质J杂质K杂质L杂质MLOD/ng（信噪比S/N3）3.008.605.803.203.009.605.202.0010.000.142.202.604.0020.00LOQ/ng（信噪比S/N10）6.0017.0011.406.406.0019.2010.404.0020.000.424.407.6012.4060.60线性方程A=21 961.1 C85.0A=3 023.6 C52.0A=10 717.0 C2 142.2A=13 386.5 C115.0A=10 321.9 C+294.1A=12 696.0 C881.9A=14 325.0 C+2 021.4A=20 440.9 C+328.5A=6 382.5 C239.7A=27 009.7 C+5 173.0A=11 741.5 C+625.8A=9 481.8 C329.6A=6 098.4 C+208.9A=5 783.6 C675.7r值1.000 01.000 00.999 91.000 01.000 01.000 00.999 91.000 00.999 80.999 91.000 01.000 01.000 00.999 6范围/（g/mL）0.3012.390.8515.220.5715.320.3215.070.3029.960.9628.770.5230.110.2015.101.0015.061.5015.320.2227.291.309.321.308.991.208.61校正因子0.64.61.31.11.41.10.72.40.51.21.62.52.5注：D-HPM为D-对羟基苯甲氨酸甲酯盐酸盐。1328安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）为参比制剂，按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，分别按自身对照法和外标法计算杂质含量，试验结果见表7，8。由表 7，8 的结果可知，分别采用主成分自身对照法加校正因子法和杂质对照品外标法计算，样品中的已知杂质、其他最大单个杂质及总杂质量均差异无统计学意义，校正因子法结果可靠。2.12检测波长、流速的选择取同一批阿莫西林颗粒，参照 USP41“阿莫西林口服混悬剂”征求意见稿中有关物质检查的色谱条件，分别对 210 nm、230 nm、254 nm 三个波长进行了考察，结果见表9。由试验结果可知，在 2.0 mL/min 流速下，230 nm 波长杂质的检出个数及杂质量均比 210 nm 和254 nm 波长要多，各杂质间分离度良好，符合要求，耐用性试验中也对流速也进行了考察，故检测波长选择 230 nm、流速选择 2.0 mL/min 较为合理，且与 USP41“阿莫西林口服混悬剂”征求意见稿检测波长一致。表8阿莫西林样品测定结果（杂质对照品外标法）/%来源A公司L公司批号S200301S200302S2003031903A09420杂质D（D1+D2）0.0780.0730.0670.1980.256杂质E（E1+E2）0.0630.059未检出0.1690.176杂质J0.0640.0590.0660.1850.147其他最大单杂0.0440.0460.0610.2750.325总杂0.2570.2570.2211.2481.336表6阿莫西林供试品回收率试验结果组分D-HPM 3.14杂质A杂质B杂质C杂质D杂质E杂质F加入量/g5.036.217.463.776.037.559.063.766.027.509.103.786.047.539.047.6112.1715.0318.227.2011.5214.3617.243.776.027.519.01测得量/g2.89，2.86，2.824.60，4.48，4.505.89，5.96，5.847.06，7.06，7.103.82，3.84，3.825.92，5.92，5.977.33，7.49，7.368.75，8.86，8.883.49，3.47，3.355.72，5.64，5.857.35，7.69，7.448.93，9.13，9.173.80，3.65，3.605.86，5.84，5.957.44，7.57，7.439.01，8.99，9.157.52，7.61，7.2712.12，12.36，12.3514.86，15.47，14.6719.58，17.70，16.807.33，7.50，7.4711.55，11.68，11.6114.57，14.76，14.5317.50，17.56，17.783.74，3.71，3.735.89，5.84，5.897.28，7.47，7.358.86，9.02，9.02回收率/%92.04，91.08，89.8191.45，89.07，89.4694.85，95.97，94.0494.64，94.64，95.17101.30，101.90，101.3098.18，98.18，99.0097.09，99.21，97.4896.58，97.79，98.0192.82，92.29，89.1095.02，93.69，97.1896.84，101.30，98.0298.13，100.30，100.80100.50，96.56，95.2497.02，96.69，98.5198.80，100.50，98.6799.67，99.45，101.2098.82，100.0，95.5399.59，101.60，109.7098.87，102.90，97.60107.50，97.15，92.21101.80，104.20，103.80100.30，101.40，100.80101.50，102.80，101.20101.50，101.90，103.1099.20，98.41，98.9497.84，97.01，97.8496.94，99.47，97.8798.34，100.10，100.00平均回收率/%92.798.896.398.6100.4102.098.5RSD/%2.71.84.01.96.01.21.1组分杂质G杂质I杂质J杂质K杂质L杂质M加入量/g3.776.047.539.043.796.077.519.016.7910.8613.6816.423.335.326.657.983.315.306.627.953.125.006.257.50测得量/g3.80，3.69，3.706.07，6.04，6.117.44，7.60，7.479.19，9.13，9.303.86，3.83，3.846.07，6.00，6.107.39，7.57，7.509.02，9.10，9.266.91，6.66，6.7310.60，10.50，10.6113.51，13.61，13.4616.31，16.32，16.623.18，3.04，3.085.31，5.48，5.446.91，6.81，6.908.13，8.22，8.063.22，3.24，3.235.04，5.09，4.986.42，6.43，6.377.63，7.50，7.493.18，3.31，3.105.23，5.29，5.276.52，6.27，6.587.83，7.82，7.58回收率/%100.80，97.88，98.14100.50，100.00，101.2098.80，100.90，99.20101.70，101.00，102.90101.80，101.10，101.30100.00，98.85，100.5098.40，100.80，99.87100.10，101.00，102.80101.80，98.09，99.1297.61，96.69，97.7098.76，99.49，98.3999.33，99.39，101.2095.82，91.34，92.5499.81，102.80，102.10103.70，102.20，103.70101.90，103.00，101.0097.28，97.89，97.5895.09，96.04，93.9696.98，97.13，96.2295.97，94.34，94.21101.90，106.10，99.36104.60，105.80，105.40104.30，100.30，105.30104.40，104.30，101.10平均回收率/%100.3100.599.0100.096.1103.6RSD/%1.51.31.55.01.52.3表7阿莫西林样品测定结果（主成分自身对照加校正因子法）/%来源A公司L公司批号S200301S200302S2003031903A09420杂质D（D1+D2）0.0750.0750.0680.1910.238杂质E（E1+E2）0.0640.061未检出0.1630.165杂质J0.0640.0600.0670.1780.137其他最大单杂0.0440.0470.0620.2650.303总杂0.2600.2640.2241.2011.2461329安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）3讨论3.1校正因子的确定由“2.5”项试验结果可知，杂质A、B、D、G、J、K、L、M的校正因子大于1.1，计算时需加校正因子；杂质F、杂质I、D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐的校正因子小于0.9，计算时采用不加校正因子，相当于严控；其中杂质A、B、G为原料引入的工艺杂质且样品中未检出，杂质K、L在强制降解试验中只在液体破坏下产生，未产生杂质M，且本品为固体，故在测定时不再单独控制这6个杂质，也不再加校正因子，按照其他单个杂质控制。因杂质D、E、J为本品的主要降解杂质，故在计算杂质含量时，需乘以相应的校正因子。其中，杂质D1校正因子为1.4、杂质D2校正因子为1.4、杂质E1校正因子为1.1、杂质E2校正因子为1.1、杂质J校正因子为1.2。其他已知杂质均按照其他单个杂质控制，并不再乘以校正因子。3.2系统适用性溶液的确定本法中所用阿莫西林系统适用性对照品购自中国食品药品检定研究院，未对具体成分及纯度作出说明，提供的标准色谱图中除标注了阿莫西林色谱峰外，仅标注了阿莫西林杂质C、D、J色谱峰。考虑到杂质D、E、J为本品的主要降解杂质，故在系统适用性试验中，使用阿莫西林系统适用性对照品配制系统适用性溶液1，使用阿莫西林对照品和杂质E对照品配制系统适用性溶液2，分别进行系统适用性试验。3.3杂质控制限度的确定现行 中华人民共和国药典（ChP）2015年版和2020年版中“阿莫西林颗粒”标准中未收录“有关物质”检查项，仅在原料药中对杂质的限度进行了规定。根据现行版 中华人民共和国药典（ChP）附录 21 中有关的指导原则和国际人用药品注册技术协调会（ICH）Q3B（R2）中对杂质限度的规定，同时结合本品的稳定性试验数据结果，可将本品有关物质限度定为：杂质D（D1+D2）2.0%；杂质E（E1+E2）2.0%；杂质J1.0%；其他单个杂质0.5%；总杂质5.0%；小于0.01%的单个杂质忽略不计。4结论阿莫西林颗粒目前仅被中国药典收录，国外药典中的相似剂型为阿莫西林口服混悬剂，被 BP、USP收录；A公司的阿莫西林颗粒现执行标准为 中华人民共和国药典（ChP）2020年版二部“阿莫西林颗粒”。本研究在各国药典的基础上，同时按照 化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则 化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则化学药物杂质研究技术指导原则 以及现行版 中华人民共和国药典（ChP）附录中有关的指导原则，结合本品的制剂特性，对现执行标准进行了优化提高，提出了有关物质的检测方法，为阿莫西林颗粒中杂质谱分析和药品生产过程中的质量控制提供了重要依据。参考文献1 孟昭伟.异辛醇中酶法合成阿莫西林的工艺研究 D.北京：北京化工大学，2009.2 王秀琴.抗幽门螺杆菌治疗对反流性食管炎复发率的影响 J.临床研究，2019，27（3）：84-85.3 李绍梅.观察奥美拉唑联合阿莫西林治疗胃炎并胃溃疡的效果 J.中国医药指南，2020，18（7）：163.4 樊冬杰，黄玉伟.铝碳酸镁联合四联疗法治疗幽门螺杆菌感染并十二指肠溃疡120例临床观察 J.安徽医药，2020，24（2），393-397.5 孙蕾，于肖洋，韩淑娟.阿莫西林联合甲硝唑治疗种植体周围炎临床效果及对血清炎性因子的影响 J.中国基层医药，2021，28（3）：421-425.6 于海晴.阿莫西林胶囊的不良反应病例回顾性分析 J.中国处方药，2020，18（1）：60-61.7 赵荣荣.对应用阿莫西林引起的不良反应情况及相关药学进行分析 J.名医，2019（10）：251.8 雷勇胜，宋丽明，郝英魁，等.阿莫西林原料药中有关物质的UPLC-TOF-MS/MS 鉴定 J.现代药物与临床，2015，30（1）：24-27.9 李永红，周方方，付路平，等.RP-HPLC法同时测定酶法合成阿莫西林工艺中的原料、中间体和产物的含量 J.郑州大学学报（医学版），2016，51（4）：455-458.10王会.国产注射用阿莫西林钠中主要杂质的分析 J.民营科技，2018（11）：71.11刘亚妮，周晓溪，姚羽，等.注射用阿莫西林钠/氟氯西林钠质量评价 J.中国抗生素杂志，2020，45（3）：212-217.12王玮，邓淑渊，李翠芬，等.阿莫西林胶囊有关物质的HPLC法测定 J.中国医药工业杂志，2019，50（12）：1492-1497.13王娜，李园园，周东东，等.高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊中的有关物质 J.中南药学，2020，18（6）：1013-1016.14王小明，蒋婷奇，谭跃浪，等.阿莫西林胶囊有关物质测定方法研究 J.化工生产与技术，2021，27（5）：42-46.15洪建文，李趣嫦，王彦蝶.HPLC法测定阿莫西林颗粒剂的含量及有关物质 J.广东药学院学报，2009，25（1）：42-45.16马萍，程玉宝，王德