红芪多糖介导STAT3通路...卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸_蒋鸿晶.pdf

免疫学杂志2023年3月第39卷第3期IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol.39No.3 Mar.2023 论著 文章编号1000-8861（2023）03-0233-08；DOI10.13431/ki.immunol.j.20230030红芪多糖介导STAT3通路抑制卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸蒋鸿晶，仲国庆，张洋*摘要 目的 探讨红芪多糖（HPS）介导信号转导子与转录激活子3（STAT3）通路抑制卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸的作用。方法 取40只Balb/c小鼠通过皮下注射卵巢癌SKOV3细胞建立卵巢癌小鼠模型，将建模成功的小鼠随机分为模型组、米非司酮（MIF）组、HPS组、HPS+MIF联合组。HPS组灌胃给予HPS（200 mgkg-1d-1），MIF组灌胃给予MIF（40 mgkg-1d-1），HPS+MIF联合组灌胃给予HPS（200 mgkg-1d-1）和MIF（40 mgkg-1d-1），模型组灌胃给予等量无菌生理盐水，连续干预14 d。观察记录各组小鼠瘤体积、瘤质量并计算抑瘤率；酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测小鼠外周血白介素-2（IL-2）、白介素-10（IL-10）、转化生长因子-1（TGF-1）水平；流式细胞术检测各组小鼠肿瘤组织中CD4+、CD4+CD25+叉头框蛋白P3+（Foxp3+）调节性T细胞（Treg）水平；实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测各组小鼠肿瘤组织STAT3、程序性死亡配体-1（PD-L1）、程序性死亡受体1（PD-1）信使核糖核糖酸（mRNA）表达；蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1蛋白表达。结果 与模型组比，MIF组、HPS组、HPS+MIF联合组小鼠瘤体积和瘤质量、外周血IL-2、IL-10、TGF-1水平以及肿瘤组织CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平降低，肿瘤组织中CD4+细胞水平升高，差异均有统计学意义（P0.05）；与MIF组和HPS组比，HPS+MIF联合组小鼠瘤体积和瘤质量、外周血IL-2、IL-10、TGF-1水平以及肿瘤组织CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平降低，肿瘤组织中CD4+细胞水平升高，差异均有统计学意义（P0.05）。与模型组比，MIF组、HPS组、HPS+MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA及蛋白表达降低，差异均有统计学意义（P0.05）；与MIF组和HPS组比，HPS+MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA及蛋白表达降低，差异均有统计学意义（P0.05）。结论 HPS对卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸有一定抑制作用，推测可能是通过介导STAT3信号通路抑制STAT3、PD-L1、PD-1的表达实现上述作用的。关键词 红芪多糖；信号转导子与转录激活子3；肿瘤细胞；免疫逃逸中图分类号 R737.31文献标识码 AHedysarum polysaccharide mediates the STAT3 pathway to inhibitthe immune escape of tumor cells in ovarian cancer miceJIANG Hongjing1,ZHONG Guoqing2,ZHANG Yang1,*1.Division 1 of Gynaecology Department,Tengzhou Central Peoples Hospital Affiliated to Jining Medical College,Tengzhou 277599,China;2.Department of Obstetrics,Jining First People s Hospital,Jining 272000,China*Corresponding Author:ZHANG Yang,E-mail:Abstract This study was performed to investigate the effect of hedysarum polysaccharide(HPS)-mediatedsignal transducer and activator of transcription 3(STAT3)pathway in inhibiting the immune escape of tumor cells inovarian cancer mice.A mouse model of ovarian cancer was established by subcutaneous injection of ovarian cancerSKOV3 cells in 40 Balb/c mice,and the mice that were successfully modeled were randomly divided into modelgroup,mifepristone(MIF)group,HPS group,HPS+MIF joint group.The tumor volume and tumor mass of the mice ineach group were observed and recorded,and the tumor inhibition rate was calculated.The levels of interleukin-2(IL-2),IL-10 and transforming growth factor-1(TGF-1)in peripheral blood of mice were detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Flow cytometrywas used to detect the levels of CD4+,CD4+CD25+forkhead box protein P3+(Foxp3+)regulatory T cells(Treg)in tumor tissues of mice in each group.Theexpression of STAT3,programmed death ligand-1(PD-基金项目：济宁医学院院级科研项目（JY2017FS036）作者单位：277599滕州，济宁医学院附属滕州市中心人民医院妇一科（蒋鸿晶，张 洋）；272000，济宁市第一人民医院产科（仲国庆）*通信作者：张洋，E-mail：233免疫学杂志2023年3月第39卷第3期IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol.39No.3 Mar.2023卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，其死亡率位居妇科恶性肿瘤之首。因卵巢癌发病隐匿，且缺乏有效的筛查诊断方法，多数患者确诊时已为晚期，5年生存率仅在2030左右1。近年来，卵巢癌在外科治疗和药物化疗方面取得了重大进展，但患者复发率和死亡率仍居高不下，因此，寻求更加有效的治疗手段对提高卵巢癌患者的生存率有重要意义。有研究显示2，卵巢癌肿瘤细胞可通过调节免疫细胞比例，分泌白介素-2（IL-2）、白介素-10（IL-10）、转化生长因子-1（TGF-1）多种免疫抑制因子，抑制机体抗肿瘤免疫应答反应，从而使肿瘤细胞逃避机体免疫监视在体内生长增殖，促进肿瘤的发生发展。信号转导子与转录激活子3（STAT3）是STAT家族的主要成员之一，可通过上调上述免疫抑制因子（IL-2、IL-10、TGF-1）的表达，促进肿瘤的发展和转移3。米非司酮（MIF）作为一种孕激素受体拮抗剂，多用于终止早、中期妊娠及紧急避孕。近年来发现MIF在包括卵巢癌在内的多种恶性肿瘤具有抗肿瘤活性4-5，因此，本研究选取MIF作为阳性对照药物以排除假阴性结果。红芪多糖（HPS）是中国传统中药红芪的主要活性成分，具有抗氧化、抗肿瘤、调节免疫活性等作用6。李力等7报道，HPS可以有效促进卵巢癌SKOV3细胞凋亡，并降低细胞增殖和迁移能力，但有关HPS抑制肿瘤细胞免疫逃逸的作用尚未见相关报道。本研究通过构建卵巢癌小鼠模型，探究HPS介导STAT3通路抑制卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸的可能性。1材料与方法1.1动物及细胞40只46周龄SPF级Balb/c雌性小鼠，体质量（23.652.27）g，购自浙江普康生物技术股份有限公司 许可证号 SCXK（浙）2019-0032；卵巢癌SKOV3细胞（购自中国科学院细胞库，货号CRKL-0215）。1.2药物与试剂MIF购自美国SIGMA公司（货号M8046-100MG）；HPS（纯度90%）购自四川省维克奇生物科技有限公司，经青岛科标检测研究院有限公司检验合格；白介素-2（IL-2）、白介素-10（IL-10）、转化生长因子-1（TGF-1）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒购自美国Cygnus公司（货号F550、F257、F514）；异硫氰酸荧光素（FITC）、碘化丙啶（PI）购自上海联迈生物工程有限公司（货号 LM-046、LM-022）；聚合酶链反应（PCR）荧光定量试剂盒购自上海联迈生物工程有限公司（货号LM-90408）；信号转导子与转录激活子3（STAT3）、程序性死亡配体-1（PD-L1）、程序性死亡受体1（PD-1）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）兔抗鼠单克隆抗体购自美国 Invitrogen 公 司（货 号 PA3-031A、PA1-1110、MA1-980、PA1-830）；STAT3、PD-L1、PD-1、GAPDHL1)and programmed death receptor 1(PD-1)messenger ribonucleic acid(mRNA)in mouse tumor tissue.Westernblot was used to detect the expression of STAT3,PD-L1,PD-1 proteins in mouse of each group.Compared with themodel group,the tumor volume and tumor mass,the levels of IL-2,IL-10,TGF-1 in peripheral blood,and thelevels of CD4+CD25+Foxp3+Treg cells in tumor tissue of mice in MIF group,HPS group,and HPS+MIF combinationgroup decreased,and the level of CD4+cells in tumor tissue increased,the differences were statistically significant(P0.05).Compared with the MIF group and the HPS group,the tumor volume and tumor mass,the levels of IL-2,IL-10,TGF-1 in peripheral blood and the levels of CD4+CD25+Foxp3+Treg cells in the tumor tissue of the mice in theHPS+MIF combination group decreased,the level of CD4+cells in tumor tissues increased(all P0.05).Comparedwith the model group,the mRNA and protein expressions of STAT3,PD-L1 and PD-1 in the tumor tissues of themice in the MIF group,HPS group,and HPS+MIF combination group decreased(P0.05).Compared with MIF groupand HPS group,the mRNA and protein expressions of STAT3,PD-L1,PD-1 in tumor tissues of HPS+MIFcombination group decreased(P0.05).In conclusion,HPS has certain inhibitory effect on the immune escape oftumor cells in ovarian cancer mice,which is presumed to be achieved by mediating the STAT3 signaling pathwayand inhibiting the expression of STAT3,PD-L1,and PD-1.Key words Hedysarum polysaccharide;Signal transducer and activator of transcription 3;Tumor cells;Immune escape234免疫学杂志2023年3月第39卷第3期IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol.39No.3 Mar.2023山羊抗兔多克隆抗体购自美国Invitrogen公司（货号PA5-11393、PA5-27188、MA5-17096、701142）。1.3实验器材TGL-16A型台式高速离心机购自常州迈科诺仪器有限公司；Forma 88000型超低温冰箱购自美国Thermo Fisher公司；FA2204型电子分析天平购自上海衡平仪器仪表有限公司；SuPerMax3100型多功能酶标仪购自上海闪谱生物科技有限公司；NovoCyte 型流式细胞仪购自美国 AgilentTechnologies公司；CG-05型PCR仪购自力新仪器上海有限公司；DT-MINIE-135型电泳仪购自德诺杰亿（北京）生物科技有限公司；FluorChem E型凝胶成像系统购自美国ProteinSimple公司。1.4建模、分组与干预培养卵巢癌SKOV3细胞至对数生长期，制成2107/ml的细胞悬液，经皮下接种至40只Balb/c小鼠肩胛背部（0.2 ml/只）构建卵巢癌小鼠模型，待接种部位出现长径约5 mm7 mm的皮下结节提示建模成功8，将建模成功的小鼠随机分为模型组（10 只）、MIF 组（10 只）、HPS 组（10 只）、HPS+MIF 联合组（10 只）。HPS 组灌胃给予 HPS（200 mgkg-1d-1），MIF组灌胃给予MIF（40 mgkg-1d-1），HPS+MIF 联合组灌胃给予 HPS（200 mgkg-1d-1）和MIF（40 mgkg-1d-1），模型组灌胃给予等量无菌生理盐水，连续干预14 d。1.5观察记录各组小鼠肿瘤生长情况给药干预前后分别测量肿瘤的长径和短径，计算肿瘤体积（V）=长径短径2/2。给药干预结束后，经腹腔注射10%的水合氯醛麻醉小鼠，取外周血，3 000 r/min（离心半径10 cm）离心10 min收集血清，-80 保存备用。开腹并取出肿瘤组织称质量，计算抑瘤率=（1-实验组小鼠瘤质量/模型组小鼠瘤质量）100%。1.6HE染色肿瘤取出后置于固定液中固定后，脱水透明，浸蜡包埋，切片机切片（厚度6 m），45 恒温烘箱中烘干，脱蜡，苏木素染3min，流水冲洗，伊红染色2min，脱水透明，中性树胶封片，显微镜观察并拍照。1.7ELISA法检测小鼠外周血IL-2、IL-10、TGF-1水平取各组小鼠外周血血清，严格按照ELISA检测试剂盒说明书操作步骤，在多功能酶标仪上分别测定各组小鼠外周血IL-2、IL-10、TGF-1水平。1.8流式细胞术检测各组小鼠肿瘤组织中CD4+、CD4+CD25+叉头框蛋白P3+（Foxp3+）调节性T细胞（Treg）的水平分别取各组小鼠肿瘤组织，剪碎后加入胶原酶消化2 h，经200目细胞筛过滤后收集滤液，用磷酸盐缓冲液（PBS）重悬后加入淋巴细胞分离液，收集沉淀，再次经PBS重悬即得淋巴细胞。向淋巴细胞中加入经FITC/PI标记的CD4抗体、CD25抗体、Foxp3抗体，室温下避光孵育30 min，加入500 l红细胞裂解液避光孵育 10 min，离心去上清。经PBS冲洗重悬后，流式细胞仪上样测定各组小鼠肿瘤组织中CD4+、CD4+CD25+Foxp3+Treg的水平。1.9实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测各组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA表达分别取各组小鼠肿瘤组织，研磨匀浆后加入TRIzol试剂提取总RNA，反转录合成互补脱氧核糖核酸（cDNA），以cDNA为模板按荧光定量试剂盒说明书操作步骤进行RT-qPCR。引物均由上海赛百盛基因技术有限公司 设 计 合 成，其 中 STAT3 上 游 引 物 5-TATTCGGCTAGTACGTCC-3，下 游 引 物 5-CCATGCCTAGCTGCTA-3，产物长度106 bp；PD-L1上游引物5-GAGCCTAGCGATTGACT-3，下游引物5-GTTGCAGTAACACC-3，产物长度155 bp；PD-1上游引物5-ACCACGTTGGGCA-3，下游引物5-TAACCGTACGATCGG-3，产物长度189 bp；GAPDH上游引物5-GCGTCGTACGATAA-3，下游引物5-CCATGATCAGTCGTTAC-3，产物长度 234 bp。反应参数：预变性 95 3 min，变性 95 30 s，退火60 30s，延伸72 30 s，共40个循环。以GAPDH为内参，采用2-Ct法计算各基因mRNA相对表达量。1.10蛋白质免疫印迹法检测各组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1蛋白表达分别取各组小鼠肿瘤组织，研磨匀浆后加入细胞裂解液提取组织总蛋白，Bradford法进行蛋白定量，十二烷基硫酸钠-聚丙烯凝胶酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳分离蛋白，湿转法转膜，封闭液室温封闭2 h，加一抗4 孵育过夜，TBST洗膜3次，加二抗室温孵育1 h，TBST洗膜3次，显影曝光，Biosens 645型凝胶成像系统成像，Graphpad软件分析各蛋白灰度值。1.11统计学分析数据经SPSS22.0软件进行统计学分析，计量资料以均数标准差表示，组间比较采用单因素方差分析和SNK-q检验，P0.05认为差异有统计学意义。2结果2.1小鼠肿瘤生长情况与模型组比，MIF组、HPS235免疫学杂志2023年3月第39卷第3期IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol.39No.3 Mar.2023组、HPS+MIF联合组小鼠瘤体积降低，差异均有统计学意义（P0.05）；与MIF组和HPS组比，HPS+MIF联合组小鼠瘤体积降低，差异均有统计学意义（P0.05），见图1，表1。与模型组比，MIF组、HPS组、HPS+MIF联合组小鼠瘤质量降低，差异均有统计学意义（P0.05）；与MIF组和HPS组比，HPS+MIF联合组小鼠瘤质量降低，抑瘤率升高，差异均有统计学意义（P0.05），见表2。2.2小鼠外周血 IL-2、IL-10、TGF-1 水平与模型组比，MIF组、HPS组、HPS+MIF联合组小鼠外周血IL-2、IL-10、TGF-1水平降低，差异均有统计学意义（P0.05）；与MIF组和HPS组比，HPS+MIF联合组小鼠外周血IL-2、IL-10、TGF-1水平降低，差异均有统计学意义（P0.05），见表3。2.3小鼠肿瘤组织 CD4+、CD4+CD25+Foxp3+Treg水平与模型组比，MIF组、HPS组、HPS+MIF联合组小鼠肿瘤组织 CD4+细胞水平升高，CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平降低，差异均有统计学意义图1荷瘤小鼠及其肿瘤组织HE染色（100）Fig 1 Tumor-bearing mice and H&E staining of the tumor tissues（100）表1小鼠瘤体积变化比较Tab 1Comparison of tumor volume changes in mice of different groupsGroupsModel groupMIF groupHPS groupHPS+MIF joint groupF valueP valuen10101010Tumor volume（mm3）Before administration2258.34205.292267.15189.30a2308.31211.06a2326.59196.42abc0.2650.85014 days after administration2313.56214.711162.43152.58a1084.89147.33a633.9460.27abc216.2320.001a)P0.05,compared with the Model group;b)P0.05,compared with the MIF group;c)P0.05,compared with the HPS group.表2小鼠瘤质量和抑瘤率比较Tab 2Comparison of tumor mass and tumor inhibition rate in mice of different groupsGroupsModel groupMIF groupHPS groupHPS+MIF joint groupF valueP valuen10101010Tumor mass（g）4.250.672.260.35a2.190.33a1.450.21abc79.3870.001Tumor inhibition rate（%）46.823.1448.473.2265.885.46bc66.8580.001a)P0.05,compared with the Model group;b)P0.05,compared with the MIF group;c)P0.05,compared with the HPS group.236免疫学杂志2023年3月第39卷第3期IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol.39No.3 Mar.2023（P0.05）；与MIF组和HPS组比，HPS+MIF联合组小鼠肿瘤组织CD4+细胞水平升高，CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平降低，差异均有统计学意义（P0.05），见表4。2.4小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1mRNA表达与模型组比，MIF组、HPS组、HPS+MIF联合组小鼠肿瘤组织 STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA 表达降低，差异均有统计学意义（P0.05）；与MIF组和HPS 组比，HPS+MIF 联合组小鼠肿瘤组织 STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA表达降低，差异均有统计学意义（P0.05），见表5。2.5小鼠肿瘤组织 STAT3、PD-L1、PD-1 蛋白表达与模型组比，MIF组、HPS组、HPS+MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1蛋白表达降低，差异均有统计学意义（P0.05）；与MIF组和HPS组比，HPS+MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1蛋白表达降低，差异均有统计学意义（P0.05），见图2，表6。3讨论卵巢癌的具体发病机制尚不十分明确，目前认表3小鼠外周血IL-2、IL-10和TGF-1水平Tab 3Then levels of IL-2,IL-10 and TGF-1 in peripheral blood of miceGroupsModel groupMIF groupHPS groupHPS+MIF joint groupF valueP valuen10101010IL-2（pg/ml）37.665.1526.384.20a25.494.24a16.623.07abc41.5830.001IL-10（pg/ml）151.4518.98124.1616.26a120.5116.09a96.5913.67abc18.8630.001TGF-1（g/ml）42.265.3730.194.65a28.774.42a21.343.68abc35.9460.001a)P0.05,compared with the Model group;b)P0.05,compared with the MIF group;c)P0.05,compared with the HPS group.表4小鼠肿瘤组织CD4+、CD4+CD25+Foxp3+Treg水平Tab 4The levels of CD4+,CD4+CD25+Foxp3+Treg in mouse tumor tissueGroupsModel groupMIF groupHPS groupHPS+MIF joint groupF valueP valuen10101010CD4+31.344.5544.126.89a42.836.68a60.277.26abc34.2170.001CD4+CD25+Foxp3+Treg3.280.512.500.40a2.570.43a1.360.22abc38.6060.001a)P0.05,compared with the Model group;b)P0.05,compared with the MIF group;c)P0.05,compared with the HPS group.表5小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA表达Tab 5The expression of STAT3,PD-L1,PD-1 mRNA in mouse tumor tissueGroupsModel groupMIF groupHPS groupHPS+MIF joint groupF valueP valuen10101010STAT31.250.210.830.15a0.840.16a0.420.07abc47.3050.001PD-L11.360.250.780.14a0.750.13a0.470.08abc53.0040.001PD-10.840.150.620.11a0.580.10a0.340.06abc34.8270.001a)P0.05,compared with the Model group;b)P0.05,compared with the MIF group;c)P0.05,compared with the HPS group.237免疫学杂志2023年3月第39卷第3期IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol.39No.3 Mar.2023为可能与遗传、生育情况、内分泌异常、微生物感染等有一定关联9。卵巢癌的现行治疗方案是手术辅以化放疗及其他治疗（免疫治疗、分子靶向治疗），虽然近年来治疗方案在不断的更新和改进，但晚期患者的5年生存率仍不足30%10。因此，研究卵巢癌的发生发展机制并寻求新的治疗手段，对卵巢癌的治疗和预后改善有重要意义。HPS作为中药红芪的主要提取物具有多种药理学作用，其中免疫调节作用应用较为广泛。研究证实11，HPS能通过促进免疫调节发挥抗肿瘤作用，但其在免疫逃逸中是否同样发挥作用尚不可知，因此，本研究选取HPS作为研究对象探究其对卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸的作用及其机制。免疫逃逸是恶性肿瘤形成的重要因素之一，是肿瘤细胞逃避免疫系统识别和攻击，在体内生存和增殖的重要途径12。大量研究发现13，Treg细胞在肿瘤免疫逃逸中起重要作用，其中CD4、CD25是Treg细胞的表面标志物，而Foxp3是其胞核标志物。有报道显示14，肿瘤细胞可通过分泌IL-2、TGF-1等免疫抑制因子诱导CD4+CD25-初始T细胞转化为CD4+CD25+细胞并促进FoxP3表达，使其具备CD4+CD25+Treg细胞的特性（即CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞）。CD4+CD25+Treg是一种具有免疫抑制功能的T细胞亚群，在抗肿瘤免疫应答反应中发挥抑制作用，可通过抑制CD4+免疫细胞活化和增殖介导肿瘤细胞免疫逃逸，促进肿瘤的发生发展15。在卵巢癌16、乳腺癌17、结直肠癌18等多种恶性肿瘤患者的外周血或肿瘤组织中Treg细胞水平均明显增加。本研究中，经MIF和HPS干预后，卵巢癌模型小鼠瘤体积和质量均明显降低，抑瘤率升高，且HPS+MIF联合组对小鼠肿瘤生长的抑制作用更加显著，提示HPS有抑制卵巢癌小鼠肿瘤生长的作用。另本研究中HPS+MIF联合组可明显降低肿瘤组织外周血 IL-2、IL-10、TGF-1 水平及肿瘤组织 CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞水平，提高肿瘤组织CD4+细胞水平，提示HPS可能是通过调节免疫细胞比例降低免疫抑制因子分泌水平，增强机体抗肿瘤免疫应答反应，从而减少肿瘤细胞免疫逃逸，抑制卵巢癌小鼠肿瘤生长。田河等19研究显示，HPS可以提高膀胱癌大鼠血清中IL-2水平以增强机体的免疫功能，进而抑制肿瘤生长发挥抗肿瘤作用，本研究结果与上述研究相一致。STAT3通路是多个致癌性信号通路的交汇点，图2小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1和PD-1蛋白表达Fig 2The expression of STAT3,PD-L1 and PD-1 proteins in mouse tumor tissue表6小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1和PD-1蛋白表达Tab 6The expression of STAT3,PD-L1 and PD-1 proteins in mouse tumor tissueGroupsModel groupMIF groupHPS groupHPS+MIF joint groupF valueP valuen10101010STAT30.670.120.540.09a0.500.09a0.380.06abc16.7150.001PD-L11.140.200.700.13a0.660.12a0.410.07abc48.3420.001PD-10.790.130.440.08a0.480.09a0.320.05abc47.3060.001a)P0.05,compared with the Model group;b)P0.05,compared with the MIF group;c)P0.05,compared with the HPS group.238免疫学杂志2023年3月第39卷第3期IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol.39No.3 Mar.2023在多种肿瘤细胞中过度激活，与肿瘤的发生发展和转移有密切关系。近几年研究表明20，肿瘤细胞内STAT3的持续性激活可增加肿瘤组织Treg细胞数量，上调IL-2、IL-10、TGF-1等免疫抑制因子的表达促进肿瘤的免疫逃逸，进而诱导肿瘤的发生发展。有报道指出21免疫检查点在肿瘤免疫逃逸中发挥重要的作用，以免疫检查点分子PD-1及其配体PD-L1为靶点的抑制剂已陆续应用到多种肿瘤的治疗当中。PD-L1又称B7-H1，是B7超家族成员之一，可作为PD-1的配体负性调节免疫应答，下调淋巴细胞的免疫功能，常高表达于肿瘤细胞表面22。PD-1/PD-L1的高表达是肿瘤细胞的常见免疫逃逸机制，并预示着肿瘤治疗的预后不良23。本研究中，与模型组比，MIF组、HPS组、HPS+MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA及蛋白表达降低，且HPS+MIF联合组对小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA及蛋白表达的抑制作用更加显著，提示HPS可能是通过抑制STAT3信号通路降低其下游免疫检查点PD-1及其配体PD-L1的表达抑制肿瘤细胞的免疫逃逸。Bu等24发现，STAT3可通过上调头颈鳞状细胞癌中的PD-1/PD-L1的表达诱导免疫抑制，本研究结果与上述研究相一致。综上所述，HPS对卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸有一定抑制作用，推测可能是通过介导STAT3信号通路抑制STAT3、PD-L1、PD-1的表达实现上述作用的。本研究初步阐释了HPS对卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸的抑制作用及机制，为治疗卵巢癌药物的研发提供了实验依据，但其临床应用效果仍有待进一步的研究。【参考文献】1Lee H,Kim JW,Lee DS,et al.Combined poziotinib withmanidipine treatment suppresses ovarian cancer stem-cellproliferationandstemnessJ.IntJMolSci,2020,21(19):7379.2Ke X,Shen L.Targeting cytokines secreted by CD4+CD25highCD127lowregulatory T cells inhibits ovarian cancerprogressionJ.Scand J Immunol,2019,89(2):e12736.3Mo XT,Leung TH,Tang HW,et al.CD109 mediatestumorigenicity and cancer aggressiveness via regulation ofEGFR and STAT3 signalling in cervical squamous cellcarcinomaJ.Br J Cancer,2020,123(5):833-843.4Shang L,Wang Y,Lyu Y.Clinical effect of mifepristone onpatients with ovarian cancer in pregnancyJ.Pak J PharmSci,2019,32(1):421-426.5Liu R,Chen H,Zhao P,et al.Mifepristone derivative FZU-00,003 suppresses triple-negative breast cancer cellgrowth partially via miR-153-KLF5 axisJ.Int J Biol Sci,2020,16(4):611-619.6YangX,XueZ,FangY,etal.Structure-immunomodulatory activity relationships of hedysarumpolysaccharides extracted by a method involving a complexenzyme combined with ultrasonicationJ.Food Funct,2019,10(2):1146-1158.7李 力,郭祥翠,王倩青,等.红芪多糖对卵巢癌SKOV3细胞凋亡、生长和运动能力的影响J.天津医药,2021,49(5):455-459.8Zhou J,Jiang YY,Chen H,et al.Tanshinone I attenuates themalignantbiologicalpropertiesofovariancancerbyinducingapoptosis and autophagy via the inactivation of PI3K/AKT/mTOR pathwayJ.Cell Prolif,2020,53(2):e12739.9Krlkov M,Lagan AS,Ghezzi F,et al.Endometriosisand risk of ovarian cancer:What do we know?J.ArchGynecol Obstet,2020,301(