肺腺癌转移相关转录本1、F...与患者临床分期和预后的关系_韩晓刚.pdf

癌症进展2023 年 2 月第 21 卷第 3 期ONCOLOGY PROGRESS,Feb 2023 V ol.21,No.3*论著*肺腺癌转移相关转录本肺腺癌转移相关转录本1 1、FasFas相关死亡结构域蛋白相关死亡结构域蛋白、雌激素相关雌激素相关受体受体 在乳腺癌中的表达及与患者临床分期和预后的关系在乳腺癌中的表达及与患者临床分期和预后的关系韩晓刚，孟庆杰，刘向华，印玉龙，赵昕辉，张浩萌，钮昊祯，李梦斐，吕勇刚#西北大学附属医院 西安市第三医院甲乳外科，西安 7100180摘要摘要：目的目的探讨肺腺癌转移相关转录本1（MALAT1）、Fas相关死亡结构域蛋白（FADD）、雌激素相关受体（ERR）在乳腺癌中的表达及与患者临床分期和预后的关系。方法方法选取122例乳腺癌患者，取其乳腺癌组织及相应癌旁组织，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测MALAT1的相对表达量，免疫组化法检测FADD、ERR蛋白的表达情况。比较不同临床分期及预后乳腺癌患者乳腺癌组织中MALAT1、FADD、ERR的表达情况。绘制受试者工作特征（ROC）曲线，计算曲线下面积（AUC），评估MALAT1、FADD、ERR单独及联合检测对乳腺癌患者预后的预测价值。结果结果乳腺癌组织中 MALAT1 的相对表达量、ERR阳性表达率均明显高于癌旁组织（P0.01），FADD阳性表达率明显低于癌旁组织（P0.01）。期乳腺癌患者乳腺癌组织中MALAT1的相对表达量、ERR阳性表达率均明显高于期患者（P0.01），FADD 阳性表达率明显低于期患者（P0.01）。随访 1 年，死亡 23 例，生存 99 例，生存率 81.15%（99/122），死亡乳腺癌患者乳腺癌组织中 MALAT1 的相对表达量、ERR阳性表达率均明显高于生存患者（P0.01），FADD阳性表达率明显低于生存患者（P0.01）。ROC曲线显示，MALAT1、FADD、ERR联合检测预测乳腺癌患者预后的 AUC 为 0.872（95%CI：0.8130.941），高于各指标单独检测。结论结论MALAT1、FADD及ERR在乳腺癌组织中异常表达，可能与患者临床分期、预后有关，上述因子联合检测对乳腺癌患者预后的评估价值较高。关键词关键词：乳腺癌；肺腺癌转移相关转录本1；Fas相关死亡结构域蛋白；雌激素相关受体；预后中图分类号中图分类号：R R737737.9 9文献标志码文献标志码：AdoiAdoi：10.11877/j.issn.1672-1535.2023.21.03.13Expression of metastasis associated lung adenocarcinoma transcriptExpression of metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1 1,Fas-Fas-associated death domain proteinassociated death domain protein,estrogen-related receptorestrogen-related receptor in breastin breastcancer and its relationship with clinical stage and prognosiscancer and its relationship with clinical stage and prognosisHAN Xiaogang,MENG Qingjie,LIU Xianghua,YIN Yulong,ZHAO Xinhui,ZHANG Haomeng,NIU Haozhen,LI Mengfei,LYU Yonggang#Department of Thyroid and Breast Surgery,the Affiliated Hospital of Northwest University/Xi an No.3 Hospital,Xi an 710018,Shaanxi,ChinaAbstractAbstract:ObjectiveObjectiveTo explore the metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1(MALAT1),Fas-associated death domain protein(FADD),estrogen-related receptor (ERR)in breast cancer and its relationship with clinicalstage and prognosis.MethodMethodA total of 122 breast cancer patients were selected,and their breast cancer tissue and corresponding para-cancerous tissue were collected.The relative expression of MALAT1 was detected by reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR).The expression of FADD and ERR protein were detected by immunohistochemical method.The expression of MALAT1,FADD,ERR in breast cancer tissue of breast cancer patients with different clinical stage and prognosis were compared.The receiver operating characteristic(ROC)curve was drawn,and the area underthe curve(AUC)was calculated to evaluate the predictive value of MALAT1,FADD,and ERR alone and in combination on the prognosis of breast cancer patients.ResultResultThe relative expression of MALAT1 and the positive rate ofERR in breast cancer tissue were significantly higher than those in para-cancerous tissue(P0.01),and the positive rateof FADD was significantly lower than that in para-cancerous tissue(P0.01).The relative expression of MALAT1 andthe positive rate of ERR in breast cancer tissue of patients with stage III-IV breast cancer tissue were significantly higherthan those of stage I-II(P0.01),and the positive rate of FADD was significantly lower than that of stage I-II(P0.01).During the one-year follow-up,23 cases died and 99 cases survived,with a survival of 81.15%(99/122).The relative expression of MALAT1 and the positive rate of ERR in breast cancer tissue of dead breast cancer patients were significantly higher than those of surviving patients(P0.01),and the positive rate of FADD was significantly lower than that of surviving patients(P0.01).The ROC curve showed that the AUC of the combined detection of MALAT1,FADD,andERR in predicting the prognosis of breast cancer patients was 0.872(95%CI:0.813-0.941),which was higher than thatof the individual detection of each index.ConclusionConclusionMALAT1,FADD,and ERR are abnormally expressed in breast#通信作者（corresponding author），邮箱：286ONCOLOGY PROGRESS,Feb 2023 V ol.21 No.3cancer tissues.The foregoing factors may be related to the clinical stage and prognosis of patients,and their detection hasa high value in the evaluation of the prognosis of breast cancer patients.Key wordsKey words:breast cancer;metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1;Fas-associated death domain protein;estrogen-related receptor;prognosisOncol Prog,2023,21(3)乳腺癌是威胁女性生命健康的常见恶性肿瘤，发病率较高。近年来，中国乳腺癌发病率呈逐渐上升趋势，且逐渐年轻化1。手术、药物等综合治疗是目前临床常用的乳腺癌治疗方法，但中晚期乳腺癌患者5年生存率仍不高。随细胞、分子生物学研究的不断进展，细胞增殖与凋亡紊乱在肿瘤形成中的作用备受关注2。乳腺癌发生发展与细胞增殖失控、分化异常、凋亡失衡密切相关。国内外研究发现，长链非编码 RNA（long non-codingRNA，lncRNA）肺腺癌转移相关转录本 1（metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT1）、Fas 相关死亡结构域蛋白（Fas-associated death domain protein，FADD）、雌激素相关受体（estrogen-related receptor，ERR）在乳腺癌细胞迁移、凋亡等过程中发挥重要作用3-4。但目前关于上述因子与乳腺癌临床分期、预后关系的报道较 少。鉴 于 此，本 研 究 探 讨 MALAT1、FADD、ERR在乳腺癌中的表达及与患者临床分期和预后的关系，现报道如下。1 1资料与方法资料与方法1 1.1 1 一般资料一般资料选取2019年3月至2020年12月西北大学附属医院西安市第三医院收治的乳腺癌患者。纳入标准：符合 中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范（2015 版）5中关于乳腺癌的诊断标准，经手术或穿刺病理检查确诊；未进行放疗、化疗及免疫治疗等；无转移病灶；临床资料完整。排除标准：合并心、脑等部位恶性肿瘤；既往乳腺癌手术史；合并全身感染性疾病；合并严重意识、交流障碍。依据纳入和排除标准，本研究共纳入 122例乳腺癌患者，均为女性；年龄 2778岁，平均（45.635.31）岁；临床分期：期68例，期 54 例。本研究经医院伦理委员会批准通过，所有患者均知情同意。1 1.2 2 逆转录聚合酶链反应逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-reverse transcription-polymerasechainreactionpolymerasechainreaction，RT-PCRRT-PCR）检 测检 测MALATMALAT1 1的相对表达量的相对表达量取 122 例乳腺癌患者的乳腺癌组织及距瘤体5 cm 以上的癌旁组织，采用 Trizol 试剂提取总RNA。根据反转录试剂盒说明书，采用 10 l反应体系合成互补DNA（complementary DNA，cDNA），取 25 l 反应体系进行 PCR 反应，95 2 min，95 15 s，60 60 s，共 40个循环。采用 2%的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。以甘油醛-3-磷酸脱氢 酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）为内参，采用 2-Ct法计算 MALAT1 的相对表达量。MALAT1 正向引物：5-GAATTGCGTCATTTAAAGCCTAGTT-3，反 向 引 物：5-GTTTCATCCTACCACTCCCAATTAAT-3；GAPDH正向引物：5-GGGAGCCAAAAGGGTCAT-3，反向引物：5-GAGTCCTTCCACGATACCAA-3。1 1.3 3 免疫组化法检测免疫组化法检测FADDFADD、ERRERR 蛋白的表达情况蛋白的表达情况取 122 例乳腺癌患者的乳腺癌组织及距瘤体5 cm 以上的癌旁组织，脱水，10%甲醛固定，二甲苯透明，常规石蜡包埋，5 m 连续切片。采用免疫组化链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶（streptavidin-peroxidase，SP）法检测 FADD、ERR的表达情况。一抗采用 FADD、ERR兔抗人单克隆抗体，采 用 磷 酸 盐 缓 冲 液（phosphate buffered solution，PBS）作为阴性对照。采用阳性细胞所占比例和染色强度进行结果判定6：无色计 0 分，淡黄色染色计 1 分，棕黄色染色计 2 分，黄褐色染色计 3分；无阳性细胞计 0 分，阳性细胞所占比例10%计 1 分，阳性细胞所占比例 10%49%计 2 分，阳性细胞所占比例 50%75%计 3 分，阳性细胞所占比例75%计 4 分。将染色强度评分与阳性细胞所占比例评分相乘，总分3 分为阴性，3 分为阳性。1 1.4 4 观察指标和评价标准观察指标和评价标准比较乳腺癌组织与癌旁组织中 MALAT1、FADD及ERR的表达情况。比较不同临床分期乳 腺 癌 患 者 乳 腺 癌 组 织 中 MALAT1、FADD 及ERR的表达情况。采用电话或门诊随访的方式对患者进行为期 1 年的随访，随访时间截至 2021年12月，记录患者的预后生存情况，比较不同预后情况乳腺癌患者乳腺癌组织中MALAT1、FADD及ERR的表达情况。绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线，计算曲线下 面 积（area under the curve，AUC），评 估MALAT1、FADD、ERR单独及联合检测对乳腺癌患者预后的预测价值。1 1.5 5 统计学方法统计学方法采用 SPSS 22.0 软件对所有数据进行统计分析，计量资料以均数标准差（x-s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用2检验；以P0.05为差异有统计学意义。287癌症进展2023年2月第21卷第3期2 2结果结果2 2.1 1 MALATMALAT1 1、FADDFADD及及ERRERR 表达情况的比较表达情况的比较乳腺癌组织中 MALAT1的相对表达量明显高于癌旁组织，FADD 阳性表达率明显低于癌旁组织，ERR阳性表达率明显高于癌旁组织，差异均有统计学意义（P0.01）。（表1）2 2.2 2 不 同 临 床 分 期 乳 腺 癌 患 者 乳 腺 癌 组 织 中不 同 临 床 分 期 乳 腺 癌 患 者 乳 腺 癌 组 织 中MALATMALAT1 1、FADDFADD及及ERRERR 表达情况的比较表达情况的比较期乳腺癌患者乳腺癌组织中 MALAT1的相对表达量明显高于期患者，FADD 阳性表达率明显低于期患者，ERR阳性表达率明显高于期患者，差异均有统计学意义（P0.01）。（表2）2 2.3 3 不 同 预 后 情 况 乳 腺 癌 患 者 乳 腺 癌 组 织 中不 同 预 后 情 况 乳 腺 癌 患 者 乳 腺 癌 组 织 中MALATMALAT1 1、FADDFADD及及ERRERR 表达情况的比较表达情况的比较随访 1 年，死亡 23 例，生存 99 例，生存率为81.15%（99/122）。死亡乳腺癌患者乳腺癌组织中MALAT1的相对表达量明显高于生存患者，FADD阳性表达率明显低于生存患者，ERR阳性表达率明显高于生存患者，差异均有统计学意义（P0.01）。（表3）2 2.4 4 MALATMALAT1 1、FADDFADD、ERRERR 单独及联合检测对乳单独及联合检测对乳腺癌患者预后的预测价值腺癌患者预后的预测价值ROC 曲线显示，MALAT1、FADD、ERR联合检测预测乳腺癌患者预后的AUC为0.872（95%CI：0.8130.941），灵敏度、特异度分别为 0.916、0.841，均高于各指标单独检测。（表4、图1）3 3讨论讨论相关研究显示，肿瘤增殖、浸润及侵袭与新生血管生成、肿瘤微环境密切相关7。MALAT1、FADD及ERR等因子在乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭等过程中有重要作用，分析上述因子的水平变化与患者预后的关系，可为临床乳腺癌靶向治疗、评估患者预后提供参考意见8。MALAT1是存在于多种细胞、组织中的lnRNA，且已被证实与肿瘤患者的预后、转移有关。既往研究发现，乳腺癌细胞在缺氧状况下，MALAT1呈高表达9。研究证实，MALAT1 在肺癌、口腔鳞状细胞癌等多种肿瘤中异常表达，可能参与了肿瘤细胞分化、凋亡等过程10。FADD 基因最早是由Kim 等克隆的，通过 caspase 级联反应介导多种细胞的凋亡过程，而肿瘤进展与细胞凋亡失控密切相关11。Nguyen等12研究指出，FADD在乳腺癌患者中表达下调，且与患者临床分期、分化程度有关，FADD 阳性表达率越高，患者的预后越好。FADD作为影响细胞凋亡过程的因子，亦可能是影响乳腺癌患者预后的关键。ERR是孤儿核受体家族成员之一，在卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌等肿瘤中过表达，且与肿瘤细胞侵袭及患者的预后有关。Yoriki等13研究显示，ERR表达异常可诱发乳腺癌细胞的体外迁移、侵袭及上皮-间充质转化，抑制ERR的表达可降低肿瘤细胞的体外生长与肺转移。因此，认为ERR可促进乳腺癌的恶性生物学行为。本研究结果示，乳腺癌组织中 MALAT1 的相对表达量明显高于癌旁组织，FADD阳性表达率明显低于癌旁组织，ERR阳性表达率明显高于癌旁组织，且随着临床分期的增高，MALAT1 水平、ERR阳性表达率随之增高，FADD 阳性表达率随表表1 1乳腺癌组织与癌旁组织中乳腺癌组织与癌旁组织中MALATMALAT1 1、FADDFADD及及ERRERR 表表达情况的比较达情况的比较组织乳腺癌组织（n=122）癌旁组织（n=122）t/2值P值MALAT1相对表达量（x-s）3.010.101.890.0410.0540.01FADD阳性n（%）51（41.80）110（90.16）63.5600.01ERR阳性n（%）76（62.30）41（33.61）20.1150.01表表2 2不同临床分期乳腺癌患者乳腺癌组织中不同临床分期乳腺癌患者乳腺癌组织中MALATMALAT1 1、FADDFADD及及ERRERR 表达情况的比较表达情况的比较分期（n=68）（n=54）t/2值P值MALAT1相对表达量（x-s）2.120.104.130.0717.5660.01FADD阳性n（%）41（60.29）10（18.52）21.5910.01ERR阳性n（%）29（42.65）47（87.04）25.2500.01表表3 3不同预后情况乳腺癌患者乳腺癌组织中不同预后情况乳腺癌患者乳腺癌组织中MALATMALAT1 1、FADDFADD及及ERRERR 表达情况的比较表达情况的比较预后生存（n=99）死亡（n=23）t/2值P值MALAT1相对表达量（x-s）1.960.177.530.2914.8530.01FADD阳性n（%）50（50.51）1（4.35）16.3440.01ERR阳性n（%）55（55.56）21（91.30）10.1540.01表表4 4MALATMALAT1 1、FADDFADD、ERRERR 单独及联合检测对乳腺癌患单独及联合检测对乳腺癌患者预后的预测价值者预后的预测价值指标MALAT1FADDERR三者联合AUC0.7420.7810.7310.87295%CI0.6370.8480.6990.8680.6280.8220.8130.941灵敏度0.6880.7720.7010.916特异度0.6370.6570.6740.841图图1 1MALATMALAT1 1、FADDFADD、ERRERR 单独及联合检测预测乳腺癌单独及联合检测预测乳腺癌患者预后的患者预后的ROCROC曲线曲线灵敏度0.20.40.60.81.001-特异度0.40.81.0MALAT1参考线0.20FADD0.6三者联合ERR288ONCOLOGY PROGRESS,Feb 2023 V ol.21 No.3之 降 低。表 明 乳 腺 癌 组 织 中 MALAT1、ERR、FADD 异常表达可能参与了乳腺癌的发生发展过程，肿瘤组织中上述因子的表达情况可作为肿瘤细胞恶性转移的标准之一。通过比较不同预后乳腺癌患者 MALAT1、FADD 及 ERR的表达情况发现，死亡乳腺癌患者乳腺癌组织中 MALAT1 的相对表达量明显高于生存患者，FADD阳性表达率明显低于生存患者，ERR阳性表达率明显高于生存患者。表明 MALAT1、FADD 及 ERR在评估乳腺癌患者预后中亦具有一定价值。为进一步评估上述因子对乳腺癌患者预后的预测价值，本研究ROC曲线显示，MALAT1、FADD及ERR联合检测预测乳腺癌预后的 AUC 最高。研究发现，调节MALAT1、ERR信号通路及 FADD 凋亡信号通路可抑制肿瘤细胞的进展与转移，侧面反映了上述因子对乳腺癌患者的预后具有一定预测价值14-15，与本研究报道相符。综上所述，MALAT1、FADD 及 ERR在乳腺癌组织中异常表达，可能与患者临床分期、预后有关，上述因子联合检测对乳腺癌患者预后的评估价值较高。参参 考考 文文 献献1 邵长秀,周鹏,李小磊,等.内乳淋巴结评估及处理在乳腺癌治疗和预后评估中的应用研究进展J.山东医药,2022,62(8):95-99.2 张小艳,李清祥,刘 勇,等.HMGB1与乳腺癌患者临床病理学特征及免疫指标的相关性研究J.中国癌症杂志,2021,31(9):783-788.3 彭浩,武玉东,李健,等.长链非编码RNA MALAT-1通过EZH2-catenin信号通路调控肾癌细胞的增殖、凋亡及侵袭J.现代泌尿外科杂志,2020,25(1):63-67.4 Hollomon MG,Patterson LN,Santiago-OFarrill J,et al.Knock down of Fas-associated protein with death domain(FADD)sensitizes osteosarcoma to TNF-induced celldeathJ.J Cancer,2020,11(7):1657-1667.5 中国抗癌协会乳腺癌专业委员会.中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2015版)J.中国癌症杂志,2015,25(9):692-754.6 刘妮,李淑华,梁英杰,等.免疫组化染色阳性对照的设立、制作与应用J.中国组织化学与细胞化学杂志,2013,22(5):439-441.7 Park SA,Choi BJ,Kim W,et al.Abstract 4001:Gremlin-1augments the estrogen-related receptor signaling:implications for progression of breast cancer in synergistic mannerJ.Cancer Res,2018,78(13 Supplement):4001-4003.8 唐静,贾昱娴,农丽,等.MALAT-1和 HIF-1在三阴型乳腺癌中表达及临床意义J.重庆医学,2019,48(10):1642-1645.9 Orlandi E,Chiara Z,Albino P,et al.Lack of association ofmetastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1variants with melanoma skin cancer riskJ.Melanoma Res,2019,29(6):660-663.10 张强,曹世杰,康宁.四氢姜黄素增强姜黄素抗乳腺癌作用机制初探J.中国药理学与毒理学杂志,2019,33(9):730.11 刘大锐,李报春,李怀东.细胞凋亡核心基因Caspase家族的研究进展J.中国医药导刊,2020,22(11):800-805.12 Nguyen DD,Lee DG,Kim S,et al.Integrative bioinformatics and functional analyses of GEO,ENCODE,andTCGA reveal FADD as a direct target of the tumor suppressor BRCA1J.Int J Mol Sci,2018,19(5):1458.13 Yoriki K,Mori T,Kokabu T,et al.Estrogen-related receptoralphainducesepithelial-mesenchymaltransitionthrough cancer-stromal interactions in endometrial cancerJ.Sci Rep,2019,9(1):6697.14 苏晓,张万林,张金波.雌激素相关受体在三阴性乳腺癌中的表达和临床意义J.中国妇幼保健,2021,36(7):1630-1633.15 Madhu Krishna B,Chaudhary S,Mishra DR,et al.Estrogen receptor dependent regulation of estrogen related receptor and its role in cell cycle in breast cancerJ.BMCCancer,2018,18(1):607.（收稿日期：2022-05-07）（上接第 285 页）17 DAndrea D,Soria F,Abufaraj M,et al.Comparative effectiveness of intravesical BCG-tice and BCG-moreau in patients with non-muscle-invasive bladder cancerJ.ClinGenitourin Cancer,2020,18(1):20-25.18 刘明明,柴浩林,刘建平.非肌层浸润性膀胱癌经尿道膀胱肿瘤电切术后吡柔比星灌注化疗治疗的临床效果J.中国肿瘤临床与康复,2020,27(6):704-706.19 陈蔚军,马玉帛,章薇,等.YKL-40与中枢神经系统肿瘤J.中华神经外科疾病研究杂志,2015,14(5):468-470.20 Yang ZX,Fu BQ,Zhou LQ,et al.RRM1 predicts clinicaloutcome of high-andintermediate-risk non-muscle-invasive bladder cancer patients treated with intravesical gemcitabine monotherapyJ.BMC Urol,2020,19(1):69.（收稿日期：2022-03-25）289